Name: dissection and culture of mouse dopaminergic and striatal explants in three-dimensional collagen matrix assays
Uploaded: 2012-03-23T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Culture of Mouse Dopaminergic and Striatal Explants in Three-Dimensional Collagen Matrix Assays at JoVE.com

وقد تم تطوير فحص مصفوفة الكولاجين وتحسن من عمل العديد من المجموعات البحثية المختلفة خلال العقدين أو الثلاثة الماضية. النهج وصفها هنا لexplants الدوبامين والجسم المخطط تستفيد كثيرا من هذه الدراسات. وبالإضافة إلى ذلك، فإن الكتاب أود أن أشكر Asheeta براساد لمساعدتها في إنشاء ثقافات يزدرع الجسم المخطط. وقد تم تمويل العمل في المختبر من قبل منظمة حدود الإنسان برنامج العلوم (شهادة جائزة التنمية)، والمنظمة الهولندية للبحوث الصحية والتنمية (ZonMW-VIDI وZonMW TOP-)، والاتحاد Europanian (mdDA-NeuroDev، FP7/2007-2011 ، جرانت 222999) (لRJP)، والمنظمة الهولندية للبحوث العلمية (TopTalent؛ إلى ERES).

1. إعداد الكولاجين ذيل الجرذ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> جمع 6-10 ذيول الفئران الكبار (كان من الممكن لتخزين المخلفات في -20 درجة مئوية حتى استخدامها). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> نقع ذيول في الايثانول 95٪ بين عشية وضحاها في درجة حرارة الغرفة (RT). </li></ol><p ...

<ol>
	<li>van den Heuvel, D. M., Pasterkamp, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Getting+connected+in+the+dopamine+system.">Getting connected in the dopamine system.</a> Prog. Neurobiol. 85, 75-93 (2008).</li><li>Lobo, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+profiling+of+striatonigral+and+striatopallidal+medium+spiny+neurons+past,+present,+and+future.">Molecular profiling of striatonigral and striatopallidal medium spiny neurons past, present, and future.</a> Int. Rev. Neurobiol. 89, 1-35 (2009).</li><li>Dickson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+axon+guidance.">Molecular mechanisms of axon guidance.</a> Science. 298, 1959-1964 (2002).</li><li>Chilton, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecules+mechanisms+of+axon+guidance.">Molecules mechanisms of axon guidance.</a> Dev. Biol. 292, 13-24 (2006).</li><li>Lumsden, A. G., Davies, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemotropic+effect+of+specific+target+epithelium+in+the+developing+mammalian+nervous+system.">Chemotropic effect of specific target epithelium in the developing mammalian nervous system.</a> Nature. 323, 538-539 (1986).</li><li>Tessier-Lavigne, M., Placzek, M., Lumsden, A. G., Dodd, J., Jessel, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemotropic+guidance+of+developing+axons+in+the+mammalian+central+nervous+system.">Chemotropic guidance of developing axons in the mammalian central nervous system.</a> Nature. 336, 775-778 (1988).</li><li>Kolk, S. M., Gunput, R. A., Tran, T. S., van den Heuvel, D. M., Prasad, A. A., Hellemons, A. J., Adolfs, Y., Ginty, D. D., Kolodkin, A. L., Burbach, J. P., Smidt, M. P., Pasterkamp, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Semaphorin+3F+is+a+bifunctional+guidance+cue+for+dopaminergic+axons+and+controls+their+fasciculation,+channeling,+rostral+growth,+and+intracortical+targeting.">Semaphorin 3F is a bifunctional guidance cue for dopaminergic axons and controls their fasciculation, channeling, rostral growth, and intracortical targeting.</a> J. Neurosci. 29, 12542-12557 (2009).</li><li>Fenstermaker, A. G., Prasad, A. A., Bechara, A., Adolfs, Y., Tissir, F., Goffinet, A., Zou, Y., Pasterkamp, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wnt/planar+cell+polarity+signaling+controls+the+anterior-posterior+organization+of+monoaminergic+axons+in+the+brainstem.">Wnt/planar cell polarity signaling controls the anterior-posterior organization of monoaminergic axons in the brainstem.</a> J. Neurosci. 30, 16053-16064 (2010).</li><li>Arlotta, P., Molyneaux, B. J., Jabaudon, D., Yoshida, Y., Macklis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ctip2+controls+the+differentiation+of+medium+spiny+neurons+and+the+establishment+of+the+cellular+architecture+of+the+striatum.">Ctip2 controls the differentiation of medium spiny neurons and the establishment of the cellular architecture of the striatum.</a> J. Neurosci. 28, 622-632 (2008).</li><li>De Wit, J., Toonen, R. F., Verhage, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix-dependent+local+retention+of+secretory+vesicle+cargo+in+cortical+neurons.">Matrix-dependent local retention of secretory vesicle cargo in cortical neurons.</a> J. Neurosci. 29, 23-37 (2009).</li><li>G&#228;hwiler, B. H., Capogna, M., Debanne, D., McKinney, R. A., Thompson, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organotypic+slice+cultures:+a+technique+has+come+of+age.">Organotypic slice cultures: a technique has come of age.</a> Trends Neurosci. 20, 471-477 (1997).</li></ol>

وصف فحص مصفوفة الكولاجين هنا قد استخدمت من قبل وتحسين معامل عديدة ومختلفة في العقود الماضية للتحقيق في مجموعة متنوعة من جزيئات توجيه محور عصبي، ونظم الخلايا العصبية (على سبيل المثال انظر المراجع 5-8). وقد أظهرت هذه الدراسات أن هذا الاختبار هو أداة قوية لدراسة الآثار و?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> الجنين مصل العجل </td><td> BioWhittaker </td><td> 14-801F </td><td></td></tr><tr><td> الجلوتامين (200MM) </td><td> PAA </td><td> M11-004 </td><td></td></tr><tr><td> Hepes </td><td> VWR الدولية </td><td> 441476L </td><td></td></tr><tr><td> β-المركابتويثانول </td><td> ميرك </td><td> 444203 </td><td></td></tr><tr><td> وسائل الإعلام الأساسية الدنيا (MEM) </td><td> Gibco </td><td> 61100-087 </td><td></td></tr><tr><td> Neurobasal </td><td> Gibco </td><td> 21103-049 </td><td></td></tr><tr><td> B27 </td><td> Gibco </td><td> 17504-044 </td><td></td></tr><tr><td> ليبوفيتز لL-15 متوسطة </td><td> Gibco </td><td&gt; 11415-049 </td><td></td></tr><tr><td> البنسلين الستربتوميسين </td><td> Gibco </td><td> 15070-063 </td><td></td></tr><tr><td> إطالة الذهب الكاشف Antifade </td><td> إينفيتروجن </td><td> P36930 </td><td></td></tr><tr><td> غسيل الأنابيب </td><td> طيف مختبرات </td><td> 132660 </td><td></td></tr><tr><td> أرنب المضادة للالتيروسين هيدروكسيلاز </td><td> PEL-فريز </td><td> P40101-0 </td><td></td></tr><tr><td> أرنب المضادة للDarpp32 (H-62) </td><td> سانتا كروز، </td><td> SC-11365 </td><td></td></tr><tr><td> الماوس المضادة للβIII تويولين </td><td> سيغما </td><td> T8660 </td><td></td></tr><tr><td> وصفت اليكسا فلور الأجسام المضادة الثانوية </td><td> إينفيتروجن </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

dissection and culture of mouse dopaminergic and striatal explants in three-dimensional collagen matrix assays

الدماغ المتوسط ​​مشروع الدوبامين العصبية (mdDA) عبر حزمة الدماغ الأمامي وسطي نحو عدة مناطق في telencephalon، بما في ذلك المخطط 1. بالتبادل، شائك الخلايا العصبية المتوسطة في المخطط التي تؤدي إلى المسار (مباشر) مخططي سودائي عصب المادة السوداء 2. تطوير هذه المناطق محور عصبي يتوقف على اتخاذ إجراءات اندماجي من عدد كبير من نمو محور عصبي والعظة التوجيه بما في ذلك الجزيئات التي تم إصدارها من قبل neurites أو المناطق المستهدفة من قبل (وسيطة) 3،4. ويمكن دراسة هذه العوامل القابلة للذوبان في المختبر بواسطة mdDA زراعة و / أو explants الجسم المخطط في مصفوفة الكولاجين الذي يوفر الركيزة ثلاثي الأبعاد للمحاور عصبية محاكاة البيئة خارج الخلية. وبالإضافة إلى ذلك، مصفوفة الكولاجين يسمح لتشكيل التدرجات مستقرة نسبيا من البروتينات الصادرة عن explants الأخرى أو خلايا وضعت في محيط (انظر على سبيل المثال المراجع 5 و 6). نحن هنا وصف طرائق بورification الكولاجين ذيل فأر، microdissection من explants الدوبامين والجسم المخطط وثقافتهم في المواد الهلامية الكولاجين واللاحقة تحليل المناعى والكمية. أولا، العقل المدبر للأجنة الفئران E14.5 هي المعزولة والدوبامين وmicrodissected explants الجسم المخطط. وبعد ذلك هذه explants (CO) مثقف في المواد الهلامية الكولاجين في coverslips لمدة 48 إلى 72 ساعة في المختبر. بعد ذلك، إسقاطات محواري وتصور باستخدام علامات العصبية (هيدروكسيلاز التيروزين على سبيل المثال، DARPP32، أو تويولين βIII) وكميا نمو محور عصبي والاستجابات محور عصبي جذاب أو مثير للاشمئزاز. هذه الخلايا العصبية هو إعداد أداة مفيدة لفي الدراسات المختبرية من الآليات الخلوية والجزيئية للنمو محور عصبي mesostriatal ومخططي سودائي والتوجيه خلال التنمية. باستخدام هذا الفحص، فإنه من الممكن أيضا لتقييم الآخرين (وسيطة) أهداف لمحاور عصبية الدوبامين والجسم المخطط أو لاختبار الاشارات الجزيئية محددة.

Watch this Scientific Journal Video about Dissection and Culture of Mouse Dopaminergic and Striatal Explants in Three-Dimensional Collagen Matrix Assays at JoVE.com

Dissection and Culture of Mouse Dopaminergic and Striatal Explants in Three-Dimensional Collagen Matrix Assays

وتستخدم Explants من المخ الأوسط نظام الدوبامين والمخطط في الكولاجين فحص مصفوفة لل<em&gt; في المختبر</em&gt; تحليل مسار التنمية mesostriatal ومخططي سودائي. ويمكن في هذا الاختبار يمكن التلاعب ثمرة محواري والتوجيه وكميا. يمكن أيضا أن يتم تعديل لتقييم مناطق أخرى أو منبهات الجزيئية.

تشريح والثقافة من الدوبامين والفأر Explants العقدة المخططة في ثلاثي الأبعاد فحوصات مصفوفة الكولاجين

Midbrain dopamine (mdDA) neurons project via the medial forebrain bundle towards several areas in the telencephalon, including the striatum1. ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

تشريح والثقافة من الخلايا العصبية من النخاع الشوكي صواري الجنينية

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Dissection and Culture of Chick Statoacoustic Ganglion and Spinal Cord Explants in Collagen Gels for Neurite Outgrowth Assays

تشريح العقدة والثقافة والفرخ Statoacoustic Explants النخاع الشوكي في الهلام الكولاجين لفحوصات ثمرة Neurite

The sensory organs of the chicken inner ear are innervated by the peripheral processes of statoacoustic ganglion (SAG) neurons. Sensory organ innervation ...

A Functional Motor Unit in the Culture Dish: Co-culture of Spinal Cord Explants and Muscle Cells

وحدة للسيارات وظيفية في صحن الثقافة: شارك في ثقافة Explants النخاع الشوكي وخلايا العضلات

Human primary muscle cells cultured  aneurally in monolayer rarely contract spontaneously because, in the absence of  a nerve component, cell ...

Assessing Neurodegenerative Phenotypes in Drosophila Dopaminergic Neurons by Climbing Assays and Whole Brain Immunostaining

Assessing Neurodegenerative Phenotypes in Drosophila Dopaminergic Neurons by Climbing Assays and Whole Brain Immunostaining

تقييم الظواهر الاعصاب في<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; الخلايا العصبية الدوبامين عن طريق تسلق فحوصات والجامعة المناعية الدماغ

Drosophila melanogaster is a valuable model organism to study aging and pathological degenerative processes in the nervous system. The advantages of the ...

Isolation and Quantification of Botulinum Neurotoxin From Complex Matrices Using the BoTest Matrix Assays

العزلة والكمي لالبوتولينوم السموم العصبية من مصفوفات مجمع باستخدام مصفوفة BoTest فحوصات

Accurate detection and quantification of botulinum neurotoxin (BoNT) in complex matrices is required for pharmaceutical, environmental, and food sample ...

Primary Culture of Mouse Dopaminergic Neurons

الثقافة الابتدائية من الخلايا العصبية الدوبامين ماوس

Dopaminergic neurons represent less than 1% of the total number of neurons in the brain. This low amount of neurons regulates important brain functions ...

Long-term Time Lapse Imaging of Mouse Cochlear Explants

على المدى الطويل الوقت الفاصل بين التصوير من الفأر القوقعة إإكسبلنتس

Here we present a method for long-term time-lapse imaging of live embryonic mouse cochlear explants. The developmental program responsible for building ...

Isolation, Culture and Long-Term Maintenance of Primary Mesencephalic Dopaminergic Neurons From Embryonic Rodent Brains

العزلة والثقافة وطويل الأجل صيانة الابتدائية الدماغ المتوسط ​​الدوبامين العصبية من المخ الجنينية القوارض

Degeneration of mesencephalic dopaminergic (mesDA) neurons is the pathological hallmark of Parkinson&#8217;s diseae. Study of the biological processes ...

Protocol for Three-dimensional Confocal Morphometric Analysis of Astrocytes

بروتوكول للثلاثي الأبعاد متحد البؤر تحليل المظهرية من النجمية

As glial cells in the brain, astrocytes have diverse functional roles in the central nervous system. In the presence of harmful stimuli, astrocytes modify ...

Fiber Connections of the Supplementary Motor Area Revisited: Methodology of Fiber Dissection, DTI, and Three Dimensional Documentation

وصلات الألياف من منطقة السيارات التكميلية إعادة النظر: منهجية تشريح الألياف، وزارة التجارة والصناعة، وثلاثة الأبعاد وثائق

The purpose of this study is to show the methodology for the examination of the white matter connections of the supplementary motor area (SMA) complex ...