Name: hybridization in situ of salivary glands, ovaries, and embryos of vector mosquitoes
Uploaded: 2012-06-28T12:00:00
Duration: 10 min 58 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Hybridization in situ of Salivary Glands, Ovaries, and Embryos of Vector Mosquitoes at JoVE.com

فإن الكتاب أود أن أشكر ماريكا والترز للحصول على المشورة في تهجين النامية في طرق الموقع للأنسجة لينة وGoltsev يوري لمناقشة بروتوكولات لتهجين في الموضع الطبيعي للأجنة أنوفيليس غامبياي، والتي تم تكييفها وتعديلها في وقت لاحق لوضع البروتوكول وصفها هنا لتهجين في الموقع من الزاعجة والأجنة الكيولكس. نعترف أيضا توصيات مفيدة قدمها باري آدم وKosman ديفيد. نشكر أوزفالدو Marinotti للنقاش العلمي وتحرير نص البروتوكول.

<ol>
	<li>Juhn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+mapping+of+gene+expression+in+the+salivary+glands+of+the+dengue+vector+mosquito,+Aedes+aegypti.">Spatial mapping of gene expression in the salivary glands of the dengue vector mosquito, Aedes aegypti.</a> Parasit. Vectors. 4, 1 (2011).</li><li>Coleman, J., Juhn, J., James, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+midgut+and+salivary+glands+from+Ae.+aegypti+mosquitoes.">Dissection of midgut and salivary glands from Ae. aegypti mosquitoes.</a> J. Vis. Exp. (5), e228 (2007).</li><li>Benedict, M. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissecting+Plasmodium-infected+Mosquitoes:+Salivary+Glands,+Chapter.+5.4.2.">Dissecting Plasmodium-infected Mosquitoes: Salivary Glands, Chapter. 5.4.2.</a> Methods in Anopheles Research. , (2007).</li><li>Sappington, T. W., Brown, M. R., Raikhel, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Culture+and+analysis+of+insect+ovaries,+Chapter.+42.3.">Culture and analysis of insect ovaries, Chapter. 42.3.</a> The Molecular Biology of Insect Disease Vectors: A methods manual. , (1997).</li><li>Goltsev, Y., Hsiong, W., Lanzaro, G., Levine, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+combinations+of+gap+repressors+for+common+stripes+in+Anopheles+and+Drosophila+embryos.">Different combinations of gap repressors for common stripes in Anopheles and Drosophila embryos.</a> Dev. Biol. 275, 435-446 (2004).</li><li>Benedict, M. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anopheles+Embryo+Fixation,+Chapter.+3.7.">Anopheles Embryo Fixation, Chapter. 3.7.</a> Methods in Anopheles Research. Malaria Research and Reference Reagent Resource Center (MR4). , (2007).</li><li>Juhn, J., James, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=oskar+gene+expression+in+the+vector+mosquitoes,+Anopheles+gambiae+and+Aedes+aegypti.">oskar gene expression in the vector mosquitoes, Anopheles gambiae and Aedes aegypti.</a> Insect Mol. Biol. 15, 363-372 (2006).</li><li>Juhn, J., Marinotti, O., Calvo, E., James, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+structure+and+expression+of+nanos+(nos)+and+oskar+(osk)+orthologues+of+the+vector+mosquito,+Culex+quinquefasciatus.">Gene structure and expression of nanos (nos) and oskar (osk) orthologues of the vector mosquito, Culex quinquefasciatus.</a> Insect Mol. Biol. 17, 545-552 (2008).</li><li>Raminani, L. N., Cupp, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+Embryology+of+Aedes+aegypti+(L.)+(Diptera:+Culicidae).">Early Embryology of Aedes aegypti (L.) (Diptera: Culicidae).</a> Int. J. Insect Morphol. &#38; Embryol. 4, 517-528 (1975).</li><li>Raminani, L. N., Cupp, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryology+of+Aedes+aegypti+(L.)+(Diptera:+Culicidae):+Organogenesis.">Embryology of Aedes aegypti (L.) (Diptera: Culicidae): Organogenesis.</a> Int. J. Insect morphol. &#38; Embryol. 7, 273-296 (1978).</li><li>Ivanova-Kazas, O. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+development+of+Anopheles+maculipennis+Mg.">Embryonic development of Anopheles maculipennis Mg.</a> Izv. Akad. Nauk SSSR ser. Biol. 2, 140-170 (1949).</li><li>Goltsev, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+and+evolutionary+basis+for+drought+tolerance+of+the+Anopheles+gambiae+embryo.">Developmental and evolutionary basis for drought tolerance of the Anopheles gambiae embryo.</a> Dev. Biol. 330, 462-470 (2009).</li><li>Papatsenko, D., Levine, M., Goltsev, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clusters+of+temporal+discordances+reveal+distinct+embryonic+patterning+mechanisms+in+Drosophila+and+Anopheles.">Clusters of temporal discordances reveal distinct embryonic patterning mechanisms in Drosophila and Anopheles.</a> PLoS Biol. 9, e1000584 (2011).</li><li>Davis, C. W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+study+of+larval+embryogenesis+in+the+mosquito+Culex+fatigans+Wiedemann+(Diptera:+Culicidae)+and+the+sheep-fly+Lucilla+seriata+Meigen+(Diptera:+Calliphoridae)+I.+Description+of+embryonic+development.">A comparative study of larval embryogenesis in the mosquito Culex fatigans Wiedemann (Diptera: Culicidae) and the sheep-fly Lucilla seriata Meigen (Diptera: Calliphoridae) I. Description of embryonic development.</a> Aust. J. Zool. 15, 547-579 (1967).</li></ol>

الكتاب ليس لديهم الكشف.

التهجين في بروتوكول تلطيخ الموقع واللونية المقدمة هنا لأنسجة البعوض كله جبل والأجنة هو تقنية مفيدة لتوطين النصوص داخل أجهزة معينة وأنواع الخلايا. هذه الإجراءات هي تحسنا طرقنا ذكرت سابقا، على حد سواء في تبسيط خطوات غسيل واسعة النطاق وتقديم التفاصيل التقنية ومصادر إضافية الكاشف. في تجربتنا، والكشف عن الإشارات اللونية تهجين متفوقة في الحساسية وضوح إشارة تهجين مقارنة مع مخططات كشف مضان مقرها. وعلاوة على ذلك كشف اللونية تلتف حول القضايا المرتبطة تمييز إشارة في الأجنة، والتي هي بطبيعتها لصناعة السيارات في فلوري. القيود في الكشف عن إشارات التهجين يحدث، وعندما يتم استهداف منخفضة وفرة النصوص وتلوين الخلفية هو واضح. زيادة درجة الحرارة إلى 65 درجة تهجين تم العثور على C للحد من الخلفإشارات تهجين الأرض، ولكن ليست بديلا المقترحة لتصميم فريد هدف محدد تحقيقات الحمض النووي الريبي. وقد استخدم هذا البروتوكول لأداء التهجين في الموقع من كل جبل الغدد اللعابية للبعوض الزاعجة، والمبايض والأجنة من أنوفيليس غامبياي، الأنوفيلة stephensi، AE. بعوض الكيولكس والخماسية. هذا الأسلوب ينطبق أيضا على أنسجة أخرى من البعوض، ويفترض من تلك الحشرات الأخرى. بالإضافة إلى ذلك، نحن لتجميع المبادئ التوجيهية للمرة الأولى مقارنة للانطلاق من التطور الجنيني في البعوض الحامل للمرض 3، AE. بعوض، وهي. الغامبية و Cx. fatigans. تم الإبلاغ عن الملاحظات لسلالات معينة من هذه الأنواع الثلاثة، في ظل ظروف تربية حصيف. من المهم أن نلاحظ أن دوام التنموية يمكن أن تختلف عن سلالات مختلفة من أنواع البعوض وتحت ظروف تربية مختلفة. التهجين في الملحق الموقع في الجهود الجارية لاناlyze في transcriptomes من البعوض والمفصليات الأخرى، ويجوز أن يقدم صورة أفضل للتنظيم التعبير الجيني في هذه الكائنات.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليق (اختياري) </td></tr><tr><td> 0.5 متر EDTA </td><td> Ambion </td><td> AM9261 </td><td></td></tr><tr><td> 1M تريس، حمض الهيدروكلوريك </td><td> Ambion </td><td> AM9855G </td><td> pH8.0 </td></tr><tr><td> 10X PBS </td><td> Ambion </td><td> AM9625 </td><td></td></tr><tr><td> 20X SSC </td><td> Ambion </td><td> AM9763 </td><td></td></tr><tr><td> 1.5 مل أنابيب microfuge </td><td> Ambion </td><td> AM12400 </td><td> أقل غموضا من الأنابيب القياسية، ويساعد في تصور عينات </td></tr><tr><td> منزوع الأيونات formamide </td><td> Ambion </td><td> AM9342 </td><td> التخزين في 4 درجات مئوية </td></tr><tr><td> DEPC المياه </td><td> Ambion </td><td> AM9932 </td><td></td></tr><tr><td> بروتين K </td><td> Ambion </td><td> AM2546 </td><td></td></tr><tr><td> 5.25٪ هيبوكلوريت الصوديوم </td><td> أوستن </td><td></td><td> A-1 الماركة </td></tr><tr><td> T3 رنا بوليميراز زائد </td><td> Ambion </td><td> AM2733 </td><td> التخزين عند درجة حرارة -20 درجة مئوية </td></tr><tr><td> T7 رنا بوليميراز </td><td> Ambion </td><td> AM2082 </td><td> التخزين عند درجة حرارة -20 درجة مئوية </td></tr><tr><td> 95٪ من الإيثانول </td><td> فيشر العلمية </td><td> AC61511-0040 </td><td></td></tr><tr><td> Fisherbrand نقل البولي إيثيلين القابل للتصرف الماصات </td><td> فيشر العلمية </td><td> 13-711-7M </td><td></td></tr><tr><td> 37٪ فورمالديهايد </td><td> فيشر العلمية </td><td> F79-500 </td><td></td></tr><tr><td> HPLC الصف الميثانول </td><td> فيشر العلمية </td><td> A452-1 </td><td></td></tr><tr><td> المغنيسيوم كلوريد </td><td> فيشر العلمية </td><td> M87-500 </td><td></td></tr><tr><td> مجهر غطاء زجاجي </td><td> فيشر العلمية </td><td> 12-542A </td><td> 18 X18 ملم </td></tr><tr><td> N-الهيبتان </td><td> فيشر العلمية </td><td> H350-1 </td><td></td></tr><tr><td> ف الزيلين </td><td> فيشر العلمية </td><td> O5082-500 </td><td></td></tr><tr><td> بيركس اللوحة بقعة 9-جيدا </td><td> فيشر العلمية </td><td> 13-748B </td><td> 100x85 ملم </td></tr><tr><td> كلوريد الصوديوم </td><td> فيشر العلمية </td><td> AC32730-0025 </td><td></td></tr><tr><td> هيدروكسيد الصوديوم </td><td> فيشر العلمية </td><td> SS255-1 </td><td></td></tr><tr><td> شرائح المجهر Superfrost / زائد </td><td> فيشر العلمية </td><td> 12-550-15 </td><td> 25x75x1.0 مم </td></tr><tr><td> Davlyn الروتين الشعر المستعار واضح الخطوط الملاحية المنتظمة </td><td> مباشر الشعر </td><td> RED-75R12 </td><td> بولي / الجلد المادة الأساسية في 0،75 × 12 لفة شريط يارد </td></tr><tr><td> أطلق عليه الرصاص عدة TOPOTA الاستنساخ للSequening مع واحد Top10 كيميائيا المختصة E. كولاي </td><td> إينفيتروجن </td><td> K457501 K457540 </td><td> 20 ردود الفعل 40 ردود الفعل </td></tr><tr><td> Sonicated سمك السلمون الحمض النووي الحيوانات المنوية </td><td> إينفيتروجن </td><td> 15632-011 </td><td> التخزين عند درجة حرارة -20 درجة مئوية </td></tr><tr><td> مكافحة digoxigenin-AP شظايا فاب </td><td> روش العلوم التطبيقية </td><td> 1093274 </td><td> التخزين في 4 درجات مئوية </td></tr><tr><td> DIG RNA وضع العلامات مزيج </td><td> روش العلوم التطبيقية </td><td> 1277073 </td><td> التخزين عند درجة حرارة -20 درجة مئوية </td></tr><tr><td> NBT / BCIP الأسهم حل </td><td> روش العلوم التطبيقية </td><td> 1681451 </td><td> التخزين في 4 درجات مئوية </td></tr><tr><td> الكاشف الحظر الغربي </td><td> روش العلوم التطبيقية </td><td> 11921673001 </td><td> التخزين في 4 درجات مئوية </td></tr><tr><td> Saatilene هايتك البوليستر شبكة (330.130) </td><td> الساعاتي طباعة </td><td> 330.34 UO PW </td><td> 330 مواضيع / بوصة، و 34 قطرها ميكرون الصفحات، واللون البرتقالي </td></tr><tr><td> الغليسيرول </td><td> سيغما </td><td> G6279-1 </td><td> 70٪ في PBT </td></tr><tr><td> هيبارين الصوديوم ملح </td><td> سيغما </td><td> H3393 </td><td></td></tr><tr><td> توين 20 </td><td> سيغما </td><td> P1379-500 </td><td></td></tr><tr><td> 37٪ فورمالديهايد </td><td> تيد بيلا </td><td> 18508 </td><td> 10 aliquots مل في أمبولات العنبر </td></tr><tr><td> 16 أوقية. الحاويات ورقة منفردا مع اغطية </td><td> ورقة الشركة </td><td> SOLOKH16AJ8000 </td><td></td></tr><tr><td> البورسليكات الزجاج scintillatقارورة ايون مع قبعة المسمار غير مرتبط </td><td> VWR الدولية </td><td> 66022-128 </td><td> 20 حالة من 500 مل </td></tr><tr><td> مختوم الهواء فقاعة توسيد celluar لف المواد </td><td> VWR الدولية </td><td> 500018-081 </td><td> 10 قدم / لفة 0.188 بوصة سميكة </td></tr><tr><td> دجاج المصل </td><td></td><td></td><td> تم جمع الدم كله سواء من وريد الجناح أو بواسطة ثقب في القلب من الدجاج الأحداث. وقد حضنت الدم في 37 درجة مئوية لمدة 1 ساعة حتى متخثر ثم وضعت على الثلج لمدة 30 دقيقة. تم جمع الدم وطرد في 3000 XG لمدة 10 دقيقة. تم جمع طاف الناتج (توضيح المصل) وتخزينها في -20 درجة مئوية حتى استخدامها. </td></tr></tbody></table> الجدول 4. جدول محدد الكواشف والمعدات اللازمة لتهجين في الموقع.

hybridization in situ of salivary glands, ovaries, and embryos of vector mosquitoes

البعوض الناقل لمجموعة متنوعة من مسببات الأمراض بما في ذلك arboviruses، طفيليات الأوالي والديدان الخيطية. تحقيق النصوص والمنظمين الجينات التي يتم التعبير عنها في الأنسجة التي المضيف البعوض وتتفاعل العوامل المسببة للأمراض، والأجهزة المعنية في استنساخ ذات أهمية كبيرة لوضع استراتيجيات للحد من ينقله البعوض وانتقال المرض وعرقلة التنمية البيض. وقد تم استخدام عدد من الأدوات اللازمة لدراسة والتحقق من صحة تنظيم الزمنية وأنسجة محددة في التعبير الجيني. هنا، نحن تصف البروتوكولات التي وضعت للحصول على المعلومات المكانية، والتي تعزز فهمنا لل، حيث يتم التعبير عن جينات معينة وتتراكم منتجاتها. وقد تم استخدام بروتوكول للتحقق من صحة وصف التعبير وتحديد أنماط تراكم من النصوص في الأنسجة المتصلة الذي ينقله البعوض ناقل للمرض، مثل الغدد اللعابية للإناث، وكذلك المقصورات التحت خلوية من المبيض والأجنة، والتي أعيدفي وقت متأخر لتكاثر البعوض والتنمية. الإجراءات التالية تمثل المنهجية الأمثل أن يحسن كفاءة مختلف الخطوات في هذا البروتوكول من دون خسارة للإشارات تهجين هدف محدد. المبادئ التوجيهية لإعداد مسبار الحمض النووي الريبي، وصفت تشريح الأنسجة الرخوة وإجراءات عامة لتثبيت والتهجين في الجزء ألف، في حين ترد تفاصيل الخطوات المحددة لجمع وتثبيت، قبل التهجين والتهجين للأجنة البعوض في الجزء باء.

Watch this Scientific Journal Video about Hybridization in situ of Salivary Glands, Ovaries, and Embryos of Vector Mosquitoes at JoVE.com

Hybridization in situ of Salivary Glands, Ovaries, and Embryos of Vector Mosquitoes

الزمانية والمكانية تحليل التعبير الجيني لها دور حاسم في علم الجينوم وظيفي. كل جبل تهجين<em&gt; في الموقع</em&gt; هو مفيد لتحديد توطين النصوص داخل أنسجة ومقصورات التحت خلوية. نحن هنا الخطوط العريضة لتهجين<em&gt; في الموقع</em&gt; بروتوكول مع بعض التعديلات لالأنسجة المستهدفة المحددة في البعوض.

تهجين<em&gt; في الموقع</em&gt; من الغدد اللعابية والمبيض والأجنة من البعوض الحامل للمرض

Mosquitoes are vectors for a diverse set of pathogens including arboviruses, protozoan parasites and nematodes.  Investigation of transcripts and gene ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Hybridization in situ of Salivary Glands, Ovaries, and Embryos of Vector Mosquitoes

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

مزيج من الشريط اللاصق على أساس أخذ العينات والإسفار في الموقع تهجين للكشف السريع عن السالمونيلا على المنتجات الطازجة

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Detection of Infectious Virus from Field-collected Mosquitoes by Vero Cell Culture Assay

الكشف عن الفيروسات المعدية التي جمعت من الحقل عن طريق البعوض فيرو خلية الفحص الثقافة

Mosquitoes transmit a number of distinct viruses including important human pathogens such as West Nile virus, dengue virus, and chickungunya virus. Many ...

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

اللعاب، الغدد اللعابية، وجمع اللمف الدموي من القراد اللبود الكتفي

Ticks are found worldwide and afflict humans with many tick-borne illnesses. Ticks are vectors for pathogens that cause Lyme disease and tick-borne ...

Fluorescent in situ Hybridization on Mitotic Chromosomes of Mosquitoes

Fluorescent in situ Hybridization on Mitotic Chromosomes of Mosquitoes

فلوري<em&gt; في الموقع</em&gt; التهجين على الكروموسومات الميتوزى من البعوض

Fluorescent in situ hybridization (FISH) is a technique routinely used by many laboratories to determine the chromosomal position of DNA and RNA probes. ...

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

طريقة لقياس وظيفة الغدة اللعابية في الفئران

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...

Quantitative Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) and Immunofluorescence (IF) of Specific Gene Products in KSHV-Infected Cells

Quantitative Fluorescence In Situ Hybridization FISH and Immunofluorescence IF of Specific Gene Products in KSHV-Infected Cells

الفلورة الكمية في الموقع التهجين (FISH) والفلورة المناعية (IF) من منتجات جينية محددة في الخلايا المصابة KSHV

Mechanistic insight arrives from careful study and quantification of specific RNAs and proteins. The relative locations of these biomolecules throughout ...

Isolation of Salivary Epithelial Cells from Human Salivary Glands for In Vitro Growth as Salispheres or Monolayers

عزل الخلايا الظهارية اللعابية من الغدد اللعابية البشرية للنمو في المختبر كما ساليسفيرس أو الطبقات الأحادية

The salivary glands are a site of significant interest for researchers interested in multiple aspects of human disease. One goal of researchers is to ...

Visualization of Candida albicans in the Murine Gastrointestinal Tract Using Fluorescent In Situ Hybridization

Visualization of Candida albicans in the Murine Gastrointestinal Tract Using Fluorescent In Situ Hybridization

التصور من المبيضات الbicans في الجهاز الهضمي Murine باستخدام التهجين في الموقع الفلورسنت

Candida albicans is a fungal component of the gut microbiota in humans and many other mammals. Although C. albicans does not cause symptoms in most ...

Vector Competence Analyses on Aedes aegypti Mosquitoes using Zika Virus

Vector Competence Analyses on Aedes aegypti Mosquitoes using Zika Virus

تحليلات كفاءة النواقل على بعوض Aedes aegypti باستخدام فيروس زيكا

The procedures presented describe a generalized methodology to infect Aedes aegypti mosquitoes with Zika virus under laboratory conditions to determine ...

Visualization of SARS-CoV-2 using Immuno RNA-Fluorescence In Situ Hybridization

تصور سارس-CoV-2 باستخدام الحمض النووي الريبي المناعي-فلورسينس في التهجين في الموقع

This manuscript provides a protocol for in situ hybridization chain reaction (HCR) coupled with immunofluorescence to visualize severe acute respiratory ...