Name: hybridization in situ of salivary glands, ovaries, and embryos of vector mosquitoes
Uploaded: 2012-06-28T12:00:00
Duration: 10 min 58 s
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लेखकों के कोमल ऊतकों और यूरी Goltsev के लिए स्वस्थानी तरीकों में विकासशील संकरण में सलाह के लिए मैरिका वाल्टर्स एनोफ़ेलीज़ gambiae भ्रूण, जो बाद में रूपांतरित किया गया और संकरण के लिए यहाँ में वर्णित प्रोटोकॉल विकसित करने के लिए संशोधित की बगल में संकरण के लिए प्रोटोकॉल की चर्चा के लिए धन्यवाद करना चाहते हैं एडीज और क्युलेक्स भ्रूण की स्वस्थानी. हम भी उपयोगी एडम पारे और डेविड Kosman के द्वारा दी गई सिफारिशों को स्वीकार करते हैं. हम ओसवाल्डो Marinotti वैज्ञानिक चर्चा के लिए धन्यवाद और प्रोटोकॉल पाठ संपादन.

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	<li>Juhn, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+mapping+of+gene+expression+in+the+salivary+glands+of+the+dengue+vector+mosquito,+Aedes+aegypti.">Spatial mapping of gene expression in the salivary glands of the dengue vector mosquito, Aedes aegypti.</a> Parasit. Vectors. 4, 1 (2011).</li><li>Coleman, J., Juhn, J., James, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+midgut+and+salivary+glands+from+Ae.+aegypti+mosquitoes.">Dissection of midgut and salivary glands from Ae. aegypti mosquitoes.</a> J. Vis. Exp. (5), e228 (2007).</li><li>Benedict, M. 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C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+study+of+larval+embryogenesis+in+the+mosquito+Culex+fatigans+Wiedemann+(Diptera:+Culicidae)+and+the+sheep-fly+Lucilla+seriata+Meigen+(Diptera:+Calliphoridae)+I.+Description+of+embryonic+development.">A comparative study of larval embryogenesis in the mosquito Culex fatigans Wiedemann (Diptera: Culicidae) and the sheep-fly Lucilla seriata Meigen (Diptera: Calliphoridae) I. Description of embryonic development.</a> Aust. J. Zool. 15, 547-579 (1967).</li></ol>

लेखक कोई प्रकटीकरण है.

सीटू और वर्णमिति धुंधला प्रोटोकॉल में संकरण पूरे माउंट मच्छर ऊतकों और भ्रूण के लिए यहाँ प्रस्तुत विशिष्ट अंगों और सेल प्रकार के भीतर टेप के स्थानीयकरण के लिए एक उपयोगी तकनीक है. इन प्रक्रियाओं हमारे पहले की रिपोर्ट के तरीकों पर दोनों व्यापक धोने कदम को व्यवस्थित बनाने और अतिरिक्त तकनीकी जानकारी और अभिकर्मक के सूत्रों उपलब्ध कराने में सुधार कर रहे हैं. हमारे अनुभव में, संकरण संकेतों का पता लगाने वर्णमिति प्रतिदीप्ति आधारित पता लगाने योजनाओं की तुलना में संवेदनशीलता और संकरण संकेत की स्पष्टता में बेहतर है. इसके अलावा वर्णमिति पता लगाने के भ्रूण, जो स्वाभाविक ऑटो फ्लोरोसेंट में संकेत भेदभाव के साथ जुड़े मुद्दों circumvents. संकरण संकेतों का पता लगाने में सीमाएँ होती है, जब कम बहुतायत टेप को लक्षित कर रहे हैं और पृष्ठभूमि धुंधला स्पष्ट है. 65 से संकरण तापमान बढ़ाने डिग्री सेल्सियस वापस कम पाया गया हैजमीन संकरण का संकेत है, लेकिन अद्वितीय विशिष्ट लक्ष्य शाही सेना जांच के डिजाइन के लिए एक विकल्प नहीं है. इस प्रोटोकॉल एडीज aegypti के पूरे माउंट लार की गिल्टी, और अंडाशय और एनोफ़ेलीज़ gambiae, एनोफ़ेलीज़ stephensi, ऐ के भ्रूण के बगल में संकरण प्रदर्शन करने के लिए इस्तेमाल किया गया है. aegypti और क्युलेक्स quinquefasciatus. यह विधि भी अन्य मच्छर के ऊतकों को लागू है, और अन्य कीड़ों के उन संभाव्यतः है. इसके अतिरिक्त, हम तीन वेक्टर मच्छरों, ऐ में भ्रूण के विकास के मंचन के लिए पहली बार तुलनात्मक दिशा निर्देशों के लिए संकलित. aegypti, एक. gambiae और Cx. fatigans. टिप्पणियों विचारशील पालन शर्तों के तहत इन तीन प्रजातियों के विशिष्ट उपभेदों, के लिए सूचित किया गया है. यह नोट करना महत्वपूर्ण है कि विकास समय पाठ्यक्रम मच्छर प्रजातियों के विभिन्न प्रकारों के लिए और विभिन्न पालन शर्तों के तहत भिन्न हो सकते हैं. एना के लिए स्वस्थानी पूरक में hybridizations प्रयासों पर जा रहा हैमच्छरों और अन्य आर्थ्रोपोडा transcriptomes lyze, और इन जीवों में जीन अभिव्यक्ति के नियमन का एक बेहतर तस्वीर उपलब्ध करा सकता है.

<table border="1"><tbody><tr><td> अभिकर्मक का नाम </td><td> कंपनी </td><td> सूचीपत्र संख्या </td><td> टिप्पणियां (वैकल्पिक) </td></tr><tr><td> 0.5 एम EDTA </td><td> Ambion </td><td> AM9261 </td><td></td></tr><tr><td> Tris - एचसीएल 1M </td><td> Ambion </td><td> AM9855G </td><td> pH8.0 </td></tr><tr><td> 10X पीबीएस </td><td> Ambion </td><td> AM9625 </td><td></td></tr><tr><td> 20X एसएससी </td><td> Ambion </td><td> AM9763 </td><td></td></tr><tr><td> 1.5 मिलीलीटर microfuge ट्यूबों </td><td> Ambion </td><td> AM12400 </td><td> कम मानक ट्यूब से अपारदर्शी, नमूने visualizing में एड्स </td></tr><tr><td> विआयनीकृत formamide </td><td> Ambion </td><td> AM9342 </td><td> 4 में भंडारण डिग्री सेल्सियस </td></tr><tr><td> DEPC पानी </td><td> Ambion </td><td> AM9932 </td><td></td></tr><tr><td> Proteinase कश्मीर </td><td> Ambion </td><td> AM2546 </td><td></td></tr><tr><td> 5.25% सोडियम hypochlorite </td><td> ऑस्टिन है </td><td></td><td> एक - एक ब्रांड </td></tr><tr><td> T3 के के पोलीमरेज़ प्लस शाही सेना </td><td> Ambion </td><td> AM2733 </td><td> -20 डिग्री सेल्सियस पर भंडारण </td></tr><tr><td> T7 शाही सेना पोलीमरेज़ </td><td> Ambion </td><td> AM2082 </td><td> -20 डिग्री सेल्सियस पर भंडारण </td></tr><tr><td> 95% इथेनॉल </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> AC61511-0040 </td><td></td></tr><tr><td> Fisherbrand डिस्पोजेबल पॉलीथीन हस्तांतरण pipettes </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> 13-711 - 7m </td><td></td></tr><tr><td> 37% Formaldehyde </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> F79-500 </td><td></td></tr><tr><td> HPLC - ग्रेड मेथनॉल </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> A452-1 </td><td></td></tr><tr><td> मैग्नीशियम क्लोराइड </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> M87 - 500 </td><td></td></tr><tr><td> माइक्रोस्कोप कवर ग्लास </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> 12-542A </td><td> 18 x18 मिमी </td></tr><tr><td> N-हेपटैन </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> H350 - 1 </td><td></td></tr><tr><td> पी-xylene </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> O5082 - 500 </td><td></td></tr><tr><td> Pyrex स्पॉट 9 अच्छी तरह से प्लेट </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> 13 - 748B </td><td> 100x85 मिमी </td></tr><tr><td> सोडियम क्लोराइड </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> AC32730-0025 </td><td></td></tr><tr><td> सोडियम हीड्राकसीड </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> SS255 - 1 </td><td></td></tr><tr><td> / Superfrost प्लस खुर्दबीन स्लाइड </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> 12-550-15 </td><td> 25x75x1.0 मिमी </td></tr><tr><td> Davlyn लाल टौपी साफ लाइनर टेप </td><td> प्रत्यक्ष बाल </td><td> लाल - 75R12 </td><td> पाली / त्वचा x 12 यार्ड टेप के रोल में आधार सामग्री 0.75 </td></tr><tr><td> एक साथ Sequening के लिए TOPOTA क्लोनिंग किट के सर्वश्रेष्ठ 10 रासायनिक सक्षम ई. फटका कोलाई </td><td> Invitrogen </td><td> K457501 K457540 </td><td> 20 प्रतिक्रियाओं 40 प्रतिक्रियाओं </td></tr><tr><td> Sonicated सामन शुक्राणु डीएनए </td><td> Invitrogen </td><td> 15632-011 </td><td> -20 डिग्री सेल्सियस पर भंडारण </td></tr><tr><td> विरोधी digoxigenin एपी फैब टुकड़े </td><td> Roche एप्लाइड साइंस </td><td> 1093274 </td><td> 4 में भंडारण डिग्री सेल्सियस </td></tr><tr><td> डीआईजी शाही सेना लेबलिंग मिश्रण </td><td> Roche एप्लाइड साइंस </td><td> 1277073 </td><td> -20 डिग्री सेल्सियस पर भंडारण </td></tr><tr><td> एनबीटी / BCIP स्टॉक समाधान </td><td> Roche एप्लाइड साइंस </td><td> 1681451 </td><td> 4 में भंडारण डिग्री सेल्सियस </td></tr><tr><td> पश्चिमी अवरुद्ध अभिकर्मक </td><td> Roche एप्लाइड साइंस </td><td> 11921673001 </td><td> 4 में भंडारण डिग्री सेल्सियस </td></tr><tr><td> Saatilene हाईटेक पॉलिएस्टर जाल (330.130) </td><td> Saati प्रिंट </td><td> 330.34 यू ओ पीडब्लू </td><td> 330 धागे इंच / 34 माइक्रोन धागा व्यास, नारंगी रंग </td></tr><tr><td> ग्लिसरॉल </td><td> सिग्मा </td><td> G6279-1 </td><td> पीबीटी में 70% </td></tr><tr><td> हेपरिन सोडियम नमक </td><td> सिग्मा </td><td> H3393 </td><td></td></tr><tr><td> 20 के बीच </td><td> सिग्मा </td><td> P1379 - 500 </td><td></td></tr><tr><td> 37% Formaldehyde </td><td> टेड पेला </td><td> 18,508 </td><td> एम्बर ampoules में 10 मिलीलीटर aliquots </td></tr><tr><td> 16 ऑउंस. एकल lids के साथ कागज कंटेनर </td><td> पेपर कंपनी </td><td> SOLOKH16AJ8000 </td><td></td></tr><tr><td> Borosilicate ग्लास scintillatस्वाधीन पेंच टोपी के साथ आयन शीशी </td><td> VWR इंटरनेशनल </td><td> 66022-128 </td><td> 20 की 500 मिलीलीटर का मामला </td></tr><tr><td> सील एयर बुलबुला लपेटो celluar cushioning सामग्री </td><td> VWR इंटरनेशनल </td><td> 500018-081 </td><td> 10 फुट / रोल .188 इंच मोटी </td></tr><tr><td> चिकन सीरम </td><td></td><td></td><td> विंग नस से या एक किशोर चिकन से कार्डियक पंचर द्वारा पूरे रक्त एकत्र किया गया था. रक्त जमा हुआ और फिर 30 मिनट के लिए बर्फ पर रखा जब तक 37 ° C पर 1 घंटे के लिए incubated रहे किया गया था. सीरम एकत्र किया गया था और 10 मिनट के लिए 3000 XG में Centrifuged. परिणामस्वरूप सतह पर तैरनेवाला (सीरम) स्पष्ट एकत्र किया गया था और उपयोग जब तक -20 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत. </td></tr></tbody></table> तालिका 4 में स्वस्थानी संकरण के लिए विशिष्ट अभिकर्मकों और उपकरणों की तालिका.

hybridization in situ of salivary glands, ovaries, and embryos of vector mosquitoes

मच्छरों arboviruses, प्रोटोजोआ परजीवी नेमाटोड सहित रोगजनकों के एक विविध सेट के लिए वैक्टर हैं. जांच के टेप और जीन नियामकों कि ऊतकों में व्यक्त कर रहे हैं जिसमें मच्छर मेजबान और रोगज़नक़ इंटरेक्ट, और अंगों में प्रजनन में शामिल मच्छर जनित रोग संचरण को कम करने और अंडे विकास को बाधित करने के लिए रणनीतियों के लिए बहुत रुचि के हैं. उपकरणों की एक संख्या के अध्ययन करने के लिए और जीन अभिव्यक्ति की अस्थायी और ऊतक विशेष विनियमन को मान्य करने के लिए नियोजित किया गया है. यहाँ, हम प्रोटोकॉल है कि स्थानिक जानकारी है, जो जहां विशेष जीन व्यक्त कर रहे हैं और उनके उत्पादों जमा की हमारी समझ को बढ़ाता है प्राप्त करने के लिए विकसित किया गया है का वर्णन. वर्णित प्रोटोकॉल अभिव्यक्ति मान्य है और मच्छर जनित रोगज़नक़ प्रसारण करने के लिए संबंधित जैसे ऊतकों, महिला लार की गिल्टी, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से अंडाशय और भ्रूण की subcellular डिब्बों में टेप के संचय पैटर्न को निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया गया है, जो फिर सेमच्छर प्रजनन और विकास के लिए देर हो चुकी है. निम्न कार्यविधियों एक अनुकूलित पद्धति है कि लक्ष्य विशिष्ट संकरण संकेतों की हानि के बिना प्रोटोकॉल में विभिन्न चरणों की दक्षता में सुधार का प्रतिनिधित्व करते हैं. शाही सेना जांच तैयारी के लिए दिशा - निर्देश, मुलायम ऊतकों और निर्धारण और संकरण के लिए सामान्य प्रक्रिया के विच्छेदन के एक भाग में वर्णित हैं, जबकि विशिष्ट संग्रह, निर्धारण, पूर्व संकरण और मच्छर भ्रूण के संकरण के लिए कदम भाग बी में विस्तृत रहे हैं

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Hybridization in situ of Salivary Glands, Ovaries, and Embryos of Vector Mosquitoes

टेम्पोरल और स्थानिक जीन अभिव्यक्ति का विश्लेषण कार्यात्मक जीनोमिक्स में एक महत्वपूर्ण भूमिका है. पूरे माउंट संकरण<em&gt; बगल में</em&gt; ऊतकों और subcellular डिब्बों के भीतर टेप के स्थानीयकरण का निर्धारण करने के लिए उपयोगी है. यहाँ हम एक संकरण रूपरेखा<em&gt; बगल में</em&gt; लक्ष्य विशिष्ट ऊतकों के लिए मच्छरों में संशोधनों के साथ प्रोटोकॉल.

संकरण<em&gt; बगल में</em&gt; लार ग्रंथियों, अंडाशय, और वेक्टर मच्छरों की भ्रूण की

Mosquitoes are vectors for a diverse set of pathogens including arboviruses, protozoan parasites and nematodes.  Investigation of transcripts and gene ...

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