Name: quantification of fungal colonization, sporogenesis, and production of mycotoxins using kernel bioassays
Uploaded: 2012-04-23T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Fungal Colonization, Sporogenesis, and Production of Mycotoxins Using Kernel Bioassays at JoVE.com

Мы хотели бы поблагодарить Брэндона Хассетт и Карлос Ортис за техническую помощь. Эта работа была поддержана грантами NSF IOB-0544428, 0951272, IOS, IOS-а 0925561 доктора Майкла Коломиец, а также Министерства сельского хозяйства США Национального института сельского хозяйства и продовольствия (НИФА), Afri селекции растений и образования грант № 2010-85117 -20539 до доктора. Сет Мюррей, Томас Isakeit, и Михаил Коломиец.

1. Кукуруза биопроб ядра <ol><li> За две недели до, культуры грибным патогенам картофеля на Декстроза агар (PDA) при 28 ° C. </li><li> Выбор ядра с аналогичным размером и формой, желательно плоский, чтобы они лежали на одном уровне с нижней биопроб флаконы, и место в 50 мл пробирки сокола. Ядра выбраны,...

<ol>
	<li>Tsitsigiannis, D. I., Keller, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxylipins+as+developmental+and+host-fungal+communication+signals.">Oxylipins as developmental and host-fungal communication signals.</a> Trends Microbiol. 15, 109-118 (2007).</li><li>Gao, X., Shim, W. -. B., G&#246;bel, C., Kunze, S., Feussner, I., Meeley, R., Balint-Kurti, P., Kolomiets, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disruption+of+a+maize+9-lipoxygenase+results+in+increased+resistance+to+fungal+pathogens+and+reduced+levels+of+contamination+with+mycotoxin+fumonisin.">Disruption of a maize 9-lipoxygenase results in increased resistance to fungal pathogens and reduced levels of contamination with mycotoxin fumonisin.</a> Mol. Plant-Microbe Interact. 20, 922-933 (2007).</li><li>Brodhagen, M., Tsitsigiannis, D. I., Hornung, E., Goebel, C., Feussner, I., Keller, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+oxylipin-mediated+cross-talk+in+the+Aspergillus+-+seed+pathosystem.">Reciprocal oxylipin-mediated cross-talk in the Aspergillus - seed pathosystem.</a> Mol. Microbiol. 67, 378-391 (2008).</li><li>Gao, X., Brodhagen, M., Isakeit, T., Brown, S. H., G&#246;bel, C., Betran, J., Feussner, I., Keller, N. P., Kolomiets, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+the+lipoxygenase+ZmLOX3+increases+susceptibility+of+maize+to+Aspergillus+spp.">Inactivation of the lipoxygenase ZmLOX3 increases susceptibility of maize to Aspergillus spp.</a> Mol. Plant-Microbe Interact. 22, 222-231 (2009).</li><li>Gao, X. Q., Kolomiets, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host-derived+lipids+and+oxylipins+are+crucial+signals+in+modulating+mycotoxin+production+by+fungi.">Host-derived lipids and oxylipins are crucial signals in modulating mycotoxin production by fungi.</a> Toxin Rev. 28, 79-88 (2009).</li><li>Mukherjee, M., Kim, J. -. E., Park, Y. -. S., Kolomiets, M. V., Shim, W. -. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulators+of+G+protein+signaling+in+F.+verticillioides+mediate+differential+host-pathogen+responses+on+non-viable+versus+viable+maize+kernels.">Regulators of G protein signaling in F. verticillioides mediate differential host-pathogen responses on non-viable versus viable maize kernels.</a> Mol. Plant Pathol. 12, 479-491 (2011).</li><li>Zheng, M. Z., Richard, J. L., Binder, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+rapid+methods+for+the+analysis+of+mycotoxins.">A review of rapid methods for the analysis of mycotoxins.</a> Mycopathologia. 161, 261-273 (2006).</li><li>Bacon, C. W., Bennett, R. M., Hinton, D. M., Voss, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scanning+electron+microscopy+of+Fusarium+moniliforme+within+asymptomatic+maize+kernels+and+kernels+associated+with+equine+leukoencephalomalacia.">Scanning electron microscopy of Fusarium moniliforme within asymptomatic maize kernels and kernels associated with equine leukoencephalomalacia.</a> Plant Dis. 76, 144-148 (1992).</li><li>Munkvold, G. P., Hellmich, R. L., Rice, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+fumonisin+concentrations+in+kernels+of+transgenic+Bt+maize+hybrids+and+nontransgenic+hybrids.">Comparison of fumonisin concentrations in kernels of transgenic Bt maize hybrids and nontransgenic hybrids.</a> Plant Dis. 83, 130-138 (1999).</li><li>Sagaram, U. S., Shaw, B. D., Shim, W. -. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fusarium+verticillioides+GAP!,+a+gene+encoding+a+putative+glycolipid-anchored+surface+protein,+participates+in+conidiation+and+cell+wall+structure+but+not+virulence.">Fusarium verticillioides GAP!, a gene encoding a putative glycolipid-anchored surface protein, participates in conidiation and cell wall structure but not virulence.</a> Microbiol. 153, 2850-2861 (2007).</li><li>Shim, W. -. B., Flaherty, J. E., Woloshuk, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+Fumonisin+B1+biosynthesis+in+maize+germ+and+degermed+kernels+by+Fusarium+verticillioides.">Comparison of Fumonisin B1 biosynthesis in maize germ and degermed kernels by Fusarium verticillioides.</a> J. Food Protect. 66, 2116-2122 (2003).</li><li>Shim, W. -. B., Woloshuk, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+fumonisin+B1+biosynthesis+and+conidiation+in+Fusarium+verticillioides+by+a+cyclin-like+(C-type)+gene,+FCC1.">Regulation of fumonisin B1 biosynthesis and conidiation in Fusarium verticillioides by a cyclin-like (C-type) gene, FCC1.</a> Appl. Environ. Micrbiol. 67, 1607-1612 (2001).</li><li>Christensen, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Conversation with: Won-Bo Shim. , (2011).</li><li>Shin, J. -. H., Shim, W. -. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+PPR1+and+PPR2,+genes+encoding+regulatory+subunits+of+protein+phosphatase+2A+in+Fusarium+verticillioides.">Characterization of PPR1 and PPR2, genes encoding regulatory subunits of protein phosphatase 2A in Fusarium verticillioides.</a> Phytopathol. 99, S119 (2009).</li><li>Breivik, O. N., Owades, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectrophotometric+Semimicrodetermination+of+Ergosterol+in+Yeast.">Spectrophotometric Semimicrodetermination of Ergosterol in Yeast.</a> Yeast. Agric. and Food Chem. 5, 360-363 (1957).</li></ol>

<p class="jove_content"&gt; Методы, описанные здесь, были испытания и доказала свою надежную в поколение количественные результаты для грибковой колонизации, спорогенеза и производство микотоксинов. Кроме того, эти методы должны быть применимы к семенам из других видов растений, которые чувствительны к загряз...

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Компания </td><td> Каталог # </td></tr><tr><td> Картофельный агар с декстрозой </td><td> Фишер Scientifc </td><td> S71659A </td></tr><tr><td> Твин-20 </td><td> Фишер Scientifc </td><td> BP337-100 </td></tr><tr><td> Пластиковый контейнер инкубации </td><td> Sterilite </td><td> 1713LAB06 </td></tr><tr><td> Смеситель </td><td> Vicam </td><td> 20200 </td></tr><tr><td> 24 см складчатый фильтр документы </td><td> Vicam </td><td> 31240 </td></tr><tr><td> 1,5 мкм стекла из микроволокна </td><td> Vicam </td><td> 31955 </td></tr><tr><td> ФППА испытания колонки </td><td> Vicam </td><td> G1024 </td></tr><tr><td> Afrla испытаний разработчика </td><td> Vicam </td><td> 32010 </td></tr><tr><td> Метанол </td><td> Vicam </td><td> 35016 </td></tr><tr><td> Ацетонитрил </td><td> Фишер Scientifc </td><td> AC14952-0025 </td></tr><tr><td> Этанол </td><td> Фишер научtifc </td><td> AC39769-0025 </td></tr><tr><td> C-18 твердых колонке экстракции (Prep сентября SPE C18 колонке) </td><td> Фишер Scientifc </td><td> 60108-304 </td></tr><tr><td> O-phthalaldehyde (OPA) </td><td> Sigma Chemical Co </td><td> 79760-5г </td></tr><tr><td> Борная кислота </td><td> Фишер Scientifc </td><td> BP168-500 </td></tr><tr><td> Борат натрия </td><td> Фишер Scientifc </td><td> RDCS0330500 </td></tr><tr><td> Меркаптоэтанол </td><td> Фишер Scientifc </td><td> 45-000-231 </td></tr><tr><td> Shimadzu HPLC LC-20AT (насос) </td><td> Shimadzu Scientific Instruments, Inc </td><td> LC-20AT </td></tr><tr><td> Zorbax ОРВ колонке (4.6x150mm) </td><td> Agilent Technologies </td><td> 443905-902 </td></tr><tr><td> Shimatzu RF-10Axl детектор флуоресценции </td><td> Shimadzu Scientific Instruments, Inc </td><td> RF-10AXL </td></tr><tr><td> Фосфат натрия </td><td> Фишер Scientifc </td><td> AC38987-0010 </td></tr><tr><td> FB1 стандартам </td><td> Sigma Chemical Ко </td><td> F1147-1 мг </td></tr><tr><td> Хлороформ </td><td> VWR </td><td> MK444410 </td></tr><tr><td> 13 мм шприц фильтр 0,45 мкм мембрана нейлона (HPLC) </td><td> Наука Жизни Pall </td><td> 4426 </td></tr><tr><td> Эргостерол </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 45 480-50G-F </td></tr><tr><td> Сцинтилляционных флаконов </td><td> VWR </td><td> 66021-602 </td></tr><tr><td> Хлористый натрий </td><td> Vicam </td><td> G1124 </td></tr></tbody></table>

quantification of fungal colonization, sporogenesis, and production of mycotoxins using kernel bioassays

Гниение зерна на семенные заражения грибками представляет собой одну из величайших экономических проблем во всем мире производство зерновых, не говоря уже о серьезных рисков для здоровья человека и животных. Среди производство зерновых, кукурузы, вероятно, наиболее пострадавших сельскохозяйственных культур, в связи с возбудителем вызванного потерями в целостности зерна и загрязнения микотоксинами зерна. Две самые распространенные и проблемные микотоксинов на кукурузу производители пищевых продуктов и кормов процессоров афлатоксин и фумонизин, выпускаемых Aspergillus flavus и Fusarium verticillioides соответственно. Недавние исследования в области молекулярной растительного взаимодействия возбудителя продемонстрировал перспективы в понимании конкретных механизмов, связанных с завода ответ на грибковую инфекцию и микотоксинами 1,2,3,4,5,6. Поскольку многие лаборатории используют ядро ​​тесты для изучения растительного взаимодействия возбудителя, есть необходимость в стандартизированный метод для количественного различных биологических параметров, поэтомуРезультаты разных лабораториях могут быть перекрестно интерпретировать. Для надежной и воспроизводимой средствами для количественного анализа на семена, мы разработали в лаборатории анализов ядра и последующее методов количественного роста грибов, биомасса, и микотоксинами. Четыре ядра кукурузы стерилизовать засевают в стеклянных флаконах с грибковыми подвески (10 6) и выдерживают в течение определенного периода. Пример флаконов, то выбранный для перечисления конидий на гемоцитометра, эргостерола на основе биомассы анализа высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), афлатоксин количественного использования AflaTest флуорометр метод и фумонизин количественного ВЭЖХ.

Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Fungal Colonization, Sporogenesis, and Production of Mycotoxins Using Kernel Bioassays at JoVE.com

Quantification of Fungal Colonization, Sporogenesis, and Production of Mycotoxins Using Kernel Bioassays

Опустошение зерновых культур на семенные заражения грибками вызвало многочисленные исследовательские усилия, чтобы лучше понять растение-патоген взаимодействия. Для изучения семенного грибковых взаимодействия в лабораторных условиях, мы разработали надежный метод для количественного грибковых воспроизводства биомассы и микотоксинами с ядром биопробы.

Количественная грибковой колонизации, спорогенеза, и производство микотоксинов Использование ядра Биопробы

The rotting of grains by seed-infecting fungi poses one of the greatest economic challenges to cereal production worldwide, not to mention serious risks ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Colonization of Euprymna scolopes Squid by Vibrio fischeri

Colonization of Euprymna scolopes Squid by Vibrio fischeri

Колонизация Euprymna scolopes Squid по Vibrio fischeri</em

Specific bacteria are found in association with animal tissue1-5. Such host-bacterial associations (symbioses) can be detrimental (pathogenic), have no ...

Live-cell Video Microscopy of Fungal Pathogen Phagocytosis

Онлайн-клеточной видео микроскопия грибкового патогена Фагоцитоз

Phagocytic clearance of fungal pathogens, and microorganisms more generally, may be considered to consist of four distinct stages: (i) migration of ...

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Характеристика воспалительных реакций во время интраназальной колонизации стрептококковой пневмонией

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Isolation, Purification and Labeling of Mouse Bone Marrow Neutrophils for Functional Studies and Adoptive Transfer Experiments

Выделение, очистка и маркировки Мышь нейтрофилов костного мозга для функциональных исследований и приемных Эксперименты Трансфер

Neutrophils are critical effector cells of the innate immune system. They are rapidly recruited at sites of acute inflammation and exert protective or ...

Establishment of an In vitro System to Study Intracellular Behavior of Candida glabrata in Human THP-1 Macrophages

Establishment of an In vitro System to Study Intracellular Behavior of Candida glabrata in Human THP-1 Macrophages

Создание<em&gt; В пробирке</em&gt; Система по изучению внутриклеточных Поведение<em&gt; Candida glabrata</em&gt; В человека ТНР-1 макрофагов

A cell culture model system, if a close mimic of host environmental conditions, can serve as an inexpensive, reproducible and easily manipulatable ...

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

Исследование действия пробиотиков на пневмококковой колонизации Использование<em&gt; Экстракорпоральное</em&gt; Соблюдение Анализ

Adherence of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) to the epithelial lining of the nasopharynx can result in colonization and is considered a ...

Assessing Bacterial Invasion of Cardiac Cells in Culture and Heart Colonization in Infected Mice Using Listeria monocytogenes

Assessing Bacterial Invasion of Cardiac Cells in Culture and Heart Colonization in Infected Mice Using Listeria monocytogenes

Оценка бактериального вторжения сердечных клеток в культуре и колонизации сердца у инфицированных мышей с использованием листерий моноцитогенов

Listeria monocytogenes is a Gram-positive facultative intracellular pathogen that is capable of causing serious invasive infections in immunocompromised ...

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

Мышиной модели группы B<em&gt; Streptococcus</em&gt; Вагинальный Колонизация

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

Histological Quantification to Determine Lung Fungal Burden in Experimental Aspergillosis

Гистологические количественная оценка для определения в экспериментальной аспергиллез легких грибковых бремя

The quantification of lung fungal burden is critical for the determination of the relative levels of immune protection and fungal virulence in mouse ...

Real-time Imaging and Quantification of Fungal Biofilm Development Using a Two-Phase Recirculating Flow System

В реальном времени обработки изображений и количественная оценка развития грибковых биопленки, с использованием двухфазной системы рециркуляции потока

In oropharyngeal candidiasis, members of the genus Candida must adhere to and grow on the oral mucosal surface while under the effects of salivary flow. ...