Name: generation of induced regulatory t cells from primary human na&iuml;ve and memory t cells
Uploaded: 2012-04-16T12:00:00
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<p class="jove_content"&gt; 저자 유동세포계측법 분석 및 정렬와의 도움 제니퍼 이상하고 그렉 Bauman 감사하고 싶습니다. 이 작품은 FM으로 NCRR에서 NIH 그랜트 번호 2P20 RR020171 의해 켄터키 시작 자금의 대학에 의해 지원되었다; GIE는 대통령 대학원 원정대와 켄터키 기회의 원정 지원을 인정한다.</p

1. 버피 코트에서 사람 말초혈 Mononuclear 전지 (PBMCs)의 분리 <ol><li> 병원이나 인근의 혈액 센터 위치에서 버피 코트 하나의 단위를 취득. 우리의 혈액 센터는 정상적인 혈액 기증자로부터 얻은 단위당 버피 코트 40-60 대한 ML 우리에게 제공합니다. </li><li> 버피 코트를 희석하기 위해 멸균 PBS를 포함하는 autoclaved 500 ML 유리 병으로 혈액을 붓고. PBS + 버피 코트의 최종 부피 250 ML이어야합니다. </li><li> 20...

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	<li>Powrie, F., Correa-Oliveira, R., Mauze, S., Coffman, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+interactions+between+CD45RBhigh+and+CD45RBlow+CD4++T+cells+are+important+for+the+balance+between+protective+and+pathogenic+cell-mediated+immunity.">Regulatory interactions between CD45RBhigh and CD45RBlow CD4+ T cells are important for the balance between protective and pathogenic cell-mediated immunity.</a> The Journal of Experimental Medicine. 179, 589-600 (1994).</li><li>Tarbell, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cell-expanded,+islet-specific+CD4++CD25++CD62L++regulatory+T+cells+restore+normoglycemia+in+diabetic+NOD+mice.">Dendritic cell-expanded, islet-specific CD4+ CD25+ CD62L+ regulatory T cells restore normoglycemia in diabetic NOD mice.</a> The Journal of Experimental Medicine. 204, 191-201 (2007).</li><li>Morgan, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+treatment+of+collagen-induced+arthritis+by+adoptive+transfer+of+CD25++regulatory+T+cells.">Effective treatment of collagen-induced arthritis by adoptive transfer of CD25+ regulatory T cells.</a> Arthritis and Rheumatism. 52, 2212-2221 (2005).</li><li>Taylor, P. A., Lees, C. J., Blazar, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+infusion+of+ex+vivo+activated+and+expanded+CD4(+)CD25(+)+immune+regulatory+cells+inhibits+graft-versus-host+disease+lethality.">The infusion of ex vivo activated and expanded CD4(+)CD25(+) immune regulatory cells inhibits graft-versus-host disease lethality.</a> Blood. 99, 3493-3493 (2002).</li><li>Ziegler, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FOXP3:+of+mice+and+men.">FOXP3: of mice and men.</a> Annual Review of Immunology. 24, 209-226 (2006).</li><li>Riley, J. L., June, C. H., Blazar, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+T+regulatory+cell+therapy:+take+a+billion+or+so+and+call+me+in+the+morning.">Human T regulatory cell therapy: take a billion or so and call me in the morning.</a> Immunity. 30, 656-6565 (2009).</li><li>Morgan, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+FOXP3+mRNA+is+not+confined+to+CD4+CD25++T+regulatory+cells+in+humans.">Expression of FOXP3 mRNA is not confined to CD4+CD25+ T regulatory cells in humans.</a> Human Immunology. 66, 13-20 (2005).</li><li>Wang, J., Huizinga, T. W. J., Toew, R. E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=De+Novo+Generation+and+Enhanced+Suppression+of+Human+CD4+CD25++Regulatory+T+Cells+by+Retinoic+Acid.">De Novo Generation and Enhanced Suppression of Human CD4+CD25+ Regulatory T Cells by Retinoic Acid.</a> Journal of Immunology. 183, 4119-4126 (2009).</li><li>Hori, S., Nomura, T., Sakaguchi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+regulatory+T+cell+development+by+the+transcription+factor+Foxp3.">Control of regulatory T cell development by the transcription factor Foxp3.</a> Science (New York, N.Y.). 299, 1057-1061 (2003).</li><li>McHugh, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD4(+)CD25(+)+immunoregulatory+T+cells:+gene+expression+analysis+reveals+a+functional+role+for+the+glucocorticoid-induced+TNF+receptor.">CD4(+)CD25(+) immunoregulatory T cells: gene expression analysis reveals a functional role for the glucocorticoid-induced TNF receptor.</a> Immunity. 16, 311-323 (2002).</li><li>Takahashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunologic+Self-Tolerance+Maintained+by+Cd25+Cd4+Regulatory+T+Cells+Constitutively+Expressing+Cytotoxic+T+Lymphocyte-Associated+Antigen+4.">Immunologic Self-Tolerance Maintained by Cd25+Cd4+Regulatory T Cells Constitutively Expressing Cytotoxic T Lymphocyte-Associated Antigen 4.</a> The Journal of Experimental Medicine. 192, 303-310 (2000).</li><li>Liu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD127+expression+inversely+correlates+with+FoxP3+and+suppressive+function+of+human+CD4++T+reg+cells.">CD127 expression inversely correlates with FoxP3 and suppressive function of human CD4+ T reg cells.</a> The Journal of Experimental Medicine. 203, 1701-1711 (2006).</li><li>Schraven, B., Kalinke, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD28+superagonists:+what+makes+the+difference+in+humans.">CD28 superagonists: what makes the difference in humans.</a> Immunity. 28, 591-595 (2008).</li><li>Reneer, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripherally+induced+human+Regulatory+T+cells+uncouple+Kv1.3+activation+from+TCR-associated+signaling.">Peripherally induced human Regulatory T cells uncouple Kv1.3 activation from TCR-associated signaling.</a> European Journal of Immunology. , (2011).</li></ol>

Treg 전송, 그들의 효율적인 생성 및 안정적인 유지 보수 방법을 autoimmunity 그래프트 거절 및 다른 면역 또는 염증 - 매개 질환을 퇴치에 엄청난 치료 가능성을 가지고 있지만 아직 개발되지 않았습니다. 인간의 T 세포를 순환만이 1-5%는 Tregs가로서 자신의 제어 확장과 차별화는 병원에 Tregs의 구현의 주요 억지력으로 소수를 극복. 우리가 TGN1412 재판 13 일부터 배운대로 반면에, 그것은 심히 ?...

<table border="1"><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> Lymphoprep </td><td> 축 - 방패 </td><td> 1,114,547 </td><td> 실온에서 보관 </td></tr><tr><td> 냉장 벤치 - 탑 원심 분리기 </td><td> Eppendorf </td><td> 5810R </td><td></td></tr><tr><td> 밝은 라인 Hemocytometer </td><td> Hausser 과학 </td><td> 3110 </td><td></td></tr><tr><td> EasySep 인간 CD4 + T 세포 강화 키트 </td><td> 셀 기술을 막기 </td><td> 19,052 </td><td></td></tr><tr><td> EasySep 인간 메모리 CD4 + T 세포 강화 키트 </td><td> 셀 기술을 막기 </td><td> 19,157 </td><td></td></tr><tr><td> EasySep 인간 나이브 CD4 + T 세포 강화 키트 </td><td> 셀 기술을 막기 </td><td> 19,155 </td><td></td></tr><tr><td> 빅 쉬운 EasySep 매기그물 </td><td> 셀 기술을 막기 </td><td> 18,001 </td><td> 은화 </td></tr><tr><td> 5 ML 라운드 히프 폴리스티렌 튜브 </td><td> BD 팔콘 </td><td> 352,008 </td><td></td></tr><tr><td> 15 ML의 폴리 프로필렌의 원심 분리기 튜브 </td><td> VWR </td><td> 89004-368 </td><td></td></tr><tr><td> 14 ML의 폴리 프로필렌은 라운드 - 어쨌든 튜브 </td><td> BD 팔콘 </td><td> 352,059 </td><td></td></tr><tr><td> 50 ML의 폴리 프로필렌의 원심 분리기 튜브 </td><td> VWR </td><td> 89004-364 </td><td></td></tr><tr><td> 인간 안티 인 경우에는 3 번 CD 항체 </td><td> 바이오 엑스 셀 </td><td> BE0001-2 </td><td> 클론 : OKT3 </td></tr><tr><td> 24 자 셀 폴리스티렌 문화 플레이트 </td><td> BD 팔콘 </td><td> 353,047 </td><td></td></tr><tr><td> 96 자 라운드 히프 조직 배양 플레이트 </td><td> Grenier 바이오 원 </td><td> 650,180 </td><td></td></tr><tr><td> Glutamax-I와 HEPES 버퍼와 RPMI 1640 </td><td> Gibco </td><td> 72,400 </td><td></td></tr> &lt;TR&gt; <td> 태아 소 혈청 (FBS) </td><td> Gibco </td><td> 16,000 </td><td></td></tr><tr><td> β-메르 캅 토 에탄올 </td><td> 시그마 </td><td> M7522 </td><td></td></tr><tr><td> TGF-β1 재조합 인간 </td><td> eBioscience </td><td> 14-8348-62 </td><td></td></tr><tr><td> 재조합 인간 IL-2 </td><td> eBioscience </td><td> 14-8029-63 </td><td></td></tr><tr><td> 소 혈청 알부민 (BSA) </td><td> MP Biomedicals 주식 회사 </td><td> 810,531 </td><td></td></tr><tr><td> 0.5 M EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) </td><td> Amresco </td><td> E177 </td><td></td></tr><tr><td> 마우스 안티 인간 CD25-PE </td><td> Miltenyi Biotec </td><td> 130-091-024 </td><td> 클론 : 4E3 </td></tr><tr><td> 마우스 안티 인간 CD45RA-PE-Cy5 </td><td> eBioscience </td><td> 15-0458-42 </td><td> 클론 : HI100 </td></tr><tr><td> 마우스 안티 인간 CD127-APC </td><td> Miltenyi Biotec </td><td> 130-094-890 </td><td> 클론 : MB15-18C9 </td></tr><tr><td> DNase II </td><td> MP Biomedicals 주식 회사 </td><td> 190,370 </td><td></td></tr><tr><td> MoFlo 흐름 Cytometer </td><td> Beckman 보습 바로 앞에 달린 풀베는 날 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> FlowJo 소프트웨어 </td><td> 트리 스타 주식 회사 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 세포 퀘스트 프로 소프트웨어 </td><td> BD Biosciences </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 갓 태어난 송아지 고기 세럼 </td><td> Gibco </td><td> 16,010 </td><td></td></tr><tr><td> L-글루타민 </td><td> Gibco </td><td> 25,030 </td><td></td></tr><tr><td> AIM-V </td><td> Gibco </td><td> 0,870,112 </td><td></td></tr><tr><td> CellTrace의 CFSE의 세포 증식 키트 </td><td> Invitrogen </td><td> C34554 </td><td></td></tr><tr><td> 억제 검사기 비즈를 Treg </td><td> Miltenyi Biotec </td><td> 130-092-909 </td><td></td></tr><tr><td> 페니실린 - 스트렙토 마이신 </td><td> Gibco </td><td> 15,140 </td><td></td></tr><tr><td> 40 μm의 나일론 셀 스트레인어 </td><td> BD 팔콘 </td><td> 352,340 </td><td></td></tr></table>

generation of induced regulatory t cells from primary human na&iuml;ve and memory t cells

면역 CD4 + 규제 T 세포 (Tregs)의 개발과 유지 보수 및 인체에 대한 자신과 공생 항원의 광대한 양의 immunologic의 항상성 유지에 필요한 말초 관용에 기여한다. Tregs 및 염증성 종래의 T 세포 사이의 균형을 Perturbations는 immunopathology이나 암이 발생할 수 있습니다. Tregs의 치료 주사는 대장염 1, 유형 I 당뇨병 2, 류마티스 관절염 및 이식편 대 숙주 질환, 인간 대 마우스 Treg 생물학 5 4 몇 가지 근본적인 차이점 murine 모델에 효과있는 것으로 표시되었지만 지금까지 임상 사용을 배제하고있다. 충분한 숫자, 순도, 안정성 및 치료 Tregs의 유도 특이성의 부족들이 전직 생체내 확장 6 조건을 최적화할 수있는 인간 Treg 개발의 역동적인 플랫폼을 necessitated. 여기 D4 단계로 세분 수있는 단일 인간의 말초 혈액 기증자로부터 유도된 Tregs (iTregs)의 차별 화를위한 방법 방접원을 그리다 : 말초 혈액 mononuclear 세포, CD4의 자기 선택 + T 세포의 절연, 체외 세포 배양 및 형광의 활성화 T 세포 하위 집합의 셀 정렬 (FACS). Treg 서명 전사 인자의 forkhead 상자 P3 (FoxP3)는 인간 7의 활성화 유발 전사 인자이며 다른 독특한 마커 존재 마커 조합 패널 억제 활동과 T 세포를 식별하는 데 사용해야하기 때문에. 문화에 6 일이나하면 Google 시스템에서 세포 나이브 T 세포, CD25 및 CD45RA들의 상대적인 표현을 기반으로 메모리 T 세포 또는 iTregs로 demarcated 수 있습니다. 메모리와 나이브 T 세포가 다른보고 편광 요구 사항 및 plasticities 8을 가지고로서 CD45RA +와 CD45RO로 초기 T 세포 인구의 사전 분류 + 하위 집합 수 B전자는 이러한 불일치를 검사하기 위해 사용됩니다. 다른 사람과 일치하는, 우리의 CD25 안녕 CD45RA - FoxP3 9 iTregs 명시적 높은 수준의, GITR 및 CTLA-4 11 CD127 12 낮은 수준. 각 인구의 FACS 따라 결과 세포 carboxyfluorescein succinimidyl 에스테르 (CFSE) - 라벨 T 세포 autologous의 확산을 병신하는 상대적 능력을 평가하고 억압 분석에 사용할 수 있습니다.

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Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human Na&#239;ve and Memory T Cells

우리는 한 인간의 혈액 기증자로부터 규제, 메모리 및 나이브 T 세포를 생성하는 방법을 설명합니다. 편광 Tregs 그때도 여기에 설명된 억제 분석을 포함한 유전자 균질성와 유전 및 기능 다양한 어플 리케이션의 다른 하위 집합을 비교할 수 있습니다.

기본 인적 나이브 및 메모리 T의 세포로부터 유도된 규제 T 세포의 생성

The development and maintenance of immunosuppressive CD4+ regulatory T cells (Tregs) contribute to the peripheral tolerance needed to remain in ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human Na&iuml;ve and Memory T Cells

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

마우스 T - 세포에서 T - 세포 수용체의 Retroviral 전달

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

연구

면역학 및 감염병학

Directed Differentiation of Induced Pluripotent Stem Cells towards T Lymphocytes

T Lymphocytes쪽으로 유도 Pluripotent 줄기 세포의 분화 감독

Adoptive cell transfer (ACT) of antigen-specific CD8+  cytotoxic T lymphocytes (CTLs) is a promising treatment for a variety of  malignancies 1. CTLs can  ...

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

기본 인간 T 세포 piggyBac Transposon 시스템 변경

The piggyBac transposon system is naturally active, originally derived from the cabbage looper moth1,2. This non-viral system is plasmid based, most ...

New Tools to Expand Regulatory T Cells from HIV-1-infected Individuals

새로운 도구는 HIV-1에 감염된 개인으로부터 규제 T 세포를 확장하려면

CD4+ Regulatory T cells (Tregs) are potent immune modulators and serve an important function in human immune homeostasis. Depletion of Tregs has led to ...

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

T 세포의 유도<em&gt; 체외</em&gt; 마우스 배아 줄기 세포에서

The OP9/OP9-DL1 co-culture system has become a well-established method for deriving differentiated blood cell types from embryonic and hematopoietic ...

Generation of Human Alloantigen-specific T Cells from Peripheral Blood

말초 혈액에서 인간 Alloantigen 특정 T 세포의 생성

The study of human T lymphocyte biology often involves examination of responses to activating ligands. T cells recognize and respond to processed peptide ...

T Cells Capture Bacteria by Transinfection from Dendritic Cells

T 세포는 수지상 세포에서 Transinfection에 의해 박테리아를 캡처

Recently, we have shown, contrary to what is described, that CD4+ T cells, the paradigm of adaptive immune cells, capture bacteria from infected dendritic ...

Phenotypic and Functional Analysis of Activated Regulatory T Cells Isolated from Chronic Lymphocytic Choriomeningitis Virus-infected Mice

표현형 및 만성 림프 구성 맥락 수막염 바이러스에 감염된 마우스에서 고립 활성화 규제 T 세포의 기능 분석

Regulatory T (Treg) cells, which express Foxp3 as a transcription factor, are subsets of CD4+ T cells. Treg cells play crucial roles in immune tolerance ...

Development of Stem Cell-derived Antigen-specific Regulatory T Cells Against Autoimmunity

자가 면역 대해 줄기 세포 유래의 항원 특이 적 조절 T 세포의 발달

Autoimmune diseases arise due to the loss of immunological self-tolerance. Regulatory T cells (Tregs) are important mediators of immunologic ...

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells (iTregs) from Na&#239;ve CD4+ T Cells Using a TGF-&#946;-containing Protocol

TGF-β 함유 프로토콜을 사용하여 나이브 CD4 + T 세포에서 인간의 CD4 + Foxp3의 + 유도 규제 T 세포 (iTregs)의 체외 분화

Regulatory T cells (Tregs) are an integral part of peripheral tolerance, suppressing immune reactions against self-structures and thus preventing ...