Name: retrograde perfusion and filling of mouse coronary vasculature as preparation for micro computed tomography imaging
Uploaded: 2012-02-10T13:00:00
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Agradecemos al Dr. Kelly Stevens para las pruebas iniciales del protocolo, el Dr. Michael Simons, Hauch Dr. Kip, y los miembros de sus dos laboratorios para la discusión general. Este trabajo es el apoyo de subvenciones del NIH HL087513 y HL094374 P01.

1. Los preparativos antes de iniciar <ol><li> Llenar cada lado del aparato de presión de perfusión con tampón Vasodilatador (4 mg / l papaverina + 1g / l adenosina en PBS) o 4% de paraformaldehído (PFA) en PBS, respectivamente. </li><li> Preparar una jeringa de insulina 1/2cc (con un 29G conectado permanentemente ½ &quot;aguja) llenándolo con 0,1 ml de heparina 1:100 (stock 5000U/ml) y doblar la aguja a un ángulo de 120 grados ~ con el bisel hacia arriba. Haga lo misma con una jeringa de 1 ml (con un 26G ½ &qu...

<ol>
	<li>Couffinhal, T., Dufourcq, P., Barandon, L., Leroux, L., Duplaa, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+to+study+angiogenesis+in+the+context+of+cardiovascular+diseases.">Mouse models to study angiogenesis in the context of cardiovascular diseases.</a> Front. Biosci. 14, 3310-3325 (2009).</li><li>Zagorchev, L., Mulligan-Kehoe, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+imaging+of+vessels+in+mouse+models+of+disease.">Molecular imaging of vessels in mouse models of disease.</a> Eur. J. Radiol. 70, 305-311 (2009).</li><li>Krucker, T., Lang, A., Meyer, E. 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Tejido cardíaco tiene una demanda metabólica muy alta, y por tanto requiere un suministro constante de nutrientes y el oxígeno de la sangre entregada por la vasculatura coronaria. Las enfermedades de los vasos coronarios, los cuales disminuyen la función coronaria debido a la estenosis del vaso y el bloqueo, puede llevar a la hipoxia tisular y la isquemia, y poner a los pacientes afectados por el riesgo de infarto de miocardio y un daño irreparable al músculo del corazón. Una mejor comprensión del estado de enfe...

<html><table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios </td></tr><tr><td> 1 ml jeringas </td><td> <a href="http://www.bd.com/" target="_blank">Becton Dickinson</a> </td><td> BD-309602 </td><td></td></tr><tr><td> 1/2cc jeringas para insulina con agujas 29G ½ conectado permanentemente &#39; </td><td> <a href="http://www.bd.com/" target="_blank">Becton Dickinson</a> </td><td> BD-309306 </td><td></td></tr><tr><td> 2 &quot;x 2&quot; Almohadillas de gasa </td><td> Med101store.com </td><td> SKU 2208 </td><td></td></tr><tr><td> 24G ¾ &quot;Angiocath IV del catéter </td><td> <a href="http://www.bd.com/" target="_blank">Becton Dickinson</a> </td><td> BD-381112 </td><td></td></tr><tr><td> 26G ½ &quot;agujas de calibre </td><td>lacio &quot;&gt; Becton Dickinson </td><td> BD-305111 </td><td></td></tr><tr><td> La adenosina </td><td> <a href="http://www.sigmaaldrich.com/" target="_blank">Sigma</a> </td><td> A9251 </td><td> 1 g / l en PBS durante Buffer vasodilatación (con papaverina) </td></tr><tr><td> Pinzas angulares Graefe </td><td> <a href="http://www.finescience.com/" target="_blank">Herramientas de Bellas Ciencia</a> </td><td> 11052-10 </td><td></td></tr><tr><td> De algodón con punta de aplicadores: 6 &quot;no estéril </td><td> <a href="http://www.cardinal.com/" target="_blank">Cardinal Health</a> </td><td> C15055-006 </td><td></td></tr><tr><td> Curvas Tijeras quirúrgicas </td><td> <a href="http://www.finescience.com/" target="_blank">Herramientas de Bellas Ciencia</a> </td><td> 14085-09 </td><td></td></tr><tr><td> Estereoscopio de disección y la fuente de luz </td><td> <a href="http://www.nikon.com/" target="_blank">Nikon</a> </td><td> NA </td><td> NA </td></tr><tr><td> Bandeja de disección, 11.5 x 7.5 pulgadas </td><td> <a href="http://www.coleparmer.com/" target="_blank">Cole-Parmer</a> </td><td> YO-10915-12 </td><td> Lleno de alquitrán para la fijación abajo el ratón </td></tr><tr><td> Bellas pinzas curvas </td><td> <a href="http://www.aesculapusa.com/" target="_blank">Aesculap</a> </td><td> FD281R </td><td> Necesitas dos </td></tr><tr><td> La heparina, 5.000 U / ml de caldo </td><td> <a href="http://www.apppharma.com/" target="_blank">APP Pharmaceuticals LLC</a> </td><td> NDC 63323-047-10 </td><td> 1:100 dilución en agua </td></tr><tr><td> KCl </td><td> <a href="http://www.fishersci.com/" target="_blank">Pescador</a> </td><td> P217 </td><td> Solución saturada en H2O </td></tr><tr><td> Ketamina (Ketaset), 100 mg / ml de stock </td><td> Fort Dodge, de Overland Park, KS, EE.UU. </td><td> NDC 0856-2013-01 </td><td> Mezclado como el peso corporal 130 mg / kg, con xilacina en s 0,9%aline </td></tr><tr><td> Microfil </td><td> <a href="http://www.flowtech-inc.com/" target="_blank">Flujo Tech</a> </td><td> MV-122 (amarillo). Otras opciones de color están también disponibles. </td><td> Mezclar 1:1 en peso, con 10% en volumen de agente de curado. Prepararse inmediatamente antes de la inyección, y agitar para asegurar que esté bien mezclado </td></tr><tr><td> No estériles de sutura: 6-0, trenzado de seda </td><td> <a href="http://www.harvardapparatus.com/" target="_blank">Aparato de Harvard</a> </td><td> 723287 </td><td></td></tr><tr><td> Papaverina </td><td> <a href="http://www.americanregent.com/" target="_blank">América Regent Inc.</a> </td><td> NDC 0517-4010-01 </td><td> 4 mg / l en PBS durante Buffer vasodilatación (con adenosina) </td></tr><tr><td> Paraformaldehído </td><td> <a href="http://www.sigmaaldrich.com/" target="_blank">Sigma</a> </td><td> P6148 </td><td> Preparado como solución al 4% </td></tr><tr><td> Aparato de perfusión </td><td></td><td></td><td> Ver figura 2 </td></tr><tr><td> Tijeras de primavera </td><td> <a href="http://www.finescience.com/" target="_blank">Herramientas de Bellas Ciencia</a> </td><td> 15018-10 </td><td></td></tr><tr><td> Xilazina (Anased), 20 mg / dL de valores </td><td> <a href="http://www.lloydlab.com/" target="_blank">Lloyd Labs</a> </td><td> NADA # 139-236 </td><td> Mezclado como el peso corporal 8,8 mg / kg, con ketamina en 0,9% de solución salina </td></tr></tbody></table>

retrograde perfusion and filling of mouse coronary vasculature as preparation for micro computed tomography imaging

La visualización de la vasculatura se está convirtiendo cada vez más importante para la comprensión de muchos estados patológicos diferentes. Si bien existen varias técnicas para obtener imágenes de la vasculatura, pocos son capaces de visualizar la red vascular en su conjunto, mientras que se extiende a una resolución que incluye el 1,2 vasos más pequeños. Además, muchas de las técnicas de colada vasculares destruir el tejido circundante, evitando su posterior análisis de la muestra 3-5. Un método que evita estos problemas es de micro-tomografía axial computerizada (μCT). μCT imagen puede escanear a resoluciones menores de 10 micras, es capaz de producir reconstrucciones en 3D de la red vascular, y deja el tejido intacto para su posterior análisis (por ejemplo, histología y morfometría) 11.06. Sin embargo, los vasos de imágenes ex vivo por métodos μCT requiere que los vasos se llena con un compuesto radiopaco. Como tal, la representación exacta de la vasculatura producido por μCT imagen dependellenado fiable y completa de los vasos. En este protocolo, se describe una técnica para el llenado de los vasos coronarios del ratón en la preparación de imágenes μCT. Dos técnicas que predominan existen para el llenado de los vasos coronarios: en vivo a través de la perfusión de la canalización y retrógrado de la aorta (o una rama del arco aórtico) 12-14, o ex vivo a través de un sistema de perfusión Langendorff 15-17. A continuación se describe un método in vivo canulación aórtica, que ha sido específicamente diseñado para garantizar el llenado de todos los buques. Nosotros utilizamos un compuesto viscosidad baja radiopaco llamado Microfil que puede perfundir a través de los vasos más pequeños para llenar todos los capilares, así como los dos lados arteriales y venosas de la red vascular. Los buques son perfundidos con buffer usando un sistema de perfusión a presión, y se rellena con Microfil. Para asegurarse de que Microfil llena los pequeños vasos de resistencia más altos, que ligan las ramas grandes emanating de la aorta, que desvía el Microfil en las coronarias. Una vez finalizado el llenado, para evitar que la naturaleza elástica del tejido cardíaco de exprimir Microfil cabo de algunos vasos, que ligar accesibles los puntos importantes de salida vasculares inmediatamente después del llenado. Por lo tanto, nuestra técnica está optimizado para el llenado completo y la retención máxima del agente de carga, lo que permite la visualización completa de la red vascular coronaria - arterias, capilares y venas por igual.

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Retrograde Perfusion and Filling of Mouse Coronary Vasculature as Preparation for Micro Computed Tomography Imaging

La visualización de los vasos coronarios es fundamental para avanzar en nuestra comprensión de las enfermedades cardiovasculares. Aquí se describe un método para la perfusión vascular coronaria murino con una goma de silicona radiopaco (Microfil), en preparación para la micro-tomografía axial computerizada (μCT) de imágenes.

Perfusión retrógrada y llenado de la vasculatura coronaria del ratón, como preparación para la Micro tomografía computarizada

Visualization of the vasculature is becoming increasingly important for understanding many different disease states. While several techniques exist for ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Segmentation and Measurement of Fat Volumes in Murine Obesity Models Using X-ray Computed Tomography

La segmentación y la medición de los volúmenes de grasa en modelos murinos de obesidad Usando rayos X de tomografía computarizada

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Investigación

Medicina

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Osmótica Drug Delivery de miembros posteriores isquémicos y la perfusión de la vasculatura con Microfil para Micro-tomografía computarizada

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Using Micro-computed Tomography for the Assessment of Tumor Development and Follow-up of Response to Treatment in a Mouse Model of Lung Cancer

El uso de la tomografía computarizada-Micro para la evaluación del desarrollo del tumor y Seguimiento de la respuesta al tratamiento en un modelo de ratón de cáncer de pulmón

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Combined Near-infrared Fluorescent Imaging and Micro-computed Tomography for Directly Visualizing Cerebral Thromboemboli

Imagen Fluorescente combinado del infrarrojo cercano y la tomografía computarizada-Micro para visualizar de manera directa tromboembolia cerebral

Direct thrombus imaging visualizes the root cause of thromboembolic infarction. Being able to image thrombus directly allows far better investigation of ...

Identifying Coronary Artery Calcification on Non-gated Computed Tomography Scans

Identificación de la calcificación coronaria en cerrada no computado exploraciones de la tomografía

Coronary artery calcification (CAC) provides an objective measure of coronary artery disease and can readily be identified on non-gated computed ...

Continuous Blood Sampling in Small Animal Positron Emission Tomography/Computed Tomography Enables the Measurement of the Arterial Input Function

El muestreo sanguíneo continuo en tomografía por emisión de positrones de animales pequeños permite la medición de la función de entrada arterial

For quantitative analysis and bio-kinetic modeling of positron emission tomography/computed tomography (PET/CT) data, the determination of the temporal ...

Tissue Preparation Techniques for Contrast-Enhanced Micro Computed Tomography Imaging of Large Mammalian Cardiac Models with Chronic Disease

Técnicas de preparación de tejidos para imágenes de microtomografía computarizada mejoradas con contraste de modelos cardíacos de mamíferos grandes con enfermedades crónicas

Structural remodeling is a common consequence of chronic pathological stresses imposed on the heart. Understanding the architectural and compositional ...

DUCT: Double Resin Casting followed by Micro-Computed Tomography for 3D Liver Analysis

DUCT: Fundición de doble resina seguida de tomografía microcomputarizada para análisis hepático 3D

The liver is the biggest internal organ in humans and mice, and high auto-fluorescence presents a significant challenge for assessing the ...

Sample Preparation for Computed Tomography-based Three-dimensional Visualization of Murine Hind-limb Vessels

Preparación de muestras para la visualización tridimensional basada en tomografía computarizada de vasos murinos de las extremidades posteriores

Blood vessels are complex networks with tree-like structures, and vascular networks are essential for maintaining both circulation and maintaining organ ...