Name: colonization of euprymna scolopes squid by vibrio fischeri
Uploaded: 2012-03-01T13:00:00
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लेखकों व्यंग्य सुविधा समर्थन के लिए और इस पांडुलिपि पर टिप्पणी, माइकल Hadfield और क्षेत्र संग्रह के दौरान सहायता के लिए Kewalo समुद्री प्रयोगशाला, और रूबी और McFall-Ngai इस प्रोटोकॉल के लिए योगदान के लिए प्रयोगशाला के सदस्यों के लिए Gyllborg Mattias धन्यवाद. मेंडल प्रयोगशाला में काम NSF के IOS 0843633 द्वारा समर्थित है.

1. बैक्टीरियल Inocula की तैयारी <ol><li> 0 दिन दो व्यंग्य टीका, प्लेट एलबीएस पर प्रासंगिक जीवाणु उपभेदों 13 अगर पहले दिन. </li><li> 25-28 ° रात भर सी बैक्टीरिया को सेते हैं. </li><li> 1 दिन प्रत्येक वी. की एक ?...

<ol>
	<li>Aas, J. A., Paster, B. J., Stokes, L. N., Olsen, I., Dewhirst, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+normal+bacterial+flora+of+the+oral+cavity.">Defining the normal bacterial flora of the oral cavity.</a> J. Clin. Microbiol. 43, 5721-5732 (2005).</li><li>Mandel, M. J., Wollenberg, M. S., Stabb, E. V., Visick, K. L., Ruby, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+regulatory+gene+is+sufficient+to+alter+bacterial+host+range.">A single regulatory gene is sufficient to alter bacterial host range.</a> Nature. 458, 215-218 (2009).</li><li>Grice, E. A., Segre, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+skin+microbiome.">The skin microbiome.</a> Nat. Rev. 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G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Symbiont+recognition+and+subsequent+morphogenesis+as+early+events+in+an+animal-bacterial+mutualism.">Symbiont recognition and subsequent morphogenesis as early events in an animal-bacterial mutualism.</a> Science. 254, 1491-1494 (1991).</li><li>Jones, B., Nishiguchi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Counterillumination+in+the+Hawaiian+bobtail+squid,+Euprymna+scolopes+Berry+(Mollusca:+Cephalopoda).">Counterillumination in the Hawaiian bobtail squid, Euprymna scolopes Berry (Mollusca: Cephalopoda).</a> Marine Biology. 144, 1151-1155 (2004).</li><li>Graf, J., Ruby, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host-derived+amino+acids+support+the+proliferation+of+symbiotic+bacteria.">Host-derived amino acids support the proliferation of symbiotic bacteria.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 1818-1822 (1998).</li><li>Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+squid+that+glows+in+the+night:+development+of+an+animal-bacterial+mutualism.">A squid that glows in the night: development of an animal-bacterial mutualism.</a> J. Bacteriol. 174, 4865-4870 (1992).</li><li>Lee, P. N., McFall-Ngai, M. J., Callaerts, P., de Couet, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Hawaiian+bobtail+squid+(Euprymna+scolopes):+a+model+to+study+the+molecular+basis+of+eukaryote-prokaryote+mutualism+and+the+development+and+evolution+of+morphological+novelties+in+cephalopods.">The Hawaiian bobtail squid (Euprymna scolopes): a model to study the molecular basis of eukaryote-prokaryote mutualism and the development and evolution of morphological novelties in cephalopods.</a> Cold Spring Harbor Protocols. , (2009).</li><li>Stabb, E., Visick, K., Millikan, D., Corcoran, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Vibrio+fischeri-Euprymna+scolopes+symbiosis:+a+model+marine+animal-bacteria+interaction.">The Vibrio fischeri-Euprymna scolopes symbiosis: a model marine animal-bacteria interaction.</a> Recent Advances in Marine Science and Technology. , (2001).</li><li>Boettcher, K. J., Ruby, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Depressed+light+emission+by+symbiotic+Vibrio+fischeri+of+the+sepiolid+squid+Euprymna+scolopes.">Depressed light emission by symbiotic Vibrio fischeri of the sepiolid squid Euprymna scolopes.</a> J. Bacteriol. 172, 3701-3706 (1990).</li><li>Fidopiastis, P. M., von Boletzky, S., Ruby, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+niche+for+Vibrio+logei,+the+predominant+light+organ+symbiont+of+squids+in+the+genus+Sepiola.">A new niche for Vibrio logei, the predominant light organ symbiont of squids in the genus Sepiola.</a> J. Bacteriol. 180, 59-64 (1998).</li><li>Bose, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+rapid+evolution+of+the+luxR-luxI+intergenic+region+to+the+diverse+bioluminescence+outputs+of+Vibrio+fischeri+strains+isolated+from+different+environments.">Contribution of rapid evolution of the luxR-luxI intergenic region to the diverse bioluminescence outputs of Vibrio fischeri strains isolated from different environments.</a> Appl. Environ. Microbiol. 77, 2445-2457 (2011).</li></ol>

बसाना वर्णित परख एक नियंत्रित पर्यावरण प्रयोगशाला में विश्लेषण के लिए एक प्राकृतिक सहजीवी प्रक्रिया की अनुमति देता है. जैसे, यह विभिन्न प्राकृतिक आइसोलेट्स द्वारा उत्परिवर्ती उपभेदों, और विभिन्न र?...

<table border="1"><tbody><tr><td> अभिकर्मक का नाम </td><td> कंपनी </td><td> सूचीपत्र संख्या </td><td> टिप्पणियाँ </td></tr><tr><td> ग्लास संस्कृति ट्यूबें, 16 मिमी व्यास </td><td> VWR </td><td> 47729-580 </td><td></td></tr><tr><td> ग्लास संस्कृति ट्यूबों के लिए कैप्स </td><td> मछुआ </td><td> NC9807998 </td><td></td></tr><tr><td> 600 आयुध डिपो के निर्धारण के लिए दृष्टिगोचर स्पेक्ट्रोफोटोमीटर </td><td> Biowave </td><td> CO8000 </td><td> कोई 600 आयुध डिपो को मापने के लिए सक्षम स्पेक्ट्रोफोटोमीटर काम करेंगे. इस इकाई कांच संस्कृति ट्यूबों में आयुध डिपो के 600 तरल सीधे उपाय कर सकते हैं. Inoculum गणना की कुछ समायोजन आवश्यक हो सकता है प्रयोग किया जाता साधन के आधार पर हो सकता है. </td></tr><tr><td> GloMax 20/20 एकल ट्यूब Luminometer के </td><td> Promega </td><td> E5311 </td><td> टर्नर BioSystems 20/20n Luminometer के लिए बराबर. Microcentrifuge ट्यूब धारक भी शामिल है. </td></tr><tr><td> 20 GloMax / 20 लाइट मानक </td><td> Promega </td><td> E5341 </td><td> Luminometer अंशांकन के लिए. </td></tr><tr><td> Refractometer, हाथ </td><td> फोस्टर और स्मिथ तैराकी </td><td> CD - 14,035 </td><td> विआयनीकृत पानी से प्रत्येक का उपयोग करने से पहले जांचना. विआयनीकृत पानी नमक को रोकने के निर्माण के साथ हर प्रयोग के बाद कुल्ला. </td></tr><tr><td> तुरंत महासागर (कृत्रिम समुद्री जल ध्यान केंद्रित) </td><td> फोस्टर और स्मिथ तैराकी </td><td> CD - 16,881 </td><td> विआयनीकृत पानी में 35 ‰ पर तैयार, refractometer का उपयोग, एक 0.2 माइक्रोन SFCA फिल्टर के माध्यम से तो फिल्टर. </td></tr><tr><td> निस्पंदन इकाई </td><td> Nalgene </td><td> 158-0020 </td><td> Surfactant मुक्त सेलूलोज़ एसीटेट (SFCA) झिल्ली, 0.2 माइक्रोन. हम कुछ surfactant युक्त पी.इ.एस. फिल्टर के साथ चर परिणाम मनाया गया है. </td></tr><tr><td> स्थानांतरण pipettes </td><td> मछुआ </td><td> 13-711 -9:00 </td><td> कैंची या रेजर ब्लेड का प्रयोग, सफाई विंदुक टिप व्यास को बढ़ाने के लिए और विद्रूप hatchlings निचोड़ से बचने के लिए सबसे पहले रिज के ऊपर टिप कटौती. </td></tr><tr><td> प्रयोज्य नमूना कटोरे (प्लास्टिक tumblers) </td><td> धूमकेतु </td><td> T9S (9 ऑउंस.) </td><td> टीका के लिए ऊपरी 3 व्यास के साथ कटोरे, &quot;कम 2 व्यास ¼&quot; ¼ के, 3 ऊंचाई कटोरे &quot;एक समरूप माहौल बनाने के रूप में वे कोई नीचे रिम, जिसमें व्यंग्य कम ऑक्सीजन एक आला में फंस सकता है. आकार अनुकूलित है के लिए 40 मिलीलीटर inoculum. पर उपलब्ध webstaurantstore.com, 619PI9 #. </td></tr><tr><td> ड्रोसोफिला शीशियों </td><td> VWR </td><td> 89092-720 </td><td> शीशी व्यास luminometer PMT पर खोलने से मेल खाता है. </td></tr><tr><td> 1.5 मिलीलीटर Microcentrifuge ट्यूबें </td><td> आईएससी Bioexpress </td><td> सी-3217-1CS </td><td> ट्यूब pestles के आकार फिट होगा. </td></tr><tr><td> इथेनॉल, 200 सबूत </td><td> मछुआ </td><td> BP2818-100 </td><td></td></tr><tr><td> Pestles </td><td> Kimble चेस / Kontes </td><td> 749521-1500 </td><td></td></tr><tr><td> चढ़ाना मोती, 5 मिमी व्यास </td><td> Kimble चेस </td><td> 13500 5 </td><td> ट्यूब और आटोक्लेव प्रति 5 तैयार. </td></tr></tbody></table>

colonization of euprymna scolopes squid by vibrio fischeri

Specific bacteria are found in association with animal tissue1-5. Such host-bacterial associations (symbioses) can be detrimental (pathogenic), have no fitness consequence (commensal), or be beneficial (mutualistic). While much attention has been given to pathogenic interactions, little is known about the processes that dictate the reproducible acquisition of beneficial/commensal bacteria from the environment. The light-organ mutualism between the marine Gram-negative bacterium V. fischeri and the Hawaiian bobtail squid, E. scolopes, represents a highly specific interaction in which one host (E. scolopes) establishes a symbiotic relationship with only one bacterial species (V. fischeri) throughout the course of its lifetime6,7. Bioluminescence produced by V. fischeri during this interaction provides an anti-predatory benefit to E. scolopes during nocturnal activities8,9, while the nutrient-rich host tissue provides V. fischeri with a protected niche10. During each host generation, this relationship is recapitulated, thus representing a predictable process that can be assessed in detail at various stages of symbiotic development. In the laboratory, the juvenile squid hatch aposymbiotically (uncolonized), and, if collected within the first 30-60 minutes and transferred to symbiont-free water, cannot be colonized except by the experimental inoculum6. This interaction thus provides a useful model system in which to assess the individual steps that lead to specific acquisition of a symbiotic microbe from the environment11,12.
Here we describe a method to assess the degree of colonization that occurs when newly hatched aposymbiotic E. scolopes are exposed to (artificial) seawater containing V. fischeri. This simple assay describes inoculation, natural infection, and recovery of the bacterial symbiont from the nascent light organ of E. scolopes. Care is taken to provide a consistent environment for the animals during symbiotic development, especially with regard to water quality and light cues. Methods to characterize the symbiotic population described include (1) measurement of bacterially-derived bioluminescence, and (2) direct colony counting of recovered symbionts.

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Colonization of Euprymna scolopes Squid by Vibrio fischeri

विधि है जिसके द्वारा हवाई कट दुम व्यंग्य प्रक्रिया की रूपरेखा,<em&gt; Euprymna scolopes</em&gt; और इसके जीवाणु symbiont<em&gt; विब्रियो fischeri</em&gt; अलग और फिर उठाया बैक्टीरिया द्वारा विद्रूप प्रकाश अंग के विशिष्ट बसाना के लिए अनुमति देने के लिए शुरू कर रहे हैं. Bacterially व्युत्पन्न luminescence के द्वारा और प्रत्यक्ष कॉलोनी गिनती द्वारा औपनिवेशीकरण का पता लगाने में वर्णित हैं.

की उपनिवेशण Euprymna scolopes द्वारा व्यंग्य विब्रियो fischeri</em

Specific bacteria are found in association with animal tissue1-5. Such host-bacterial associations (symbioses) can be detrimental (pathogenic), have no ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Colonization of Euprymna scolopes Squid by Vibrio fischeri

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की जांच के लिए एक अधिक संवेदनशील और विशिष्ट chromogenic अगर मध्यम का विकास<em&gt; विब्रियो parahaemolyticus</em&gt; और अन्य<em&gt; विब्रियो</em&gt; प्रजाति

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Enterohemorrhagic E. coli (EHEC) O157:H7, which is a foodborne pathogen that causesdiarrhea, hemorrhagic colitis (HS), and hemolytic uremic syndrome ...