Name: colonization of euprymna scolopes squid by vibrio fischeri
Uploaded: 2012-03-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Colonization of Euprymna scolopes Squid by Vibrio fischeri at JoVE.com

Forfatterne takker Mattias Gyllborg for blekksprut anlegg støtte og for kommentarer til dette manuskriptet, Michael Hadfield og Kewalo Marine Laboratory for hjelp under felt innsamling, og medlemmer av Ruby og McFall-Ngai Laboratorium for bidrag til denne protokollen. Arbeid i Mandel Laboratory er støttet av NSF IOS-0843633.

1. Utarbeidelse av Bakteriell Inocula <ol><li> Dag 0 To dager før blekksprut inokulasjon, plate de aktuelle bakteriestammene på LBS 13 agar. </li><li> Inkuber bakterier ved 25-28 ° C over natten. </li><li> Dag 1 Inokuler 3 ml LBS medium i et glass kultur rør med en koloni av hver V. fischeri belastning for infeksjon. Forbered duplisere rør som backup. </li><li> Dag 2 (Koordinere bakterielle skritt 01.04 til 01.06 m...

<ol>
	<li>Aas, J. A., Paster, B. J., Stokes, L. N., Olsen, I., Dewhirst, F. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defining+the+normal+bacterial+flora+of+the+oral+cavity.">Defining the normal bacterial flora of the oral cavity.</a> J. Clin. Microbiol. 43, 5721-5732 (2005).</li><li>Mandel, M. J., Wollenberg, M. S., Stabb, E. V., Visick, K. L., Ruby, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+single+regulatory+gene+is+sufficient+to+alter+bacterial+host+range.">A single regulatory gene is sufficient to alter bacterial host range.</a> Nature. 458, 215-218 (2009).</li><li>Grice, E. A., Segre, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+skin+microbiome.">The skin microbiome.</a> Nat. Rev. Microbiol. 9, 244-253 (2011).</li><li>Malic, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+and+identification+of+specific+bacteria+in+wound+biofilms+using+peptide+nucleic+acid+fluorescent+in+situ+hybridization+(PNA+FISH).">Detection and identification of specific bacteria in wound biofilms using peptide nucleic acid fluorescent in situ hybridization (PNA FISH).</a> Microbiology. 155, 2603-2611 (2009).</li><li>Turnbaugh, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+microbiome+project.">The human microbiome project.</a> Nature. 449, 804-810 (2007).</li><li>Nyholm, S. V., McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+winnowing:+establishing+the+squid-Vibrio+symbiosis.">The winnowing: establishing the squid-Vibrio symbiosis.</a> Nat. Rev. Microbiol. 2, 632-642 (2004).</li><li>Ruby, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lessons+from+a+cooperative,+bacterial-animal+association:+the+Vibrio+fischeri-Euprymna+scolopes+light+organ+symbiosis.">Lessons from a cooperative, bacterial-animal association: the Vibrio fischeri-Euprymna scolopes light organ symbiosis.</a> Annu. Rev. Microbiol. 50, 591-624 (1996).</li><li>McFall-Ngai, M. J., Ruby, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Symbiont+recognition+and+subsequent+morphogenesis+as+early+events+in+an+animal-bacterial+mutualism.">Symbiont recognition and subsequent morphogenesis as early events in an animal-bacterial mutualism.</a> Science. 254, 1491-1494 (1991).</li><li>Jones, B., Nishiguchi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Counterillumination+in+the+Hawaiian+bobtail+squid,+Euprymna+scolopes+Berry+(Mollusca:+Cephalopoda).">Counterillumination in the Hawaiian bobtail squid, Euprymna scolopes Berry (Mollusca: Cephalopoda).</a> Marine Biology. 144, 1151-1155 (2004).</li><li>Graf, J., Ruby, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host-derived+amino+acids+support+the+proliferation+of+symbiotic+bacteria.">Host-derived amino acids support the proliferation of symbiotic bacteria.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 1818-1822 (1998).</li><li>Ruby, E. G., McFall-Ngai, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+squid+that+glows+in+the+night:+development+of+an+animal-bacterial+mutualism.">A squid that glows in the night: development of an animal-bacterial mutualism.</a> J. Bacteriol. 174, 4865-4870 (1992).</li><li>Lee, P. N., McFall-Ngai, M. J., Callaerts, P., de Couet, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Hawaiian+bobtail+squid+(Euprymna+scolopes):+a+model+to+study+the+molecular+basis+of+eukaryote-prokaryote+mutualism+and+the+development+and+evolution+of+morphological+novelties+in+cephalopods.">The Hawaiian bobtail squid (Euprymna scolopes): a model to study the molecular basis of eukaryote-prokaryote mutualism and the development and evolution of morphological novelties in cephalopods.</a> Cold Spring Harbor Protocols. , (2009).</li><li>Stabb, E., Visick, K., Millikan, D., Corcoran, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Vibrio+fischeri-Euprymna+scolopes+symbiosis:+a+model+marine+animal-bacteria+interaction.">The Vibrio fischeri-Euprymna scolopes symbiosis: a model marine animal-bacteria interaction.</a> Recent Advances in Marine Science and Technology. , (2001).</li><li>Boettcher, K. J., Ruby, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Depressed+light+emission+by+symbiotic+Vibrio+fischeri+of+the+sepiolid+squid+Euprymna+scolopes.">Depressed light emission by symbiotic Vibrio fischeri of the sepiolid squid Euprymna scolopes.</a> J. Bacteriol. 172, 3701-3706 (1990).</li><li>Fidopiastis, P. M., von Boletzky, S., Ruby, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+niche+for+Vibrio+logei,+the+predominant+light+organ+symbiont+of+squids+in+the+genus+Sepiola.">A new niche for Vibrio logei, the predominant light organ symbiont of squids in the genus Sepiola.</a> J. Bacteriol. 180, 59-64 (1998).</li><li>Bose, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+rapid+evolution+of+the+luxR-luxI+intergenic+region+to+the+diverse+bioluminescence+outputs+of+Vibrio+fischeri+strains+isolated+from+different+environments.">Contribution of rapid evolution of the luxR-luxI intergenic region to the diverse bioluminescence outputs of Vibrio fischeri strains isolated from different environments.</a> Appl. Environ. Microbiol. 77, 2445-2457 (2011).</li></ol>

Koloniseringen analysen beskrives tillater analyse av et naturlig symbiotisk prosess i et kontrollert miljø laboratorium. Som sådan kan den brukes til å vurdere kolonisering av muterte stammer, av ulike naturlige isolater og under ulike kjemiske regimer. Variasjoner på de eksperimentene som er beskrevet blir ofte brukt til å vurdere ulike sider ved symbiose. Kinetikken av kolonisering kan måles ved å undersøke luminescence under den første 24 timer, noe som kan oppdages automatisk i en scintillation skranke der...

<table border="1"><tbody><tr><td> Navn på reagens </td><td> Firma </td><td> Katalog nummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td> Glass Kultur Rør, 16 mm diameter </td><td> VWR </td><td> 47729-580 </td><td></td></tr><tr><td> Landskamper for Glass Kultur Tubes </td><td> Fisher </td><td> NC9807998 </td><td></td></tr><tr><td> Synlig spektrofotometer for bestemmelse av OD 600 </td><td> Biowave </td><td> CO8000 </td><td> Enhver spektrofotometer stand til å måle OD 600 vil fungere. Denne enheten kan måle OD 600 av væske direkte i glasset kultur rørene. Noen justering av podestoff beregningen kan være nødvendig, avhengig av instrumentet som brukes. </td></tr><tr><td> GloMax 20/20 Single-Tube luminometer </td><td> Promega </td><td> E5311 </td><td> Tilsvarer Turner BioSystems 20/20n luminometer. Inkluderer mikrosentrifuge rørholder. </td></tr><tr><td> GloMax 20/20 Lys Standard </td><td> Promega </td><td> E5341 </td><td> For luminometer kalibrering. </td></tr><tr><td> Refraktometer Håndholdt </td><td> Foster og Smith Aquatics </td><td> CD-14035 </td><td> Kalibrer før hver bruk med avionisert vann. Skyll etter hver bruk med deionisert vann for å forhindre salt oppbygging. </td></tr><tr><td> Instant Ocean (kunstig sjøvann konsentrat) </td><td> Foster &amp; Smith Aquatics </td><td> CD-16881 </td><td> Forbered ved 35 ‰ i avionisert vann ved hjelp av refraktometer, så filteret gjennom en 0,2 mikrometer SFCA filter. </td></tr><tr><td> Filtrering Unit </td><td> Nalgene </td><td> 158-0020 </td><td> Surfactant-free celluloseacetat (SFCA) membran, 0,2 mikrometer. Vi har observert varierende resultater med noen surfactant-inneholder PES filtre. </td></tr><tr><td> Overfør Pipettes </td><td> Fisher </td><td> 13-711 -9AM </td><td> Bruk saks eller barberblad, kuttet spissen rent over den første åsen for å øke diameteren på pipettespissen og unngå å klemme blekkspruten hatchlings. </td></tr><tr><td> Engangs Smak Boller (plast tumblers) </td><td> Comet </td><td> T9S (9 oz.) </td><td> Skåler til inokulasjon, med øvre diameter 3 ¼ &quot;, nedre diameter 2 ¼&quot;, høyde 3 &quot;. Boller skape et homogent miljø som de ikke har nederste kanten, der blekkspruten kan bli fanget i en lav-oksygen nisje. Størrelsen er optimalisert for 40-ml podestoff. Tilgjengelig webstaurantstore.com, # 619PI9. </td></tr><tr><td> Drosophila Hetteglass </td><td> VWR </td><td> 89092-720 </td><td> Hetteglass diameter samsvarer med åpningen på luminometer PMT. </td></tr><tr><td> 1,5 ml Mikrosentrifugerør </td><td> ISC Bioexpress </td><td> C-3217-1CS </td><td> Rør må passe formen på pestles. </td></tr><tr><td> Etanol, 200 Proof </td><td> Fisher </td><td> BP2818-100 </td><td></td></tr><tr><td> Pestles </td><td> Kimble Chase / Kontes </td><td> 749521-1500 </td><td></td></tr><tr><td> Kontaktflate perler, 5 mm diameter </td><td> Kimble Chase </td><td> 13500 5 </td><td> Forbered 5 per rør og autoklav. </td></tr></tbody></table>

colonization of euprymna scolopes squid by vibrio fischeri

Spesifikke bakterier er funnet i sammenheng med animalsk vev 1-5. Slike host-bakterielle foreninger (symbiose) kan være skadelig (patogene), har ingen fitness konsekvens (Commensal), eller være fordelaktig (mutualistic). Mens mye oppmerksomhet har blitt gitt til patogene interaksjoner, er lite kjent om de prosesser som avgjør den reproduserbare oppkjøpet av gunstige / Commensal bakterier fra omgivelsene. Lyset-orgelet mutualism mellom de marine Gram-negative bakterien V. fischeri og den hawaiiske Bobtail squid, E. scolopes, representerer en svært spesifikk interaksjon der en vert (E. scolopes) etablerer et symbiotisk forhold med bare en bakteriearter (V. fischeri) i løpet av sin levetid 6,7. Bioluminesens produsert av V. fischeri løpet av denne interaksjonen gir en anti-rov fordel for E. scolopes under nattlige aktiviteter 8,9, mensden næringsrikt vert vev gir V. fischeri med en beskyttet nisje 10. Under hver vert generasjon, blir dette forholdet rekapitulert, og dermed representerer en forutsigbar prosess som kan vurderes i detalj på ulike stadier av symbiotisk utvikling. I laboratoriet, juvenile blekksprut luke aposymbiotically (uncolonized), og, hvis samlet i løpet av de første 30-60 minutter og overført til symbiont-fritt vann, ikke kan bli kolonisert med unntak av den eksperimentelle podestoff 6. Denne interaksjonen gir dermed en nyttig modell system der for å vurdere de enkelte trinn som fører til spesifikke oppkjøp av et symbiotisk mikrobe fra miljøet 11,12. Her beskriver vi en metode for å vurdere graden av kolonisering som oppstår når nyklekkede aposymbiotic E. scolopes er utsatt for (kunstig) sjøvann som inneholder V. fischeri. Denne enkle analysen beskriver inokulasjon, naturlig infeksjon, og utvinningav bakteriell symbiont fra den gryende lysorganet E. scolopes. Care er tatt for å gi en konsekvent miljø for dyrene under symbiotisk utvikling, spesielt med hensyn til vannkvalitet og lette signaler. Metoder for å karakterisere det symbiotiske befolkningen beskrevet inkluderer (1) måling av bacterially-avledet bioluminesens, og (2) direkte koloni telling av gjenvunne symbionter.

Watch this Scientific Journal Video about Colonization of Euprymna scolopes Squid by Vibrio fischeri at JoVE.com

Colonization of Euprymna scolopes Squid by Vibrio fischeri

Metoden beskriver prosedyren der den hawaiiske Bobtail squid,<em&gt; Euprymna scolopes</em&gt; Og dens bakteriell symbiont,<em&gt; Vibrio fischeri</em&gt;, Er hevet separat og deretter introdusert for å tillate bestemte kolonisering av blekksprut lys orgel av bakterien. Colonization påvisning av bacterially-avledet luminescens og ved direkte koloni telling er beskrevet.

Kolonisering av Euprymna scolopes Squid av Vibrio fischeri</em

Specific bacteria are found in association with animal tissue1-5. Such host-bacterial associations (symbioses) can be detrimental (pathogenic), have no ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Colonization of Euprymna scolopes Squid by Vibrio fischeri

Assessing Hepatic Metabolic Changes During Progressive Colonization of Germ-free Mouse by 1H NMR Spectroscopy

Assessing Hepatic Metabolic Changes During Progressive Colonization of Germ-free Mouse by 1H NMR Spectroscopy

Vurdere Nedsatt Metabolske endringer under Progressive Colonization of Germ-free Mouse av 1 H NMR spektroskopi

It is well known that gut bacteria contribute significantly to the host homeostasis, providing a range of benefits such as immune protection and vitamin ...

Quantification of Fungal Colonization, Sporogenesis, and Production of Mycotoxins Using Kernel Bioassays

Kvantifisering av Fungal Colonization, Sporogenesis, og produksjon av mykotoksiner Bruk Kernel bioassay

The rotting of grains by seed-infecting fungi poses one of the greatest economic challenges to cereal production worldwide, not to mention serious risks ...

TransFLP &#x2014; A Method to Genetically Modify Vibrio cholerae Based on Natural Transformation and FLP-recombination

TransFLP - en metode for å genmodifisere<em&gt; Vibrio cholerae</em&gt; Basert på Natural Transformation og FLP-rekombinasjon

Several methods are available to manipulate bacterial chromosomes1-3. Most of these protocols rely on the insertion of conditionally replicative plasmids ...

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Characterization of Inflammatory Responses During Intranasal Colonization with Streptococcus pneumoniae

Karakterisering av inflammatoriske responser under intranasal kolonisering med streptokokker lungebetennelse

Nasopharyngeal colonization by Streptococcus pneumoniae is a prerequisite to invasion to the lungs or bloodstream1. This organism is capable of colonizing ...

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

Gransker effekten av Probiotika på Pneumokokk Colonization Bruke en<em&gt; In Vitro</em&gt; Overholdelse analysen

Adherence of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) to the epithelial lining of the nasopharynx can result in colonization and is considered a ...

Development of a More Sensitive and Specific Chromogenic Agar Medium for the Detection of Vibrio parahaemolyticus and Other Vibrio Species

Development of a More Sensitive and Specific Chromogenic Agar Medium for the Detection of Vibrio parahaemolyticus and Other Vibrio Species

Utvikling av en mer sensitiv og spesifikk kromogen Agar Medium for deteksjon av<em&gt; Vibrio parahaemolyticus</em&gt; Og annet<em&gt; Vibrio</em&gt; Arter

Foodborne infections in the US caused by Vibrio species have shown an upward trend. In the genus Vibrio, V. parahaemolyticus is responsible for the ...

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

A Murine Model of Group B Streptococcus Vaginal Colonization

En Murine modell av gruppe B<em&gt; Streptococcus</em&gt; Vaginal Colonization

Streptococcus agalactiae (group B Streptococcus, GBS), is a Gram-positive, asymptomatic colonizer of the human gastrointestinal tract and vaginal tract of ...

Laboratory Techniques Used to Maintain and Differentiate Biotypes of Vibrio cholerae Clinical and Environmental Isolates

Laboratory Techniques Used to Maintain and Differentiate Biotypes of Vibrio cholerae Clinical and Environmental Isolates

Laboratorieteknikker brukes til å opprettholde og skille biotyper av<em&gt; Vibrio cholerae</em&gt; Kliniske og miljømessige isolater

The aquatic Gram-negative bacterium Vibrio cholerae is the etiological agent of the infectious gastrointestinal disease cholera. Due to the global ...

Induction of Cellular Differentiation and Single Cell Imaging of Vibrio parahaemolyticus Swimmer and Swarmer Cells

Induction of Cellular Differentiation and Single Cell Imaging of Vibrio parahaemolyticus Swimmer and Swarmer Cells

Induksjon av Cellulær Differensiering og Single Cell Imaging of<em&gt; Vibrio parahaemolyticus</em&gt; Svømmer- og svovelceller

The ability to study the intracellular localization of proteins is essential for the understanding of many cellular processes. In turn, this requires the ...

Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

Påvisning av enterohemorrhagiske Escherichia Coli kolonisering i Murine vert av ikke-invasiv i Vivo bioluminescens System

Enterohemorrhagic E. coli (EHEC) O157:H7, which is a foodborne pathogen that causesdiarrhea, hemorrhagic colitis (HS), and hemolytic uremic syndrome ...