Name: infection of zebrafish embryos with intracellular bacterial pathogens
Uploaded: 2012-03-15T12:00:00
Duration: 11 min 18 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens at JoVE.com

فإن الكتاب أود أن أشكر تشاو تسوى، الطابق دي كورت، ستوب استير وكارفاليو رالف لصور في الشكل 4، Nehrdich أولريك وديفي دي ويت لرعاية الأسماك، وغيرها من أعضاء مختبر لاجراء مناقشات مفيدة. ويدعم هذا العمل الذي يقوم به برنامج ميكس الذكية من وزارة الشؤون الاقتصادية الهولندية ووزارة التعليم والثقافة والعلوم، والمفوضية الأوروبية مشروع الإطار 7 ZF-الصحية (الصحة-F4-2010-242048) والاتحاد الأوروبي وماري كوري، التدريب الأولي شبكة FishForPharma (PITN-GA-2011-289209)، والتي NHMRC استرالي (637394). يتم اعتماد الأسترالي التجديدي معهد الطب من المنح المقدمة من حكومة ولاية فيكتوريا والحكومة الأسترالية.

<ol>
	<li>Meijer, A. H., Spaink, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host-pathogen+interactions+made+transparent+with+the+zebrafish+model.">Host-pathogen interactions made transparent with the zebrafish model.</a> Curr. Drug Targets. 12, 1000-1017 (2011).</li><li>Davis, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+visualization+of+mycobacterium-macrophage+interactions+leading+to+initiation+of+granuloma+formation+in+zebrafish+embryos.">Real-time visualization of mycobacterium-macrophage interactions leading to initiation of granuloma formation in zebrafish embryos.</a> Immunity. 17, 693-702 (2002).</li><li>vander Sar, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+embryos+as+a+model+host+for+the+real+time+analysis+of+Salmonella+typhimurium+infections.">Zebrafish embryos as a model host for the real time analysis of Salmonella typhimurium infections.</a> Cell Microbiol. 5, 601-611 (2003).</li><li>Zakrzewska, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage-specific+gene+functions+in+Spi1-directed+innate+immunity.">Macrophage-specific gene functions in Spi1-directed innate immunity.</a> Blood. 116, 1-11 (2010).</li><li>Le Guyader, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origins+and+unconventional+behavior+of+neutrophils+in+developing+zebrafish.">Origins and unconventional behavior of neutrophils in developing zebrafish.</a> Blood. 111, 132-141 (2008).</li><li>Herbomel, P., Thisse, B., Thisse, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+and+behaviour+of+early+macrophages+in+the+zebrafish+embryo.">Ontogeny and behaviour of early macrophages in the zebrafish embryo.</a> Development. 126, 3735-3745 (1999).</li><li>Alibaud, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Mycobacterium+marinum+TesA+mutant+defective+for+major+cell+wall-associated+lipids+is+highly+attenuated+in+Dictyostelium+discoideum+and+zebrafish+embryos.">A Mycobacterium marinum TesA mutant defective for major cell wall-associated lipids is highly attenuated in Dictyostelium discoideum and zebrafish embryos.</a> Mol. Microbiol. 80, 919-934 (2011).</li><li>Carvalho, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-throughput+screen+for+tuberculosis+progression.">A high-throughput screen for tuberculosis progression.</a> PLoS One. 6, 16779-16779 (2011).</li><li>van der Sar, A. M., Spaink, H. P., Zakrzewska, A., Bitter, W., Meijer, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specificity+of+the+zebrafish+host+transcriptome+response+to+acute+and+chronic+mycobacterial+infection+and+the+role+of+innate+and+adaptive+immune+components.">Specificity of the zebrafish host transcriptome response to acute and chronic mycobacterial infection and the role of innate and adaptive immune components.</a> Mol. Immunol. 46, 2317-2332 (2009).</li><li>Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+Zebrafish+Embryos+to+Analyze+Gene+Function.">Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function.</a> J. Vis. Exp. (25), e1115-e1115 (2009).</li><li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Zebrafish+Book.">The Zebrafish Book.</a> A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Brachydanio rerio). , (1993).</li><li>Gutzman, J. H., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+Brain+Ventricle+Injection.">Zebrafish Brain Ventricle Injection.</a> J. Vis. Exp. (26), e1218-e1218 (2009).</li><li>Ellett, F., Pase, L., Hayman, J. W., Andrianopoulos, A., Lieschke, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mpeg1+promoter+transgenes+direct+macrophage-lineage+expression+in+zebrafish.">mpeg1 promoter transgenes direct macrophage-lineage expression in zebrafish.</a> Blood. 117, 49-56 (2011).</li><li>Stockhammer, O. W., Zakrzewska, A., Hegedus, Z., Spaink, H. P., Meijer, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+profiling+and+functional+analyses+of+the+zebrafish+embryonic+innate+immune+response+to+Salmonella+infection.">Transcriptome profiling and functional analyses of the zebrafish embryonic innate immune response to Salmonella infection.</a> J. Immunol. 182, 5641-5653 (2009).</li><li>Renshaw, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transgenic+zebrafish+model+of+neutrophilic+inflammation.">A transgenic zebrafish model of neutrophilic inflammation.</a> Blood. 108, 3976-3978 (2006).</li><li>Stoop, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+embryo+screen+for+mycobacterial+genes+involved+in+the+initiation+of+granuloma+formation+reveals+a+newly+identified+ESX-1+component.">Zebrafish embryo screen for mycobacterial genes involved in the initiation of granuloma formation reveals a newly identified ESX-1 component.</a> Dis. Model Mech. 4, 526-536 (2011).</li><li>Levraud, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+zebrafish+IFN+receptor:+implications+for+the+origin+of+the+vertebrate+IFN+system.">Identification of the zebrafish IFN receptor: implications for the origin of the vertebrate IFN system.</a> Journal of Immunology. 178, 4385-4394 (2007).</li><li>Levraud, J. P., Colucci-Guyon, E., Redd, M. J., Lutfalla, G., Herbomel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+analysis+of+zebrafish+innate+immunity.">In vivo analysis of zebrafish innate immunity.</a> Methods Mol. Biol. 415, 337-363 (2008).</li><li>Brothers, K. M., Newman, Z. R., Wheeler, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+disseminated+candidiasis+in+zebrafish+reveals+role+of+phagocyte+oxidase+in+limiting+filamentous+growth.">Live imaging of disseminated candidiasis in zebrafish reveals role of phagocyte oxidase in limiting filamentous growth.</a> Eukaryot. Cell. 10, 932-944 (2011).</li><li>Colucci-Guyon, E., Tinevez, J. Y., Renshaw, S. A., Herbomel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+of+professional+phagocytes+in+vivo:+unlike+macrophages,+neutrophils+engulf+only+surface-associated+microbes.">Strategies of professional phagocytes in vivo: unlike macrophages, neutrophils engulf only surface-associated microbes.</a> J. Cell Sci. 124, 3053-3059 (2011).</li><li>van Soest, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+static+immersion+and+intravenous+injection+systems+for+exposure+of+zebrafish+embryos+to+the+natural+pathogen+Edwardsiella+tarda.">Comparison of static immersion and intravenous injection systems for exposure of zebrafish embryos to the natural pathogen Edwardsiella tarda.</a> BMC Immunology. 12, 58-58 (2011).</li><li>Adams, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+tolerance+in+replicating+mycobacteria+mediated+by+a+macrophage-induced+efflux+mechanism.">Drug tolerance in replicating mycobacteria mediated by a macrophage-induced efflux mechanism.</a> Cell. 145, 39-53 (2011).</li><li>Ellett, F. L., Lieschke, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computational+quantification+of+fluorescent+leukocyte+numbers+in+zebrafish+embryos.">Computational quantification of fluorescent leukocyte numbers in zebrafish embryos.</a> Methods in Enzymology. , (2011).</li><li>Yuan, S., Sun, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+mRNA+and+Morpholino+Antisense+Oligonucleotides+in+Zebrafish+Embryos.">Microinjection of mRNA and Morpholino Antisense Oligonucleotides in Zebrafish Embryos.</a> J. Vis. Exp. (27), e1113-e1113 (2009).</li><li>Mathias, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resolution+of+inflammation+by+retrograde+chemotaxis+of+neutrophils+in+transgenic+zebrafish.">Resolution of inflammation by retrograde chemotaxis of neutrophils in transgenic zebrafish.</a> J. Leukoc. Biol. 80, 1281-1288 (2006).</li><li>Hall, C., Flores, M. V., Storm, T., Crosier, K., Crosier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+lysozyme+C+promoter+drives+myeloid-specific+expression+in+transgenic+fish.">The zebrafish lysozyme C promoter drives myeloid-specific expression in transgenic fish.</a> BMC Dev. Biol. 7, 42-42 (2007).</li><li>Gray, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+intravital+imaging+of+macrophage+and+neutrophil+behaviour+during+inflammation+using+a+novel+transgenic+zebrafish.">Simultaneous intravital imaging of macrophage and neutrophil behaviour during inflammation using a novel transgenic zebrafish.</a> Thromb. Haemost. 105, 811-819 (2011).</li></ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

وكثيرا ما تستخدم أساليب العدوى المذكورة في هذه المقالة لدراسة وظيفة الجينات المضيف المناعة الفطرية أو الجينات الفوعة الجرثومية 1. وتستخدم عن طريق الحقن الدقيقة حقن أساليب (بروتوكولات 5 و 6.1) في أغلب الأحيان لمثل هذه الدراسات. على المنوال الذيلية في جزيرة دم الخلفي هو الموقع الأكثر ملاءمة للحقن في الوريد من 1 يوما الأجنة. كما الوريد الذيلية يصبح أكثر صعوبة في اختراق في مراحل لاحقة، ونحن نفضل القناة كوفييه وموقع الحقن في الوريد للأجنة في 2-3 DPF. في جميع الحالات فإن من الأهمية بمكان لحقن الأجنة مع أرقام متناسقة من البكتيريا، التي يجب أن يتم التحقق من قبل قائح حقن تصفيح لفرز وت. ويجب النظر في الجوانب التالية لتحقيق حقن استنساخه. أولا، من الضروري أن يكون عالي الجودة من الزجاج حقن الإبر microcapillary. إذا كان رأس إبرة كبيرة جدا، فإن حقن خلق ثقب ثقب كبيرة بما يكفي لحدوث نزيف وفإن البكتيريا حقن تتدفق من الدورة الدموية. ثانيا، لا بد من حقن البكتيريا مباشرة في الدورة الدموية. إذا كان رأس إبرة ليس داخل الوريد أو في حال انتشار السوائل الحقن في تمديد الكيس المحي، لا بد من التخلص من الجنين من هذه التجربة. ثالثا، وذلك باستخدام PVP40 باعتبارها الناقل لحقن م. وسوف marinum مساعدة في منع البكتيريا من الغرق في إبرة الزجاج. PVP40 يحسن تجانس التعليق، مما أدى إلى قائح أكثر استنساخه طوال مدة الحقن. ويمكن أيضا أن تستخدم لPVP40 س. حقن التيفية الفأرية، ولكن هنا هو أقل أهمية، لأن حجم أكبر ومضان مشرق من البكتيريا يسمح للمراقبة البصرية على حقن اللقاح خلال التجارب. لممارسة حقنا من المستحسن استخدام صبغ أحمر الفينول (1٪ V / V) أو 1 ميكرومتر فلوري المجالات المتاحة في مختلف الألوان (إينفيتروجن). بمجرد يتقن هذه التقنية، فإنه يأخذ ما يقرب من 30 minutوفاق لحقن 50-100 الأجنة، بما في ذلك الوقت اللازم لمواءمة الأجنة على لوحات الاغاروز وضبط حجم حقن البكتيريا. في حين هي الأكثر شيوعا الحقن في الوريد في جزيرة الدم (بروتوكول 5) أو في قناة كوفييه (بروتوكول 6.1)، أثبتت طرق بديلة للعدوى الموضحة في هذه المقالة الفيديو مفيدة لدراسة البلاعم والعدلات الكيميائي (بروتوكولات 6.2، 6.3 ، و 6.4)، لدراسة نمو سلالات بكتيرية الموهن (بروتوكول 6.5)، وتكييف نموذج للعدوى الزرد عالية الإنتاجية التطبيقات (بروتوكول 6.6) 4-8. ويمكن أيضا وصف الدقيقة حقن أساليب تطبيقها لحقن من الفيروسات 18 و 19 و الجراثيم الفطرية 14، 20 أو طفيليات الأوالي (ماريا Forlenza، اتصال شخصي). إضافة مفيدة لإجراءات الحقن الموصوفة في هذه المقالة الفيديو هو إجراء وصف مؤخرا للحقن تحت الجلد من البكتيريا في zebrالأجنة عفيش 21. تم تطبيق هذا الإجراء لدراسة البلعمة من قبل العدلات من البكتيريا، التي عثر على بكتيريا تبتلع بكفاءة على أسطح الأنسجة ولكن، على النقيض من الضامة، وكانت عمليا غير قادر على يبلعم البكتيريا على الحقن في الدم أو في تجاويف الجسم مملوءة بسائل. للأجنة حقن تحت الجلد يتم وضع مماثل بالنسبة للحقن عضلة ذيل الموضحة في هذه المقالة الفيديو، ولكن تم إدخال إبرة تحت الجلد لحقن البكتيريا أكثر من الجسيدة. من المهم أن نعتبر أن حقن الجزئي هو في جوهره طريقا الاصطناعي للعدوى. ومع ذلك، الأجنة في وقت مبكر من مقاومة عالية للتعرض الخارجي لمسببات الأمراض البكتيرية. في الواقع، المقايسات الغمر، حيث استحم الأجنة في تعليق البكتيرية، لا يمكن استنساخه في أيدينا 22. في حين أن بعض الأجنة يمكن أن يصاب على الغمر، وقد لاحظنا تفاوت كبير في معدلات وفيات و في التعبير عنايون من الجينات علامة التهابات بين الأجنة فرد في هذه المقايسات. طرق حقن الصغيرة الموضحة في هذه المقالة تحقيق التهابات متكررة ومفيدة بشكل خاص لدراسة التفاعلات البكتيرية مع الخلايا المضيفة المناعة الفطرية. وهو نهج فعال لتحديد العدوى البكتيرية في الأجنة الفردية هو تحليل الصور فلوري من الأجنة المصابة مع حسب الطلب، مخصصة بكسل البرامج الكمي 17 و 23. وقد تبين أن هذا النهج أنها تتطابق جيدا مع نتائج عمليات العد وت بعد طلي من الأجنة المصابة. وبالمثل، تم كميا التغيرات النسبية في أعداد الكريات البيض في الجنين بواسطة تحليل الصور الرقمية المعدلة وراثيا في خطوط الكريات البيض مراسل fluorophore، وهذا النهج من شأنه أن تكون قابلة للتطبيق لقياس استجابة المضيف leukopoietic إلى إصابة 24. يمكن أن يتم التحقيق في وظيفة الجينات المضيف المناعة الفطرية بكفاءة في الجسم الحي من خلال الجمع بين نماذج عدوى صفهامع morpholino ضربة قاضية. [أليغنوكليوتيد] Morpholinos هي العقاقير الاصطناعية التي تستهدف RNAs ومحددة والحد من التعبير عن منتجات الجين عند حقنه في 1-خلية الأجنة الزرد مرحلة كما هو مبين في المادتين الفيديو وغيرها في هذه المجلة 10، 25. في دراسات ضربة قاضية morpholino، فإنه من الأهمية بمكان أن يتم عرض هذه الحفلات لجميع الفئات الجنين يمكن مقارنتها بشكل صحيح قبل حقن البكتيريا. هذا مهم بشكل خاص لأن الأجنة النامية لديها نظام المناعة الذي يصبح المختصة على نحو متزايد مع مرور الوقت. هناك العديد من خطوط مراسل المعدلة وراثيا المتوفرة حاليا للتمييز بين مجموعات فرعية رئيسية المناعة الفطرية، الضامة والعدلات، في الأجنة الزرد. استخدمت MPX والمروجين lyz لتوليد خطوط مراسل العدلة 16، 26، 27، واستخدمت csf1r (FMS) والمروجين MPEG1 لانتاج صحفيين بلعم 14، 28. في حين CSFوأعرب بالإضافة إلى ذلك 1R (FMS) في xanthophores، MPEG1 التعبير هي حصرا في الضامة. كما هو موضح في هذا المقال الفيديو، وضعت مؤخرا خطوط مراسل MPEG1 مفيدة للغاية لالبلعمة التصوير البكتيرية بواسطة الضامة.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> الكاشف </td><td> المزود </td><td> فهرس العدد </td></tr><tr><td> الفينول الأحمر </td><td> سيغما </td><td> P0290 </td></tr><tr><td> الغليسيرول </td><td> سيغما الدريخ </td><td> 228210 </td></tr><tr><td> Difco أجار Middlebrook 7H10 </td><td> بيكتون، ديكنسون، وشركة </td><td> 262710 </td></tr><tr><td> BBL التخصيب Middlebrook OADC </td><td> بيكتون، ديكنسون، وشركة </td><td> 211886 </td></tr><tr><td> Difco Middlebrook 7H9 حساء </td><td> بيكتون، ديكنسون، وشركة </td><td> 271310 </td></tr><tr><td> BBL التخصيب Middlebrook ADC </td><td> بيكتون، ديكنسون، وشركة </td><td> 211887 </td></tr><tr><td> توين 80 </td><td> سيغما الدريخ </td><td> P1754 </td></tr><tr><td> بوفيدون (PVP40) </td><td> Calbiochem، ميرك KGaA </td><td> 529504 </td></tr><tr><td> N &lt;/ EM-&gt; الفنيل (PTU) </td><td> سيغما الدريخ </td><td> P7629 </td></tr><tr><td> إيثيل 3-أمينوبنزوات methanesulfonate الملح (Tricaine) </td><td> سيغما الدريخ </td><td> A5040 </td></tr><tr><td> الميثيل السليلوز </td><td> سيغما الدريخ </td><td> M0387 </td></tr><tr><td> SeaPlaque الاغاروز (الأقل ذوبان نقطة الاغاروز) </td><td> Lonza المؤتمر الوطني العراقي. </td><td> 50100 </td></tr><tr><td> FluoSpheres (1.0 ميكرون، أحمر فلوري (580/605)) </td><td> إينفيتروجن </td><td> F8821 </td></tr><tr><td> FluoSpheres (1.0 ميكرون، أصفر، أخضر فلوري (505/515)) </td><td> إينفيتروجن </td><td> F8823 </td></tr></tbody></table>

infection of zebrafish embryos with intracellular bacterial pathogens

ويتزايد استخدام الزرد (دانيو rerio) الأجنة كنموذج لدراسة وظيفة نظام المناعة الفطرية في الفقاريات المضيف الممرض التفاعلات 1. من أنواع الخلايا الرئيسية للنظام المناعة الفطرية، الضامة والعدلات، ووضع خلال الأيام الأولى من التطور الجنيني قبل نضوج الخلايا اللمفية التي مطلوبة من أجل الاستجابات التكيفية المناعي. سهولة الحصول على أعداد كبيرة من الأجنة، وسهولة الحصول عليها بسبب التنمية الخارجية، والشفافية البصرية من المراحل الجنينية واليرقات، مجموعة واسعة من الأدوات الجينية، والموارد متحولة واسعة ومجموعة من خطوط مراسل المعدلة وراثيا، إضافة إلى براعة كل من الزرد نموذج. يمكن السالمونيلا الملهبة للضرب مصلي التيفية الفأرية (س. التيفية الفأرية) وmarinum المتفطرة intracellularly يقيمون في الضامة وكثيرا ما تستخدم لدراسة المضيف الممرض التفاعلات في الأجنة الزرد. عمليات العدوى من هذينمسببات الأمراض البكتيرية مقارنة مثيرة للاهتمام لأنه س. عدوى التيفية الفأرية حادة وقاتلة في غضون يوم واحد، في حين م. marinum عدوى مزمنة، ويمكن تصوير ما يصل الى مرحلة اليرقات 2، 3. موقع الدقيقة حقن البكتيريا في جنين (الشكل 1) يحدد ما إذا كانت العدوى سوف تصبح بسرعة النظامية أو سيبقى في البداية مترجمة. يمكن تأسيس عدوى السريع الأجهزة عن طريق حقن البكتيريا الدقيقة مباشرة في الدورة الدموية عن طريق الوريد الذيلية في جزيرة دم الخلفي أو عن طريق القناة كوفييه، قناة تداول واسع على الكيس المحي الذي يربط بين القلب إلى الأوعية الدموية في الجذع. في 1 DPF، عندما الأجنة في هذه المرحلة لديها الضامة نشط phagocytically لكن العدلات لم تنضج بعد، عن طريق الحقن في الدم ويفضل جزيرة. لحقن في DPF 2-3، عندما الأجنة أيضا قد وضعت وظيفية (الميلوبيروكسيديز المنتجة) العدلات، ويفضل القناة كوفييه كما تيانه موقع الحقن. لدراسة الهجرة الموجهة للخلايا الدم النخاعي نحو العدوى المحلية، ويمكن حقن البكتيريا في عضلة الذيل، وحويصلة أذني، أو الدماغ المؤخر البطين 4-6. وبالإضافة إلى ذلك، والحبل الظهري، وهو الهيكل الذي يبدو أنه لا يمكن الوصول إليها عادة لخلايا الدم النخاعي، هي عرضة للعدوى المحلية 7. وثمة بديل مفيد للالإنتاجية العالية لتقديم الطلبات هو حقن البكتيريا في صفار البيض من الأجنة في غضون الساعات الأولى بعد الإخصاب 8. الجمع بين البكتيريا الفلورسنت وخطوط الزرد المعدلة وراثيا مع الضامة فلوري أو العدلات يخلق الظروف المثالية لمتعددة الألوان التصوير من المضيف الممرض التفاعلات. هذه المادة سوف فيديو وصف بروتوكولات تفصيلية للعدوى عن طريق الوريد والمحلية من الأجنة الزرد مع س. التيفية الفأرية أو م. بكتيريا marinum و. التصوير مضان اللاحقة للتفاعل مع خلايا الجهاز المناعي الفطرية

Watch this Scientific Journal Video about Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens at JoVE.com

Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens

وقد ثبت أن الأجنة الزرد شفاف المضيفين نموذجا مفيدا لتصور ودراسة التفاعلات وظيفيا بين الخلايا المناعية الفطرية ومسببات الأمراض البكتيرية داخل الخلايا، مثل<em&gt; السالمونيلا التيفية الفأرية</em&gt; و<em&gt; المتفطرة البحرية</em&gt;. الدقيقة حقن البكتيريا ومتعددة الألوان التصوير مضان من التقنيات الأساسية التي ينطوي عليها تطبيق نماذج من الزرد عدوى الجنين.

إصابة الأجنة الزرد مع مسببات الأمراض البكتيرية بين الخلايا

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as a model for studying the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

'Bioluminescent' Reporter Phage for the Detection of Category A Bacterial Pathogens

&#39;Bioluminescent&#39; بالعاثية مراسل للكشف عن مسببات الأمراض البكتيرية الفئة أ

Yersinia pestis and Bacillus anthracis are Category A bacterial pathogens that are the causative agents of the plague and anthrax, respectively 1. ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

إدخال إجهاد القص في دراسة الالتصاق الجرثومي

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Single Cell Measurements of Vacuolar Rupture Caused by Intracellular Pathogens

القياسات خلية واحدة من تمزق رغوي الناجمة عن مسببات الأمراض بين الخلايا

Shigella flexneri are pathogenic bacteria that invade host cells entering into an endocytic vacuole. Subsequently, the rupture of this membrane-enclosed ...

Discovery of New Intracellular Pathogens by Amoebal Coculture and Amoebal Enrichment Approaches

اكتشاف جديد بين الخلايا مسببات الأمراض عن طريق Amoebal Coculture والمناهج Amoebal التخصيب

Intracellular pathogens such as legionella, mycobacteria and Chlamydia-like organisms are difficult to isolate because they often grow poorly or not at ...

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

جيل ومتعدد المظهري فحص عالية المحتوى من<em&gt; الكوكسيلا البورنيتية</em&gt; المسوخ ينقول

Invasion and colonization of host cells by bacterial pathogens depend on the activity of a large number of prokaryotic proteins, defined as virulence ...

Applying an Inducible Expression System to Study Interference of Bacterial Virulence Factors with Intracellular Signaling

تطبيق نظام التعبير محرض لدراسة التدخل من العوامل البكتيرية الفوعة مع اشارة بين الخلايا

The technique presented here allows one to analyze at which step a target protein, or alternatively a small molecule, interacts with the components of a ...

Deciphering and Imaging Pathogenesis and Cording of Mycobacterium abscessus in Zebrafish Embryos

Deciphering and Imaging Pathogenesis and Cording of Mycobacterium abscessus in Zebrafish Embryos

فك رموز والتصوير إمراض وحبال من<em&gt; المتفطرة خراج</em&gt; في الزرد الأجنة

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as an infection model to study the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen ...

Identification of Rare Bacterial Pathogens by 16S rRNA Gene Sequencing and MALDI-TOF MS

تحديد مسببات الأمراض البكتيرية النادرة التي 16S الريباسي جين تسلسل وMALDI-TOF MS

There are a number of rare and, therefore, insufficiently described bacterial pathogens which are reported to cause severe infections especially in ...

Isolation of Single Intracellular Bacterial Communities Generated from a Murine Model of Urinary Tract Infection for Downstream Single-cell Analysis

عزل واحد المجتمعات البكتيرية داخل الخلايا التي تم إنشاؤها من نموذج موريني لعدوى المسالك البولية لتحليل خلية واحدة أسفل المجرى

In this article, we outline a procedure used to isolate individual intracellular bacterial communities from a mouse that has been experimentally infected ...

Opsonophagocytic Killing Assay to Assess Immunological Responses Against Bacterial Pathogens

أوبسونوفاجوسيتيك قتل المقايسة لتقييم الاستجابات المناعية ضد مسببات الأمراض البكتيرية

A key aspect of the immune response to bacterial colonization of the host is phagocytosis. An opsonophagocytic killing assay (OPKA) is an experimental ...