Name: infection of zebrafish embryos with intracellular bacterial pathogens
Uploaded: 2012-03-15T12:00:00
Duration: 11 min 18 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens at JoVE.com

De auteurs willen graag Chao Cui bedanken, Floor de Kort, Esther Stoop en Ralph Carvalho voor afbeeldingen in figuur 4, Ulrike Nehrdich en Davy de Witt voor vissen zorg, en andere lab-leden voor nuttige discussies. Dit werk wordt ondersteund door het Smart Mix-programma van Nederland Ministerie van Economische Zaken en het Ministerie van Onderwijs, Cultuur en Wetenschap, de Europese Commissie 7e kader project ZF-GEZONDHEID (HEALTH-F4-2.010 tot 242.048), de Europese Marie-Curie netwerk voor initiële opleiding FishForPharma (PITN-GA-2011 tot 289.209), en door de Australische NHMRC (637.394). De Australische Instituut voor Regeneratieve Geneeskunde wordt ondersteund door subsidies van de staat regering van Victoria en de Australische regering.

<ol>
	<li>Meijer, A. H., Spaink, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host-pathogen+interactions+made+transparent+with+the+zebrafish+model.">Host-pathogen interactions made transparent with the zebrafish model.</a> Curr. Drug Targets. 12, 1000-1017 (2011).</li><li>Davis, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+visualization+of+mycobacterium-macrophage+interactions+leading+to+initiation+of+granuloma+formation+in+zebrafish+embryos.">Real-time visualization of mycobacterium-macrophage interactions leading to initiation of granuloma formation in zebrafish embryos.</a> Immunity. 17, 693-702 (2002).</li><li>vander Sar, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+embryos+as+a+model+host+for+the+real+time+analysis+of+Salmonella+typhimurium+infections.">Zebrafish embryos as a model host for the real time analysis of Salmonella typhimurium infections.</a> Cell Microbiol. 5, 601-611 (2003).</li><li>Zakrzewska, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage-specific+gene+functions+in+Spi1-directed+innate+immunity.">Macrophage-specific gene functions in Spi1-directed innate immunity.</a> Blood. 116, 1-11 (2010).</li><li>Le Guyader, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origins+and+unconventional+behavior+of+neutrophils+in+developing+zebrafish.">Origins and unconventional behavior of neutrophils in developing zebrafish.</a> Blood. 111, 132-141 (2008).</li><li>Herbomel, P., Thisse, B., Thisse, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+and+behaviour+of+early+macrophages+in+the+zebrafish+embryo.">Ontogeny and behaviour of early macrophages in the zebrafish embryo.</a> Development. 126, 3735-3745 (1999).</li><li>Alibaud, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Mycobacterium+marinum+TesA+mutant+defective+for+major+cell+wall-associated+lipids+is+highly+attenuated+in+Dictyostelium+discoideum+and+zebrafish+embryos.">A Mycobacterium marinum TesA mutant defective for major cell wall-associated lipids is highly attenuated in Dictyostelium discoideum and zebrafish embryos.</a> Mol. Microbiol. 80, 919-934 (2011).</li><li>Carvalho, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-throughput+screen+for+tuberculosis+progression.">A high-throughput screen for tuberculosis progression.</a> PLoS One. 6, 16779-16779 (2011).</li><li>van der Sar, A. M., Spaink, H. P., Zakrzewska, A., Bitter, W., Meijer, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specificity+of+the+zebrafish+host+transcriptome+response+to+acute+and+chronic+mycobacterial+infection+and+the+role+of+innate+and+adaptive+immune+components.">Specificity of the zebrafish host transcriptome response to acute and chronic mycobacterial infection and the role of innate and adaptive immune components.</a> Mol. Immunol. 46, 2317-2332 (2009).</li><li>Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+Zebrafish+Embryos+to+Analyze+Gene+Function.">Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function.</a> J. Vis. Exp. (25), e1115-e1115 (2009).</li><li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Zebrafish+Book.">The Zebrafish Book.</a> A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Brachydanio rerio). , (1993).</li><li>Gutzman, J. H., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+Brain+Ventricle+Injection.">Zebrafish Brain Ventricle Injection.</a> J. Vis. Exp. (26), e1218-e1218 (2009).</li><li>Ellett, F., Pase, L., Hayman, J. W., Andrianopoulos, A., Lieschke, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mpeg1+promoter+transgenes+direct+macrophage-lineage+expression+in+zebrafish.">mpeg1 promoter transgenes direct macrophage-lineage expression in zebrafish.</a> Blood. 117, 49-56 (2011).</li><li>Stockhammer, O. W., Zakrzewska, A., Hegedus, Z., Spaink, H. P., Meijer, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+profiling+and+functional+analyses+of+the+zebrafish+embryonic+innate+immune+response+to+Salmonella+infection.">Transcriptome profiling and functional analyses of the zebrafish embryonic innate immune response to Salmonella infection.</a> J. Immunol. 182, 5641-5653 (2009).</li><li>Renshaw, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transgenic+zebrafish+model+of+neutrophilic+inflammation.">A transgenic zebrafish model of neutrophilic inflammation.</a> Blood. 108, 3976-3978 (2006).</li><li>Stoop, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+embryo+screen+for+mycobacterial+genes+involved+in+the+initiation+of+granuloma+formation+reveals+a+newly+identified+ESX-1+component.">Zebrafish embryo screen for mycobacterial genes involved in the initiation of granuloma formation reveals a newly identified ESX-1 component.</a> Dis. Model Mech. 4, 526-536 (2011).</li><li>Levraud, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+zebrafish+IFN+receptor:+implications+for+the+origin+of+the+vertebrate+IFN+system.">Identification of the zebrafish IFN receptor: implications for the origin of the vertebrate IFN system.</a> Journal of Immunology. 178, 4385-4394 (2007).</li><li>Levraud, J. P., Colucci-Guyon, E., Redd, M. J., Lutfalla, G., Herbomel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+analysis+of+zebrafish+innate+immunity.">In vivo analysis of zebrafish innate immunity.</a> Methods Mol. Biol. 415, 337-363 (2008).</li><li>Brothers, K. M., Newman, Z. R., Wheeler, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+disseminated+candidiasis+in+zebrafish+reveals+role+of+phagocyte+oxidase+in+limiting+filamentous+growth.">Live imaging of disseminated candidiasis in zebrafish reveals role of phagocyte oxidase in limiting filamentous growth.</a> Eukaryot. Cell. 10, 932-944 (2011).</li><li>Colucci-Guyon, E., Tinevez, J. Y., Renshaw, S. A., Herbomel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+of+professional+phagocytes+in+vivo:+unlike+macrophages,+neutrophils+engulf+only+surface-associated+microbes.">Strategies of professional phagocytes in vivo: unlike macrophages, neutrophils engulf only surface-associated microbes.</a> J. Cell Sci. 124, 3053-3059 (2011).</li><li>van Soest, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+static+immersion+and+intravenous+injection+systems+for+exposure+of+zebrafish+embryos+to+the+natural+pathogen+Edwardsiella+tarda.">Comparison of static immersion and intravenous injection systems for exposure of zebrafish embryos to the natural pathogen Edwardsiella tarda.</a> BMC Immunology. 12, 58-58 (2011).</li><li>Adams, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+tolerance+in+replicating+mycobacteria+mediated+by+a+macrophage-induced+efflux+mechanism.">Drug tolerance in replicating mycobacteria mediated by a macrophage-induced efflux mechanism.</a> Cell. 145, 39-53 (2011).</li><li>Ellett, F. L., Lieschke, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computational+quantification+of+fluorescent+leukocyte+numbers+in+zebrafish+embryos.">Computational quantification of fluorescent leukocyte numbers in zebrafish embryos.</a> Methods in Enzymology. , (2011).</li><li>Yuan, S., Sun, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+mRNA+and+Morpholino+Antisense+Oligonucleotides+in+Zebrafish+Embryos.">Microinjection of mRNA and Morpholino Antisense Oligonucleotides in Zebrafish Embryos.</a> J. Vis. Exp. (27), e1113-e1113 (2009).</li><li>Mathias, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resolution+of+inflammation+by+retrograde+chemotaxis+of+neutrophils+in+transgenic+zebrafish.">Resolution of inflammation by retrograde chemotaxis of neutrophils in transgenic zebrafish.</a> J. Leukoc. Biol. 80, 1281-1288 (2006).</li><li>Hall, C., Flores, M. V., Storm, T., Crosier, K., Crosier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+lysozyme+C+promoter+drives+myeloid-specific+expression+in+transgenic+fish.">The zebrafish lysozyme C promoter drives myeloid-specific expression in transgenic fish.</a> BMC Dev. Biol. 7, 42-42 (2007).</li><li>Gray, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+intravital+imaging+of+macrophage+and+neutrophil+behaviour+during+inflammation+using+a+novel+transgenic+zebrafish.">Simultaneous intravital imaging of macrophage and neutrophil behaviour during inflammation using a novel transgenic zebrafish.</a> Thromb. Haemost. 105, 811-819 (2011).</li></ol>

De auteurs hebben niets te onthullen.

De infectie methoden beschreven in dit artikel worden vaak gebruikt om de functie van gastheer aangeboren immuniteit genen of bacteriële virulentie genen een te bestuderen. De intraveneuze micro-injectie methoden (protocollen 5 en 6.1) worden het meest gebruikt voor dergelijke studies. De caudale ader op het achterste bloed eiland is de meest geschikte locatie voor intraveneuze injectie van 1-dagen oude embryo&#39;s. Omdat de caudale ader wordt het moeilijker om door te dringen in een later stadium, geven wij de voorkeur het kanaal van Cuvier als intraveneuze injectie site voor embryo&#39;s op 2-3 dpf. In alle gevallen is het van cruciaal belang voor de embryo&#39;s te injecteren met een constante aantallen bacteriën, die moeten door platen injectie inocula worden gecontroleerd op kve tellen. De volgende aspecten moet worden beschouwd als reproduceerbare injecties te bereiken. Ten eerste is het essentieel om een ​​hoge kwaliteit glas microcapillaire injectienaalden. Als de naald te groot is, zal de injectie een lekke band gat groot genoeg te maken voor bloeden voor te komen ende geïnjecteerde bacteriën stromen van de bloedsomloop. Ten tweede moet bacteriën rechtstreeks geïnjecteerd worden in de bloedsomloop. Als de naald zich niet in de ader of als injectievloeistof spreads in de dooierzak uitbreiding moet het embryo weggegooid worden van het experiment. Ten derde, met behulp van PVP40 als een drager voor het injecteren van M. marinum zal helpen bij het ​​voorkomen van de bacteriën uit zinken in het glas naald. PVP40 verbetert de homogeniteit van de schorsing, wat resulteert in beter reproduceerbaar inocula tijdens de gehele duur van de injecties. PVP40 kunnen ook worden gebruikt voor S. typhimurium injecties, maar hier is minder belangrijk omdat de grotere en lichte fluorescentie van de bacteriën kan een visuele controle op de injectieplaats inoculum bij experimenten. Voor het oefenen van de injecties adviseren wij het gebruik van fenol rode kleurstof (1% v / v) of 1 micrometer fluorescerende bollen in verschillende kleuren verkrijgbaar (Invitrogen). Zodra de techniek onder de knie, duurt het ongeveer 30 minutes tot 50-100 embryo injecteren, zoals de tijd nodig voor het uitlijnen van de embryo&#39;s agarose platen en aanpassing van de bacteriële injectievolume. Terwijl de intraveneuze injecties in het bloed eiland (protocol 5) of in het kanaal van Cuvier (protocol 6.1) worden het meest gebruikt, zijn de alternatieve routes van de infectie wordt beschreven in deze video artikel nuttig gebleken om macrofagen en neutrofielen chemotaxis te bestuderen (protocollen 6.2, 6.3 en 6.4), de groei van verzwakte bacteriestammen (protocol 6.5) te bestuderen en het zebravis infectiemodel voor high-throughput toepassingen (protocol 6.6) 4-8 passen. De beschreven micro-injectie werkwijzen kunnen ook worden toegepast voor injecties virussen 18, 19, schimmelsporen 14, 20 of ziekteverwekkers (Maria Forlenza, persoonlijke communicatie). Een nuttige aanvulling op de injectie procedures beschreven in deze video artikel is een recent beschreven procedure voor subcutane injectie van bacteriën in zebrafish embryo 21. Deze procedure werd toegepast fagocytose door neutrofielen bacteriën, die efficiënt overspoelen bacteriën op weefseloppervlakken maar bestuderen, in tegenstelling tot macrofagen, vrijwel geen bacteriën fagocyteren bij injectie in het bloed of in fluïdum gevulde lichaamsholtes. Voor subcutane injecties embryo&#39;s worden geplaatst vergelijkbaar als bij de staart spier injecties beschreven in deze video artikel, maar de naald wordt ingebracht net onder de huid om de bacteriën te injecteren via een somiet. Het is belangrijk om te oordelen dat micro-injectie in wezen een kunstmatige route van infectie. Echter, vroege embryo zijn bestand tegen externe blootstelling aan bacteriële pathogenen. In feite, onderdompeling assays, waarbij embryo&#39;s ondergedompeld in een bacteriesuspensie, zijn niet reproduceerbaar in onze handen 22. Terwijl sommige embryo&#39;s kunnen besmet raken na onderdompeling, hebben wij een grote variatie in sterftecijfers en in de explicieteion van inflammatoire markers tussen individuele embryo dergelijke tests. De micro-injectie methoden die in dit artikel te bereiken reproduceerbaar infecties en zijn bijzonder nuttig om bacteriële interacties met gastheer aangeboren immuunsysteem cellen te bestuderen. Een efficiënte aanpak van de bacteriële infectie te kwantificeren in individuele embryo&#39;s is om de fluorescerende beelden van geïnfecteerde embryo&#39;s te analyseren met op maat gemaakte, toegewijde pixel kwantificering software 17, 23. Deze benadering is gebleken te correleren met de resultaten van cfu tellen na plating van geïnfecteerde embryo&#39;s. Zo hebben de relatieve veranderingen in leukocyten aantallen per embryo gekwantificeerd door digitale beeldanalyse in transgene leukocyten fluorofoor verslaggever lijnen; deze aanpak van toepassing zou zijn voor het kwantificeren van de gastheer leukopoietic reactie op infectie 24. De functie van ontvangst aangeboren immuunsysteem genen efficiënt in vivo onderzocht door het combineren van de beschreven infectie modellenmet morfolino knockdown. Morpholinos zijn synthetische antisense oligonucleotiden die specifiek RNA gericht en verminderen de expressie van de genproducten bij injectie in 1-cel stadium zebravisembryo&#39;s zoals in andere video artikelen in dit tijdschrift 10, 25. In morfolino knockdown studies is het van groot belang dat alle embryo te vergelijken groepen kunnen worden opgevoerd voor bacteriële injecties. Dit is vooral belangrijk omdat embryo&#39;s beschikken over een ontwikkeling van het immuunsysteem die steeds bevoegd in de tijd. Er zijn verschillende transgene reporter lijnen die momenteel beschikbaar zijn op de grote aangeboren immuunsysteem subsets, macrofagen en neutrofielen, in de zebravis embryo&#39;s te onderscheiden. De MPX en Lyz promotors zijn gebruikt om neutrofielen reporter lijnen 16, 26, 27 genereren en csf1r (FMS) en mpeg1 promoters zijn voor het produceren van macrofagen reporters 14, 28. Terwijl CSF1R (FMS) is bovendien uitgedrukt in xanthophores, mpeg1 expressie is uitsluitend in macrofagen. Zoals blijkt uit deze video artikel, de recent ontwikkelde mpeg1 reporter lijnen zijn zeer nuttig voor de beeldvorming bacteriële fagocytose door macrofagen.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagens </td><td> Leverancier </td><td> Catalogusnummer </td></tr><tr><td> Fenol Rood </td><td> Sigma </td><td> P0290 </td></tr><tr><td> Glycerol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 228210 </td></tr><tr><td> Difco Middlebrook 7H10 agar </td><td> Becton, Dickenson and Company </td><td> 262710 </td></tr><tr><td> BBL Middlebrook OADC Verrijking </td><td> Becton, Dickenson and Company </td><td> 211886 </td></tr><tr><td> Difco Middlebrook 7H9 Bouillon </td><td> Becton, Dickenson and Company </td><td> 271310 </td></tr><tr><td> BBL Middlebrook ADC Verrijking </td><td> Becton, Dickenson and Company </td><td> 211887 </td></tr><tr><td> Tween 80 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P1754 </td></tr><tr><td> Polyvinylpyrrolidon (PVP40) </td><td> Calbiochem, Merck KGaA </td><td> 529504 </td></tr><tr><td> N &lt;/ Em&gt;-Phenylthiourea (PTU) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P7629 </td></tr><tr><td> Ethyl-3-aminobenzoaat methaansulfonaat zout (tricaïne) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5040 </td></tr><tr><td> Methylcellulose </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> M0387 </td></tr><tr><td> SeaPlaque Agarose (lage smeltpunt agarose) </td><td> Lonza Inc </td><td> 50100 </td></tr><tr><td> FluoSpheres (1,0 urn, fluorescerende (580/605)) </td><td> Invitrogen </td><td> F8821 </td></tr><tr><td> FluoSpheres (1,0 micrometer, geel-groen tl-licht (505/515)) </td><td> Invitrogen </td><td> F8823 </td></tr></tbody></table>

infection of zebrafish embryos with intracellular bacterial pathogens

Zebravis (Danio rerio) embryo&#39;s worden steeds meer gebruikt als model voor het bestuderen van de functie van de gewervelde aangeboren immuunsysteem in gastheer-pathogeen interacties 1. De belangrijkste celtypes van het aangeboren immuunsysteem, macrofagen en neutrofielen, ontwikkelen tijdens de eerste dagen van de embryogenese voor de rijping van de lymfocyten die nodig zijn voor adaptieve immuunresponsen. Het gemak van het verkrijgen van een groot aantal embryo&#39;s, de toegankelijkheid als gevolg van externe ontwikkeling, de optische transparantie van de embryonale en larvale stadia, een breed scala aan genetische tools, uitgebreide mutant middelen en de collecties van transgene reporter lijnen, dragen allemaal bij aan de veelzijdigheid van de zebravis model. Salmonella enterica serovar Typhimurium (S. typhimurium) en Mycobacterium marinum kan intracellulair wonen in macrofagen en worden vaak gebruikt om gastheer-pathogeen interacties in de zebravis embryo&#39;s te bestuderen. De infectie processen beidebacteriële ziekteverwekkers zijn interessant om te vergelijken, omdat S. typhimurium-infectie is acuut en dodelijk binnen een dag, terwijl M. marinum infectie chronische en kan worden afgebeeld tot larvale stadium 2, 3. De site van micro-injectie van bacteriën in het embryo (figuur 1) bepaalt of de infectie snel zal systemische worden of zal in eerste instantie blijven gelokaliseerd. Een snelle systemische infectie kan worden vastgesteld door micro-injectie van bacteriën direct in de bloedsomloop via de caudale ader op het achterste bloed eiland of via het kanaal van Cuvier, een ruime verspreiding kanaal op de dooierzak het aansluiten van het hart naar de stam vaatstelsel. Op 1 DPF, wordt bij het embryo in dit stadium phagocytically actieve macrofagen hebben, maar neutrofielen zijn nog niet gerijpt, injecteren in het bloed eiland de voorkeur. Voor injecties op 2-3 DPF, wanneer embryo&#39;s hebben ook functionele (myeloperoxidase-producerende) neutrofielen, ontwikkelde de Duct van Cuvier heeft de voorkeur als thij de plaats van injectie. Om gerichte migratie van myeloïde cellen naar lokale infecties te bestuderen, kunnen bacteriën worden geïnjecteerd in de staart spier, otic blaasje, of achterhersenen ventrikel 4-6. Bovendien de notochorda, een structuur die lijkt zijn deuren myeloïde cellen erg gevoelig voor plaatselijke infectie 7. Een interessant alternatief voor high-throughput toepassingen is de injectie van bacteriën in de dooier van embryo in de eerste uren na de bevruchting 8. De combinatie van fluorescerende bacteriën en transgene zebravis lijnen met fluorescerende macrofagen of neutrofielen schept ideale omstandigheden voor een multi-color beeldvorming van gastheer-pathogeen interacties. Deze video artikel beschrijft gedetailleerde protocollen voor de intraveneuze en lokale infectie van de zebravis embryo&#39;s met S. typhimurium of M. marinum bacteriën en voor de daaropvolgende fluorescentie beeldvorming van de interactie met cellen van het aangeboren immuunsysteem.

Watch this Scientific Journal Video about Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens at JoVE.com

Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens

Transparante zebravis embryo&#39;s hebben hun nut bewezen model hosts te visualiseren en functioneel onderzoek naar interacties tussen aangeboren immuunsysteem cellen en intracellulaire bacteriële pathogenen, zoals<em&gt; Salmonella typhimurium</em&gt; En<em&gt; Mycobacterium marinum</em&gt;. Micro-injectie van bacteriën en multi-color fluorescentie beeldvorming zijn essentiële technieken die betrokken zijn bij de toepassing van de zebravis embryo infectie modellen.

Infectie van zebravis embryo&#39;s met intracellulaire bacteriële pathogenen

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as a model for studying the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

'Bioluminescent' Reporter Phage for the Detection of Category A Bacterial Pathogens

&#39;Bioluminescent&#39; Reporter Faag voor de detectie van categorie A bacteriële pathogenen

Yersinia pestis and Bacillus anthracis are Category A bacterial pathogens that are the causative agents of the plague and anthrax, respectively 1. ...

Single Cell Measurements of Vacuolar Rupture Caused by Intracellular Pathogens

Single Cell Metingen van vacuole Rupture Veroorzaakt door intracellulaire pathogenen

Shigella flexneri are pathogenic bacteria that invade host cells entering into an endocytic vacuole. Subsequently, the rupture of this membrane-enclosed ...

Discovery of New Intracellular Pathogens by Amoebal Coculture and Amoebal Enrichment Approaches

Ontdekking van nieuwe intracellulaire pathogenen door Amoebal Coculture en Amoebal Verrijking benaderingen

Intracellular pathogens such as legionella, mycobacteria and Chlamydia-like organisms are difficult to isolate because they often grow poorly or not at ...

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

Generatie en Multi-fenotypische High-inhoud Screening van<em&gt; Coxiella burnetii</em&gt; Transposon Mutants

Invasion and colonization of host cells by bacterial pathogens depend on the activity of a large number of prokaryotic proteins, defined as virulence ...

Applying an Inducible Expression System to Study Interference of Bacterial Virulence Factors with Intracellular Signaling

Het toepassen van een induceerbare Expression Systeem om interferentie van bacteriële virulentiefactoren met intracellulaire signalering Studie

The technique presented here allows one to analyze at which step a target protein, or alternatively a small molecule, interacts with the components of a ...

Identification of Rare Bacterial Pathogens by 16S rRNA Gene Sequencing and MALDI-TOF MS

Identificatie van bijzondere bacteriële pathogenen door 16S rRNA Gene Sequencing en MALDI-TOF MS

There are a number of rare and, therefore, insufficiently described bacterial pathogens which are reported to cause severe infections especially in ...

Isolation of Single Intracellular Bacterial Communities Generated from a Murine Model of Urinary Tract Infection for Downstream Single-cell Analysis

Isolatie van één intracellulaire bacteriële gemeenschappen gegenereerd op basis van een lymfkliertest Model van urine landstreekbesmetting Downstream eencellige p.a.

In this article, we outline a procedure used to isolate individual intracellular bacterial communities from a mouse that has been experimentally infected ...

Opsonophagocytic Killing Assay to Assess Immunological Responses Against Bacterial Pathogens

Opsonophagocytic doden Assay te beoordelen van de immunologische reacties tegen bacteriële pathogenen

A key aspect of the immune response to bacterial colonization of the host is phagocytosis. An opsonophagocytic killing assay (OPKA) is an experimental ...

Visualization of Macrophage Lytic Cell Death During Mycobacterial Infection in Zebrafish Embryos via Intravital Microscopy

Visualisatie van macrofaag lytische celdood tijdens mycobacteriële infectie in zebravis-embryo's via Intravital microscopie

Zebrafish is an excellent model organism for studying innate immune cell behavior due to its transparent nature and reliance solely on its innate immune ...

Determination of Chemical Inhibitor Efficiency against Intracellular Toxoplasma Gondii Growth Using a Luciferase-Based Growth Assay

Determination of Chemical Inhibitor Efficiency against Intracellular Toxoplasma Gondii Growth Using a Luciferase-Based Growth Assay

Bepaling van de chemische remmer efficiëntie tegen intracellulaire Toxoplasma Gondii Groei met behulp van een Luciferase-Based Growth Assay

Toxoplasma gondii is a protozoan pathogen that widely affects the human population. The current antibiotics used for treating clinical toxoplasmosis are ...