Name: infection of zebrafish embryos with intracellular bacterial pathogens
Uploaded: 2012-03-15T12:00:00
Duration: 11 min 18 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens at JoVE.com

המחברים מבקשים להודות קואי צ&#39;או, קומה דה קורט, מרפסת אסתר ראלף קרבאליו לתמונות בתרשים 4 אולריקה Nehrdich ודייוי דה ויט לטיפול דגים, ובני מעבדה אחרות דיונים מועילים. עבודה זו נתמכת על ידי תוכנית תמהיל חכם של משרד הולנד לעניינים כלכליים ומשרד החינוך, התרבות והמדע, הנציבות האירופית 7 הפרויקט במסגרת ZF-בריאות (בריאות F4-2010-242048), מארי קירי האירופי הדרכה ראשונית רשת FishForPharma (PITN-GA-2011-289209), ועל ידי NHMRC אוסטרלי (637,394). אוסטרליה הרגנרציה לרפואה המכון נתמך על ידי תרומות של ממשלת מדינת ויקטוריה ממשלת אוסטרליה.

<ol>
	<li>Meijer, A. H., Spaink, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host-pathogen+interactions+made+transparent+with+the+zebrafish+model.">Host-pathogen interactions made transparent with the zebrafish model.</a> Curr. Drug Targets. 12, 1000-1017 (2011).</li><li>Davis, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+visualization+of+mycobacterium-macrophage+interactions+leading+to+initiation+of+granuloma+formation+in+zebrafish+embryos.">Real-time visualization of mycobacterium-macrophage interactions leading to initiation of granuloma formation in zebrafish embryos.</a> Immunity. 17, 693-702 (2002).</li><li>vander Sar, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+embryos+as+a+model+host+for+the+real+time+analysis+of+Salmonella+typhimurium+infections.">Zebrafish embryos as a model host for the real time analysis of Salmonella typhimurium infections.</a> Cell Microbiol. 5, 601-611 (2003).</li><li>Zakrzewska, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage-specific+gene+functions+in+Spi1-directed+innate+immunity.">Macrophage-specific gene functions in Spi1-directed innate immunity.</a> Blood. 116, 1-11 (2010).</li><li>Le Guyader, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origins+and+unconventional+behavior+of+neutrophils+in+developing+zebrafish.">Origins and unconventional behavior of neutrophils in developing zebrafish.</a> Blood. 111, 132-141 (2008).</li><li>Herbomel, P., Thisse, B., Thisse, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+and+behaviour+of+early+macrophages+in+the+zebrafish+embryo.">Ontogeny and behaviour of early macrophages in the zebrafish embryo.</a> Development. 126, 3735-3745 (1999).</li><li>Alibaud, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Mycobacterium+marinum+TesA+mutant+defective+for+major+cell+wall-associated+lipids+is+highly+attenuated+in+Dictyostelium+discoideum+and+zebrafish+embryos.">A Mycobacterium marinum TesA mutant defective for major cell wall-associated lipids is highly attenuated in Dictyostelium discoideum and zebrafish embryos.</a> Mol. Microbiol. 80, 919-934 (2011).</li><li>Carvalho, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-throughput+screen+for+tuberculosis+progression.">A high-throughput screen for tuberculosis progression.</a> PLoS One. 6, 16779-16779 (2011).</li><li>van der Sar, A. M., Spaink, H. P., Zakrzewska, A., Bitter, W., Meijer, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specificity+of+the+zebrafish+host+transcriptome+response+to+acute+and+chronic+mycobacterial+infection+and+the+role+of+innate+and+adaptive+immune+components.">Specificity of the zebrafish host transcriptome response to acute and chronic mycobacterial infection and the role of innate and adaptive immune components.</a> Mol. Immunol. 46, 2317-2332 (2009).</li><li>Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+Zebrafish+Embryos+to+Analyze+Gene+Function.">Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function.</a> J. Vis. Exp. (25), e1115-e1115 (2009).</li><li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Zebrafish+Book.">The Zebrafish Book.</a> A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Brachydanio rerio). , (1993).</li><li>Gutzman, J. H., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+Brain+Ventricle+Injection.">Zebrafish Brain Ventricle Injection.</a> J. Vis. Exp. (26), e1218-e1218 (2009).</li><li>Ellett, F., Pase, L., Hayman, J. W., Andrianopoulos, A., Lieschke, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mpeg1+promoter+transgenes+direct+macrophage-lineage+expression+in+zebrafish.">mpeg1 promoter transgenes direct macrophage-lineage expression in zebrafish.</a> Blood. 117, 49-56 (2011).</li><li>Stockhammer, O. W., Zakrzewska, A., Hegedus, Z., Spaink, H. P., Meijer, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+profiling+and+functional+analyses+of+the+zebrafish+embryonic+innate+immune+response+to+Salmonella+infection.">Transcriptome profiling and functional analyses of the zebrafish embryonic innate immune response to Salmonella infection.</a> J. Immunol. 182, 5641-5653 (2009).</li><li>Renshaw, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transgenic+zebrafish+model+of+neutrophilic+inflammation.">A transgenic zebrafish model of neutrophilic inflammation.</a> Blood. 108, 3976-3978 (2006).</li><li>Stoop, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+embryo+screen+for+mycobacterial+genes+involved+in+the+initiation+of+granuloma+formation+reveals+a+newly+identified+ESX-1+component.">Zebrafish embryo screen for mycobacterial genes involved in the initiation of granuloma formation reveals a newly identified ESX-1 component.</a> Dis. Model Mech. 4, 526-536 (2011).</li><li>Levraud, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+zebrafish+IFN+receptor:+implications+for+the+origin+of+the+vertebrate+IFN+system.">Identification of the zebrafish IFN receptor: implications for the origin of the vertebrate IFN system.</a> Journal of Immunology. 178, 4385-4394 (2007).</li><li>Levraud, J. P., Colucci-Guyon, E., Redd, M. J., Lutfalla, G., Herbomel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+analysis+of+zebrafish+innate+immunity.">In vivo analysis of zebrafish innate immunity.</a> Methods Mol. Biol. 415, 337-363 (2008).</li><li>Brothers, K. M., Newman, Z. R., Wheeler, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+disseminated+candidiasis+in+zebrafish+reveals+role+of+phagocyte+oxidase+in+limiting+filamentous+growth.">Live imaging of disseminated candidiasis in zebrafish reveals role of phagocyte oxidase in limiting filamentous growth.</a> Eukaryot. Cell. 10, 932-944 (2011).</li><li>Colucci-Guyon, E., Tinevez, J. Y., Renshaw, S. A., Herbomel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+of+professional+phagocytes+in+vivo:+unlike+macrophages,+neutrophils+engulf+only+surface-associated+microbes.">Strategies of professional phagocytes in vivo: unlike macrophages, neutrophils engulf only surface-associated microbes.</a> J. Cell Sci. 124, 3053-3059 (2011).</li><li>van Soest, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+static+immersion+and+intravenous+injection+systems+for+exposure+of+zebrafish+embryos+to+the+natural+pathogen+Edwardsiella+tarda.">Comparison of static immersion and intravenous injection systems for exposure of zebrafish embryos to the natural pathogen Edwardsiella tarda.</a> BMC Immunology. 12, 58-58 (2011).</li><li>Adams, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+tolerance+in+replicating+mycobacteria+mediated+by+a+macrophage-induced+efflux+mechanism.">Drug tolerance in replicating mycobacteria mediated by a macrophage-induced efflux mechanism.</a> Cell. 145, 39-53 (2011).</li><li>Ellett, F. L., Lieschke, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computational+quantification+of+fluorescent+leukocyte+numbers+in+zebrafish+embryos.">Computational quantification of fluorescent leukocyte numbers in zebrafish embryos.</a> Methods in Enzymology. , (2011).</li><li>Yuan, S., Sun, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+mRNA+and+Morpholino+Antisense+Oligonucleotides+in+Zebrafish+Embryos.">Microinjection of mRNA and Morpholino Antisense Oligonucleotides in Zebrafish Embryos.</a> J. Vis. Exp. (27), e1113-e1113 (2009).</li><li>Mathias, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resolution+of+inflammation+by+retrograde+chemotaxis+of+neutrophils+in+transgenic+zebrafish.">Resolution of inflammation by retrograde chemotaxis of neutrophils in transgenic zebrafish.</a> J. Leukoc. Biol. 80, 1281-1288 (2006).</li><li>Hall, C., Flores, M. V., Storm, T., Crosier, K., Crosier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+lysozyme+C+promoter+drives+myeloid-specific+expression+in+transgenic+fish.">The zebrafish lysozyme C promoter drives myeloid-specific expression in transgenic fish.</a> BMC Dev. Biol. 7, 42-42 (2007).</li><li>Gray, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+intravital+imaging+of+macrophage+and+neutrophil+behaviour+during+inflammation+using+a+novel+transgenic+zebrafish.">Simultaneous intravital imaging of macrophage and neutrophil behaviour during inflammation using a novel transgenic zebrafish.</a> Thromb. Haemost. 105, 811-819 (2011).</li></ol>

החוקרים אין לי מה לחשוף.

שיטות הזיהום המתוארות במאמר זה נעשה שימוש לעתים קרובות כדי ללמוד את הפונקציה של גנים מולדים המארחות חסינות או גנים ארסיות חיידקים 1. תוך ורידי של מיקרו הזרקה שיטות (פרוטוקולים 5 ו 6.1) משמשים בדרך כלל ללימודים כאלה. וריד הזנב על האי דם האחורי הוא המיקום הנוח ביותר עבור הזרקה תוך ורידית של 1-בני יומם עוברים. כמו וריד הזנב הופך להיות קשה יותר לחדור בשלבים מאוחרים יותר, אנו מעדיפים את צינור של קיביה כאתר הזרקה תוך ורידית של עוברי ב DPF 2-3. בכל מקרה זה קריטי להזריק את העוברים עם מספרים עקביים של חיידקים, אשר צריך להיבדק על ידי הזרקת inocula ציפוי על ספירת CFU. ההיבטים הבאים יש לקחת בחשבון כדי להשיג זריקות לשחזור. ראשית, חשוב שיהיה באיכות גבוהה microcapillary זכוכית מחטי הזרקה. אם קצה המחט גדולה מדי, הזרקת תיצור חור לנקב גדול מספיק מדמם להתרחשהחיידקים המוזרקים יזרום מתוך מחזור הדם. שנית, החיידק חייב להיות מוזרק ישירות לתוך מחזור הדם. אם קצה המחט לא בתוך הווריד או אם נוזל מתפשט זריקה לתוך הרחבה שק חלמון, העובר חייב להיות מושלך מן הניסוי. שלישית, באמצעות PVP40 כנשא להזרקת מ &#39; marinum יסייע למנוע את החיידקים מן שוקע בתוך מחט זכוכית. PVP40 משפר את ההומוגניות של השעיה, וכתוצאה מכך inocula יותר לשחזור בכל משך זמן של זריקות. PVP40 יכול לשמש גם למטרות ס זריקות typhimurium, אבל כאן זה פחות חשוב כי גודל גדול הקרינה בהיר של החיידקים מאפשר בקרה חזותית על הבידוד הזרקת במהלך הניסויים. עבור לתרגל את הזריקות אנו ממליצים להשתמש פנול אדום צבע (1% V / V) או 1 מיקרומטר כדורים ניאון זמין בצבעים שונים (Invitrogen). לאחר הטכניקה שולט, זה לוקח בערך 30 מינוטes להזריק 50-100 עוברים, כולל הזמן הדרוש יישור עוברים על צלחות agarose והתאמת נפח הזרקת חיידקים. בעוד זריקות תוך ורידי לתוך האי דם (פרוטוקול 5) או לתוך צינור של קיביה (פרוטוקול 6.1) משמשים בדרך כלל, על דרכים חלופיות של זיהום המתוארות במאמר זה וידאו הוכיחו שימושי ללמוד מקרופאג ו נויטרופילים chemotaxis (פרוטוקולים 6.2, 6.3 , ו - 6.4), ללמוד הצמיחה של זני חיידקים מוחלשים (פרוטוקול 6.5), ולהתאים את המודל זיהום דג הזברה עבור תפוקה גבוהה יישומים (פרוטוקול 6.6) 4-8. תיאר את שיטות הזרקת מיקרו יכול להיות מיושם גם על זריקות של 18 וירוסים, נבגי פטריות 19, 14, 20 או טפילים protozoan (מריה פורלנזה, תקשורת אישית). בנוסף שימושי הנהלים הזרקת המתוארות במאמר זה וידאו היא הליך תיאר לאחרונה להזרקה תת עורית של חיידקים לתוך zebrafish עוברים 21. נוהל זה יושם ללמוד phagocytosis של חיידקים על ידי נויטרופילים, שנמצאו חיידקים לבלוע ביעילות על משטחים רקמות אבל, בניגוד מקרופאגים, לא הצליחו כמעט phagocytose חיידקים על זריקה לתוך הדם או אל מלאות נוזל חללים בגוף. עבור העוברים תת עורי זריקות ממוקמים דומה באשר השריר זריקות זנב המתוארות במאמר זה וידאו, אבל את המחט מוחדרת מתחת לעור להזריק את החיידקים על somite. חשוב לקחת בחשבון כי מיקרו הזרקה היא למעשה תוואי מלאכותית של זיהום. עם זאת, עוברי מוקדם עמידות מאוד לחשיפה חיצונית פתוגנים חיידקיים. למעשה, מבחני טבילה, שבו עוברים שטופים ההשעיה חיידקי, לא לשחזור בידינו 22. בעוד כמה עוברי יכול להידבק על טבילה, ראינו שונות רבה בשיעורי התמותה והן אקספרסיון של גנים דלקתיים סמן בין עוברים מבחני בודדים כאלה. המיקרו הזרקה בשיטות המתוארות במאמר זה להשיג זיהומים לשחזור והם יעילים במיוחד כדי לחקור אינטראקציות חיידקים עם תאים חיסוניים מולדים המארחות. הגישה היעילה לכמת זיהום חיידקי עוברי בודדים היא לנתח את התמונות ניאון של עוברים נגועים מחוייט, תוכנה ייעודית כימות פיקסל 17, 23. גישה זו הוכח לתאם גם עם התוצאות של ספירת CFU לאחר ציפוי של עוברים נגועים. כמו כן, שינויים יחסית במספרים ליקוציט לכל העובר היה לכמת ידי ניתוח תמונה דיגיטלית ב מהונדס fluorophore קווי ליקוציט הכתב, גישה זו תהיה ישימה לכימות בתגובה המארח leukopoietic לזיהום 24. פונקציה של גנים מארח מולדים החיסון ניתן לחקור ביעילות על ידי שילוב של מודלים זיהום המתוארים vivoעם מציאה morpholino. Morpholinos הם מולקולות אנטיסנס סינתטיים כי היעד RNAs ספציפיים ולצמצם את הביטוי של גנים המוצרים כאשר מזריקים 1-סלולריים עוברי דג הזברה הבמה כפי שמוצג כתבות וידאו אחרים היומן הזה 10, 25. במחקרים morpholino מציאה, יש חשיבות רבה, כי כל הקבוצות העובר כדי להשוות מועלים בצורה נכונה לפני זריקות חיידקים. זה חשוב במיוחד, כי עוברים יש מערכת החיסון מפתחת המוסמכת שהופך יותר ויותר עם הזמן. ישנם כמה קווי הכתב מהונדס זמין כרגע להבחין בין תת קבוצות עיקריות החיסון המולדת, מקרופאגים, נויטרופילים עוברי דג הזברה. MPX ואת היזמים lyz שימשו כדי ליצור קווי הכתב נויטרופילים 16, 26, 27, ו csf1r (FMS) ו MPEG1 מקדמי שימשו להפקת כתבים מקרופאג 14, 28. בעוד CSF1R (FMS) באה לידי ביטוי ב xanthophores בנוסף, MPEG1 הביטוי הוא אך ורק מקרופאגים. כפי שניתן לראות במאמר זה וידאו, שפותחו לאחרונה MPEG1 קווי הכתב שימושיים ביותר עבור phagocytosis הדמיה חיידקי ידי מקרופאגים.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> מגיב </td><td> ספק </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> פנול אדום </td><td> סיגמא </td><td> P0290 </td></tr><tr><td> גליצרול </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 228210 </td></tr><tr><td> Difco מידלברוק אגר 7H10 </td><td> בקטון, דיקנסון והחברה </td><td> 262710 </td></tr><tr><td> BBL מידלברוק העשרה OADC </td><td> בקטון, דיקנסון והחברה </td><td> 211886 </td></tr><tr><td> Difco מידלברוק 7H9 מרק </td><td> בקטון, דיקנסון והחברה </td><td> 271310 </td></tr><tr><td> BBL מידלברוק העשרה ADC </td><td> בקטון, דיקנסון והחברה </td><td> 211887 </td></tr><tr><td> Tween 80 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P1754 </td></tr><tr><td> Polyvinylpyrrolidone (PVP40) </td><td> Calbiochem, Merck KGaA </td><td> 529504 </td></tr><tr><td> N &lt;/ Em&gt;, Phenylthiourea (PTU) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P7629 </td></tr><tr><td> אתיל 3-aminobenzoate methanesulfonate מלח (Tricaine) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5040 </td></tr><tr><td> מתיל תאית </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> M0387 </td></tr><tr><td> SeaPlaque agarose (נמוך נקודת ההיתוך agarose) </td><td> Lonza בע&quot;מ </td><td> 50100 </td></tr><tr><td> FluoSpheres (1.0 מיקרומטר, אדום ניאון (580/605)) </td><td> Invitrogen </td><td> F8821 </td></tr><tr><td> FluoSpheres (1.0 מיקרומטר, צהוב, ירוק ניאון (505/515)) </td><td> Invitrogen </td><td> F8823 </td></tr></tbody></table>

infection of zebrafish embryos with intracellular bacterial pathogens

דג הזברה (Danio rerio) עוברים משמשים יותר ויותר כמודל לחקר תפקוד של מערכת החיסון המולדת חוליות של אינטראקציות בין מאכסן לפתוגן 1. את סוגי התאים העיקריים של מערכת החיסון המולדת, מקרופאגים ו נויטרופילים, לפתח במהלך הימים הראשונים של embryogenesis לפני ההבשלה של לימפוציטים הנדרשים תגובות הסתגלות המערכת החיסונית. להקל על קבלת מספר גדול של עוברים, נגישות בשל פיתוח חיצוני, שקיפות אופטית של בשלבים עובריים הזחל שלהם, מגוון רחב של כלים, משאבים גנטיים מוטציה נרחבים ואוספים של שורות הכתב מהונדס, כולם להוסיף צדדיות של דג הזברה המודל. סלמונלה enterica serovar Typhimurium (ס &#39;typhimurium) ו Mycobacterium marinum יכולים לשכון intracellularly ב מקרופאגים ו משמשים לעתים קרובות ללמוד בין מאכסן לפתוגן אינטראקציות עוברי דג הזברה. את הזיהום של תהליכים אלה 2חיידקים פתוגנים הם מעניין להשוות בגלל ש &#39; זיהום typhimurium הוא חמור וקטלני בתוך יום אחד, בעוד מ &#39; זיהום marinum היא כרונית ניתן הדמיה עד שלב הזחל 2, 3. האתר של הזרקת מיקרו של חיידקים אל העובר (תרשים 1) קובע אם הזיהום יהיה להפוך במהירות מערכתי או יהיה בתחילה להישאר מקומי. זיהום מערכתי מהיר ניתן לקבוע על ידי מיקרו הזרקת חיידקים ישירות למחזור הדם דרך וריד הזנב על האי דם אחורי או דרך צינור של קיביה, ערוץ זרימת רחב על שק החלמון חיבור הלב vasculature את תא המטען. ב DPF 1, כאשר עוברים בשלב זה יש מקרופאגים פעילים phagocytically אבל הנויטרופילים לא הבשילו עדיין, הזרקת לאי דם עדיפה. על זריקות ב 2-3 DPF, כאשר עוברים גם פיתחו תפקודית (myeloperoxidase לייצור) נויטרופילים, הדביק של קיביה עדיף לא כמוהוא הזרקת באתר. ללמוד הגירה מכוונת של תאים מיאלואידית כלפי זיהומים מקומיים, חיידקים יהיה ניתן להזריק לתוך השריר הזנב, שלפוחית ​​otic, או למוח האחורי החדר 4-6. בנוסף, notochord, מבנה שנראה נגיש בדרך כלל תאים מיאלואידית, סיכון גבוה לזיהום מקומי 7. חלופה שימושי תפוקה גבוהה יישומים הוא הזרקה של חיידקים לתוך החלמון של העובר במהלך השעות הראשונות שלאחר ההפריה 8. שילוב של חיידקים ניאון וקווי דג הזברה מהונדס עם מקרופאגים או נויטרופילים פלורסנט יוצר נסיבות אידיאליות עבור הדמיה רב צבע בין מאכסן לפתוגן אינטראקציות. מאמר זה יתאר וידאו פרוטוקולים מפורטים של זיהום תוך ורידי ומקומיים של עוברי דג הזברה עם ס &#39; typhimurium או מ &#39; marinum חיידקים עבור דימות פלואורסצנטי הבאות של אינטראקציה עם תאים של מערכת החיסון המולדת.

Watch this Scientific Journal Video about Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens at JoVE.com

Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens

עוברי דג הזברה שקוף הוכיחו המארחים מודל שימושי כדי לחזות אינטראקציות למידה תפקודית בין תאים חיסוניים מולדים פתוגנים חיידקיים תאיים, כגון<em&gt; סלמונלה typhimurium</em&gt; ו<em&gt; Mycobacterium marinum</em&gt;. מיקרו הזרקה של חיידקים רב צבע דימות פלואורסצנטי טכניקות חיוניים המעורבים ביישום מודלים של זיהום העובר דג הזברה.

זיהום של עוברים דג הזברה עם פתוגנים חיידקיים תאיים

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as a model for studying the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

'Bioluminescent' Reporter Phage for the Detection of Category A Bacterial Pathogens

&quot;Bioluminescent&quot; כתב phage לצורך זיהוי של קטגוריה פתוגנים חיידקיים

Yersinia pestis and Bacillus anthracis are Category A bacterial pathogens that are the causative agents of the plague and anthrax, respectively 1. ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

היכרות עם מתח שאר בחקר הדבקה חיידקית

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Single Cell Measurements of Vacuolar Rupture Caused by Intracellular Pathogens

מידות תא יחיד של קרע vacuolar נגרמים על ידי פתוגנים תאיים

Shigella flexneri are pathogenic bacteria that invade host cells entering into an endocytic vacuole. Subsequently, the rupture of this membrane-enclosed ...

Discovery of New Intracellular Pathogens by Amoebal Coculture and Amoebal Enrichment Approaches

גילוי של פתוגנים תאיים חדשים על ידי Amoebal Coculture וגישות Amoebal העשרה

Intracellular pathogens such as legionella, mycobacteria and Chlamydia-like organisms are difficult to isolate because they often grow poorly or not at ...

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

דור והקרנה גבוהה תוכן רב-פנוטיפי של<em&gt; Burnetii Coxiella</em&gt; מוטאנטים טרנספוזון

Invasion and colonization of host cells by bacterial pathogens depend on the activity of a large number of prokaryotic proteins, defined as virulence ...

Applying an Inducible Expression System to Study Interference of Bacterial Virulence Factors with Intracellular Signaling

יישום מערכת ביטוי עין מתנהלת לחקר הפרעות של גורמים בקטריאלי ארסיות עם איתות תאיים

The technique presented here allows one to analyze at which step a target protein, or alternatively a small molecule, interacts with the components of a ...

Deciphering and Imaging Pathogenesis and Cording of Mycobacterium abscessus in Zebrafish Embryos

Deciphering and Imaging Pathogenesis and Cording of Mycobacterium abscessus in Zebrafish Embryos

פענוח ופתוגנזה הדמיה והשתרגות<em&gt; Abscessus Mycobacterium</em&gt; בעוברי דג הזברה

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as an infection model to study the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen ...

Identification of Rare Bacterial Pathogens by 16S rRNA Gene Sequencing and MALDI-TOF MS

זיהוי של חיידקים פתוגנים נדירים לפי 16S rRNA ג&#39;ין סידור MALDI-TOF MS

There are a number of rare and, therefore, insufficiently described bacterial pathogens which are reported to cause severe infections especially in ...

Isolation of Single Intracellular Bacterial Communities Generated from a Murine Model of Urinary Tract Infection for Downstream Single-cell Analysis

בידוד של אחת הקהילות חיידקי תאיים שנוצר ממודל מאתר של זיהום בדרכי השתן לניתוח תא בודד במורד הזרם

In this article, we outline a procedure used to isolate individual intracellular bacterial communities from a mouse that has been experimentally infected ...

Opsonophagocytic Killing Assay to Assess Immunological Responses Against Bacterial Pathogens

Opsonophagocytic הריגה הנועד להעריך תגובות אימונולוגי נגד פתוגנים חיידקיים

A key aspect of the immune response to bacterial colonization of the host is phagocytosis. An opsonophagocytic killing assay (OPKA) is an experimental ...