Name: infection of zebrafish embryos with intracellular bacterial pathogens
Uploaded: 2012-03-15T12:00:00
Duration: 11 min 18 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens at JoVE.com

Авторы хотели бы поблагодарить Чао Кюи, этаж де Корт, Эстер Stoop и Ральф Карвалью изображений на рисунке 4, Ульрике Nehrdich и Дави де Витта для ухода рыбы и других членов лаборатории за полезные обсуждения. Эта работа поддерживается Смарт Программа Mix в Нидерландах Министерство экономики и Министерство образования, культуры и науки, Европейская комиссия 7-ая рамочная проект ZF-ЗДОРОВЬЕ (HEALTH-F4-2010-242048), Европейский Марии Кюри Начальная подготовка сети FishForPharma (PITN-GA-2011-289209), а также австралийский NHMRC (637 394). Австралийский Институт регенеративной медицины при поддержке грантов от правительства штата Виктория и австралийского правительства.

<ol>
	<li>Meijer, A. H., Spaink, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host-pathogen+interactions+made+transparent+with+the+zebrafish+model.">Host-pathogen interactions made transparent with the zebrafish model.</a> Curr. Drug Targets. 12, 1000-1017 (2011).</li><li>Davis, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+visualization+of+mycobacterium-macrophage+interactions+leading+to+initiation+of+granuloma+formation+in+zebrafish+embryos.">Real-time visualization of mycobacterium-macrophage interactions leading to initiation of granuloma formation in zebrafish embryos.</a> Immunity. 17, 693-702 (2002).</li><li>vander Sar, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+embryos+as+a+model+host+for+the+real+time+analysis+of+Salmonella+typhimurium+infections.">Zebrafish embryos as a model host for the real time analysis of Salmonella typhimurium infections.</a> Cell Microbiol. 5, 601-611 (2003).</li><li>Zakrzewska, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage-specific+gene+functions+in+Spi1-directed+innate+immunity.">Macrophage-specific gene functions in Spi1-directed innate immunity.</a> Blood. 116, 1-11 (2010).</li><li>Le Guyader, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origins+and+unconventional+behavior+of+neutrophils+in+developing+zebrafish.">Origins and unconventional behavior of neutrophils in developing zebrafish.</a> Blood. 111, 132-141 (2008).</li><li>Herbomel, P., Thisse, B., Thisse, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+and+behaviour+of+early+macrophages+in+the+zebrafish+embryo.">Ontogeny and behaviour of early macrophages in the zebrafish embryo.</a> Development. 126, 3735-3745 (1999).</li><li>Alibaud, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Mycobacterium+marinum+TesA+mutant+defective+for+major+cell+wall-associated+lipids+is+highly+attenuated+in+Dictyostelium+discoideum+and+zebrafish+embryos.">A Mycobacterium marinum TesA mutant defective for major cell wall-associated lipids is highly attenuated in Dictyostelium discoideum and zebrafish embryos.</a> Mol. Microbiol. 80, 919-934 (2011).</li><li>Carvalho, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-throughput+screen+for+tuberculosis+progression.">A high-throughput screen for tuberculosis progression.</a> PLoS One. 6, 16779-16779 (2011).</li><li>van der Sar, A. M., Spaink, H. P., Zakrzewska, A., Bitter, W., Meijer, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specificity+of+the+zebrafish+host+transcriptome+response+to+acute+and+chronic+mycobacterial+infection+and+the+role+of+innate+and+adaptive+immune+components.">Specificity of the zebrafish host transcriptome response to acute and chronic mycobacterial infection and the role of innate and adaptive immune components.</a> Mol. Immunol. 46, 2317-2332 (2009).</li><li>Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+Zebrafish+Embryos+to+Analyze+Gene+Function.">Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function.</a> J. Vis. Exp. (25), e1115-e1115 (2009).</li><li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Zebrafish+Book.">The Zebrafish Book.</a> A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Brachydanio rerio). , (1993).</li><li>Gutzman, J. H., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+Brain+Ventricle+Injection.">Zebrafish Brain Ventricle Injection.</a> J. Vis. Exp. (26), e1218-e1218 (2009).</li><li>Ellett, F., Pase, L., Hayman, J. W., Andrianopoulos, A., Lieschke, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mpeg1+promoter+transgenes+direct+macrophage-lineage+expression+in+zebrafish.">mpeg1 promoter transgenes direct macrophage-lineage expression in zebrafish.</a> Blood. 117, 49-56 (2011).</li><li>Stockhammer, O. W., Zakrzewska, A., Hegedus, Z., Spaink, H. P., Meijer, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+profiling+and+functional+analyses+of+the+zebrafish+embryonic+innate+immune+response+to+Salmonella+infection.">Transcriptome profiling and functional analyses of the zebrafish embryonic innate immune response to Salmonella infection.</a> J. Immunol. 182, 5641-5653 (2009).</li><li>Renshaw, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transgenic+zebrafish+model+of+neutrophilic+inflammation.">A transgenic zebrafish model of neutrophilic inflammation.</a> Blood. 108, 3976-3978 (2006).</li><li>Stoop, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+embryo+screen+for+mycobacterial+genes+involved+in+the+initiation+of+granuloma+formation+reveals+a+newly+identified+ESX-1+component.">Zebrafish embryo screen for mycobacterial genes involved in the initiation of granuloma formation reveals a newly identified ESX-1 component.</a> Dis. Model Mech. 4, 526-536 (2011).</li><li>Levraud, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+zebrafish+IFN+receptor:+implications+for+the+origin+of+the+vertebrate+IFN+system.">Identification of the zebrafish IFN receptor: implications for the origin of the vertebrate IFN system.</a> Journal of Immunology. 178, 4385-4394 (2007).</li><li>Levraud, J. P., Colucci-Guyon, E., Redd, M. J., Lutfalla, G., Herbomel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+analysis+of+zebrafish+innate+immunity.">In vivo analysis of zebrafish innate immunity.</a> Methods Mol. Biol. 415, 337-363 (2008).</li><li>Brothers, K. M., Newman, Z. R., Wheeler, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+disseminated+candidiasis+in+zebrafish+reveals+role+of+phagocyte+oxidase+in+limiting+filamentous+growth.">Live imaging of disseminated candidiasis in zebrafish reveals role of phagocyte oxidase in limiting filamentous growth.</a> Eukaryot. Cell. 10, 932-944 (2011).</li><li>Colucci-Guyon, E., Tinevez, J. Y., Renshaw, S. A., Herbomel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+of+professional+phagocytes+in+vivo:+unlike+macrophages,+neutrophils+engulf+only+surface-associated+microbes.">Strategies of professional phagocytes in vivo: unlike macrophages, neutrophils engulf only surface-associated microbes.</a> J. Cell Sci. 124, 3053-3059 (2011).</li><li>van Soest, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+static+immersion+and+intravenous+injection+systems+for+exposure+of+zebrafish+embryos+to+the+natural+pathogen+Edwardsiella+tarda.">Comparison of static immersion and intravenous injection systems for exposure of zebrafish embryos to the natural pathogen Edwardsiella tarda.</a> BMC Immunology. 12, 58-58 (2011).</li><li>Adams, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+tolerance+in+replicating+mycobacteria+mediated+by+a+macrophage-induced+efflux+mechanism.">Drug tolerance in replicating mycobacteria mediated by a macrophage-induced efflux mechanism.</a> Cell. 145, 39-53 (2011).</li><li>Ellett, F. L., Lieschke, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computational+quantification+of+fluorescent+leukocyte+numbers+in+zebrafish+embryos.">Computational quantification of fluorescent leukocyte numbers in zebrafish embryos.</a> Methods in Enzymology. , (2011).</li><li>Yuan, S., Sun, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+mRNA+and+Morpholino+Antisense+Oligonucleotides+in+Zebrafish+Embryos.">Microinjection of mRNA and Morpholino Antisense Oligonucleotides in Zebrafish Embryos.</a> J. Vis. Exp. (27), e1113-e1113 (2009).</li><li>Mathias, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resolution+of+inflammation+by+retrograde+chemotaxis+of+neutrophils+in+transgenic+zebrafish.">Resolution of inflammation by retrograde chemotaxis of neutrophils in transgenic zebrafish.</a> J. Leukoc. Biol. 80, 1281-1288 (2006).</li><li>Hall, C., Flores, M. V., Storm, T., Crosier, K., Crosier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+lysozyme+C+promoter+drives+myeloid-specific+expression+in+transgenic+fish.">The zebrafish lysozyme C promoter drives myeloid-specific expression in transgenic fish.</a> BMC Dev. Biol. 7, 42-42 (2007).</li><li>Gray, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+intravital+imaging+of+macrophage+and+neutrophil+behaviour+during+inflammation+using+a+novel+transgenic+zebrafish.">Simultaneous intravital imaging of macrophage and neutrophil behaviour during inflammation using a novel transgenic zebrafish.</a> Thromb. Haemost. 105, 811-819 (2011).</li></ol>

Авторы не имеют ничего раскрывать.

Инфекция методы, описанные в этой статье, которые часто используются для изучения функций генов хозяин врожденный иммунитет или бактериальных генов вирулентности 1. Внутривенное введение микро-методы (протоколы 5 и 6.1), которые используются чаще всего для таких исследований. Хвостовой вены на задней острове крови является наиболее удобным местом для внутривенного введения 1-дневных эмбрионов. В хвостовой вены становится все труднее проникать на более поздних стадиях, мы предпочитаем Канальные Кювье, как внутривенная инъекция сайт для эмбрионов на 2-3 DPF. Во всех случаях важно, чтобы ввести эмбрионы с постоянным количеством бактерий, которые должны быть проверены на покрытие посевного материала для инъекций для подсчета КОЕ. Следующие аспекты должны быть рассмотрены для достижения воспроизводимых инъекций. Во-первых, необходимо иметь высококачественное стекло микрокапиллярных игл инъекции. Если кончик иглы слишком велик, введение создаст прокола отверстие достаточно большой для кровотечение происходит ивводили бактерии будут поступать из кровообращения. Во-вторых, бактерии должны быть введены непосредственно в кровообращение. Если кончик иглы не в вену или если инъекция жидкости распространяется на продление желточного мешка, эмбрион должен быть исключены из эксперимента. В-третьих, использование PVP40 в качестве носителя для потребителей инъекционных М. Marinum будет оказывать помощь в предотвращении бактерий погружается в стеклянной иглы. PVP40 улучшает однородность суспензии, в результате чего более воспроизводимые посевного материала в течение всего срока инъекции. PVP40 также может быть использован для S. Typhimurium инъекций, но здесь это менее важно, так как больший размер и яркие флуоресценции бактерий позволяет визуально контролировать впрыск посевной в ходе экспериментов. Для практикующих инъекции мы рекомендуем использовать фенола красного красителя (1% об / об) или 1 мкм флуоресцентные сферы доступны в различных цветах (Invitrogen). Как только техника освоена, она занимает около 30 Minutэс вводить 50-100 эмбрионов, включая время, необходимое для выравнивания эмбрионов на пластинах агарозы и регулирования бактериальных объем инъекций. В то время как внутривенные инъекции в кровь острова (протокол 5) или в канал Кювье (протокол 6.1) наиболее часто используются, альтернативных путей заражения, описанные в этой статье видео оказались полезными для изучения макрофагов и нейтрофилов, хемотаксис (протоколы 6.2, 6.3 и 6.4), для изучения роста ослабленных штаммов бактерий (протокол 6.5), и адаптировать модель данио инфекции для высокой пропускной способности приложений (протокол 6.6) 4-8. Описанные микро-инъекционные методы могут быть применены для инъекций вирусы 18, 19, грибковых спор 14, 20 или простейших паразитов (Мария Forlenza, личное сообщение). Полезным дополнением к инъекции процедур, описанных в этом видео, статьи недавно описанной процедуры для подкожного введения бактерий в zebrafish эмбрионов 21. Эта процедура была применена к изучению фагоцитоза бактерий нейтрофилы, которые были найдены эффективно поглощают бактерии на поверхности ткани, но, в отличие от макрофагов, практически не в состоянии фагоцитируют бактерии при введении в кровь или в заполненных жидкостью полостей тела. Для подкожных инъекций эмбрионов расположены аналогично, как и для мышц хвоста инъекции, описанные в этой статье видео, но игла вводится под кожу, чтобы ввести бактерий на сегмент. Важно учитывать, что микро-инъекции, по существу искусственным путем передачи инфекции. Тем не менее, ранние эмбрионы обладают высокой устойчивостью к внешнему воздействию болезнетворных бактерий. На самом деле, погружение анализов, где эмбрионы купаются в бактериальной суспензии, не воспроизводимые в наших руках 22. Хотя некоторые эмбрионы могут заразиться при погружении, мы наблюдаем большой разброс в показателях смертности и экспрессионных воспалительных маркеров генов между отдельными эмбрионами в таких анализов. Микро-инъекционные методы, описанные в этой статье получения воспроизводимых инфекции и особенно полезны для изучения бактериальных взаимодействия с принимающей иммунной клетки. Эффективный подход к количественной бактериальной инфекции в отдельных эмбрионов является анализ флуоресцентных изображений зараженных эмбрионов на заказ, специализированное программное обеспечение количественного пикселя 17, 23. Этот подход был показан на хорошо коррелируют с результатами подсчета КОЕ после покрытия зараженных эмбрионов. Кроме того, относительные изменения в лейкоцитарной номеров в зародыше были количественно цифрового анализа изображений в трансгенных линий флуорофора лейкоцитов репортер, этот подход будет применяться к количественному принимающей leukopoietic ответ на инфекцию 24. Функция принимающих иммунной генов может быть исследована эффективность в естественных условиях путем объединения описанных моделей инфекциис морфолино нокдаун. Morpholinos синтетические олигонуклеотиды антисмысловых которые предназначаются для определенных РНК и снижение экспрессии гена продукции при введении в 1-клетки эмбрионов данио этапа, как показано в других статьях, видео в этом журнале, 10, 25. В исследованиях морфолино нокдаун, это имеет большое значение, что все эмбрион групп в сравнении которые поставил правильно до бактериальных инъекций. Это особенно важно, потому что у эмбрионов развивается иммунная система, которая становится все более компетентными с течением времени. Есть несколько трансгенных линий репортер в настоящее время выделить основные иммунной подмножества, макрофагов и нейтрофилов, у эмбрионов данио рерио. Мп и lyz промоутеров были использованы для создания нейтрофилов линии репортер 16, 26, 27 и csf1r (ФМС) и mpeg1 промоутеров были использованы для производства макрофагов журналистам 14, 28. В то время как CSF1R (ФМС) дополнительно выражается в xanthophores, mpeg1 выражение исключительно в макрофагах. Как показано в этом видео статьи, недавно разработанный mpeg1 линии репортер очень полезны для работы с изображениями бактериального фагоцитоза макрофагами.

<table border="1"><tbody><tr><td> Реагент </td><td> Поставщик </td><td> Номер по каталогу </td></tr><tr><td> Фенол красный </td><td> Сигма </td><td> P0290 </td></tr><tr><td> Глицерин </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 228210 </td></tr><tr><td> Difco Миддлбрук 7H10 агар </td><td> Becton, Dickenson и компании </td><td> 262710 </td></tr><tr><td> BBL Миддлбрук OADC обогащения </td><td> Becton, Dickenson и компании </td><td> 211886 </td></tr><tr><td> Difco Миддлбрук 7H9 Отвар </td><td> Becton, Dickenson и компании </td><td> 271310 </td></tr><tr><td> BBL Миддлбрук АЦП обогащения </td><td> Becton, Dickenson и компании </td><td> 211887 </td></tr><tr><td> Твин-80 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P1754 </td></tr><tr><td> Поливинилпирролидон (PVP40) </td><td> Calbiochem, Merck KGaA </td><td> 529504 </td></tr><tr><td> N &lt;/ EM&gt;-фенилтиомочевиной (ПТУ) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P7629 </td></tr><tr><td> Этиловый 3-аминобензоат метансульфонат соли (Tricaine) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5040 </td></tr><tr><td> Метилцеллюлоза </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> M0387 </td></tr><tr><td> Легкоплавкий агарозы (низкая температура плавления агарозы) </td><td> Lonza Инк </td><td> 50100 </td></tr><tr><td> FluoSpheres (1,0 мкм, красный флуоресцентный (580/605)) </td><td> Invitrogen </td><td> F8821 </td></tr><tr><td> FluoSpheres (1,0 мкм, желто-зеленый флуоресцентный (505/515)) </td><td> Invitrogen </td><td> F8823 </td></tr></tbody></table>

infection of zebrafish embryos with intracellular bacterial pathogens

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as a model for studying the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen interactions 1. The major cell types of the innate immune system, macrophages and neutrophils, develop during the first days of embryogenesis prior to the maturation of lymphocytes that are required for adaptive immune responses. The ease of obtaining large numbers of embryos, their accessibility due to external development, the optical transparency of embryonic and larval stages, a wide range of genetic tools, extensive mutant resources and collections of transgenic reporter lines, all add to the versatility of the zebrafish model. Salmonella enterica serovar Typhimurium (S. typhimurium) and Mycobacterium marinum can reside intracellularly in macrophages and are frequently used to study host-pathogen interactions in zebrafish embryos. The infection processes of these two bacterial pathogens are interesting to compare because S. typhimurium infection is acute and lethal within one day, whereas M. marinum infection is chronic and can be imaged up to the larval stage 2, 3. The site of micro-injection of bacteria into the embryo (Figure 1) determines whether the infection will rapidly become systemic or will initially remain localized. A rapid systemic infection can be established by micro-injecting bacteria directly into the blood circulation via the caudal vein at the posterior blood island or via the Duct of Cuvier, a wide circulation channel on the yolk sac connecting the heart to the trunk vasculature. At 1 dpf, when embryos at this stage have phagocytically active macrophages but neutrophils have not yet matured, injecting into the blood island is preferred. For injections at 2-3 dpf, when embryos also have developed functional (myeloperoxidase-producing) neutrophils, the Duct of Cuvier is preferred as the injection site. To study directed migration of myeloid cells towards local infections, bacteria can be injected into the tail muscle, otic vesicle, or hindbrain ventricle 4-6. In addition, the notochord, a structure that appears to be normally inaccessible to myeloid cells, is highly susceptible to local infection 7. A useful alternative for high-throughput applications is the injection of bacteria into the yolk of embryos within the first hours after fertilization 8. Combining fluorescent bacteria and transgenic zebrafish lines with fluorescent macrophages or neutrophils creates ideal circumstances for multi-color imaging of host-pathogen interactions. This video article will describe detailed protocols for intravenous and local infection of zebrafish embryos with S. typhimurium or M. marinum bacteria and for subsequent fluorescence imaging of the interaction with cells of the innate immune system.

Watch this Scientific Journal Video about Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens at JoVE.com

Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens

Прозрачный эмбрионов данио оказались полезными хостов модель для визуализации и функционально взаимодействия между врожденными исследование иммунных клеток и внутриклеточных бактериальных патогенов, таких как<em&gt; Salmonella Typhimurium</em&gt; И<em&gt; Mycobacterium Marinum</em&gt;. Микро-инъекции бактерий и многоцветной флуоресценции необходимы методы, участвующие в применении модели данио инфекции эмбриона.

Заражение эмбрионов данио рерио с внутриклеточные бактериальные патогены

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as a model for studying the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

'Bioluminescent' Reporter Phage for the Detection of Category A Bacterial Pathogens

&quot;Биолюминесцентный &#39;Reporter Фаг для обнаружения Категория бактериальных патогенов

Yersinia pestis and Bacillus anthracis are Category A bacterial pathogens that are the causative agents of the plague and anthrax, respectively 1. ...

Single Cell Measurements of Vacuolar Rupture Caused by Intracellular Pathogens

Единичных измерений Сотовые вакуолярных разрыв под действием внутриклеточных патогенов

Shigella flexneri are pathogenic bacteria that invade host cells entering into an endocytic vacuole. Subsequently, the rupture of this membrane-enclosed ...

Discovery of New Intracellular Pathogens by Amoebal Coculture and Amoebal Enrichment Approaches

Открытие новых внутриклеточных патогенов на Amoebal сокультивирования и подходов Amoebal обогащению

Intracellular pathogens such as legionella, mycobacteria and Chlamydia-like organisms are difficult to isolate because they often grow poorly or not at ...

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

Генерация и нескольких фенотипическая Скрининг высокого содержания<em&gt; Coxiella burnetii</em&gt; транспозонов мутанты

Invasion and colonization of host cells by bacterial pathogens depend on the activity of a large number of prokaryotic proteins, defined as virulence ...

Applying an Inducible Expression System to Study Interference of Bacterial Virulence Factors with Intracellular Signaling

Применяя INDUCIBLE системы экспрессии для изучения помех бактериальных факторов вирулентности с внутриклеточной сигнализации

The technique presented here allows one to analyze at which step a target protein, or alternatively a small molecule, interacts with the components of a ...

Identification of Rare Bacterial Pathogens by 16S rRNA Gene Sequencing and MALDI-TOF MS

Идентификация редких бактериальными патогенами с 16S рРНК секвенирование гена и MALDI-TOF MS

There are a number of rare and, therefore, insufficiently described bacterial pathogens which are reported to cause severe infections especially in ...

Isolation of Single Intracellular Bacterial Communities Generated from a Murine Model of Urinary Tract Infection for Downstream Single-cell Analysis

Изоляция одной внутриклеточных бактериальных сообществ, генерируется из мышиных модели инфекции мочевыводящих путей анализа течению одноклеточного

In this article, we outline a procedure used to isolate individual intracellular bacterial communities from a mouse that has been experimentally infected ...

Opsonophagocytic Killing Assay to Assess Immunological Responses Against Bacterial Pathogens

Opsonophagocytic убийства Assay оценить иммунологические реакции против бактериальных патогенов

A key aspect of the immune response to bacterial colonization of the host is phagocytosis. An opsonophagocytic killing assay (OPKA) is an experimental ...

Visualization of Macrophage Lytic Cell Death During Mycobacterial Infection in Zebrafish Embryos via Intravital Microscopy

Визуализация макрофаг Lytic Cell Смерти во время микобактериальной инфекции в эмбрионах зебрафиш а через интравитальную микроскопию

Zebrafish is an excellent model organism for studying innate immune cell behavior due to its transparent nature and reliance solely on its innate immune ...

Determination of Chemical Inhibitor Efficiency against Intracellular Toxoplasma Gondii Growth Using a Luciferase-Based Growth Assay

Determination of Chemical Inhibitor Efficiency against Intracellular Toxoplasma Gondii Growth Using a Luciferase-Based Growth Assay

Определение эффективности химического ингибитора против внутриклеточного токсоплазмы Gondii Рост С помощью Люциферазы основе анализ роста

Toxoplasma gondii is a protozoan pathogen that widely affects the human population. The current antibiotics used for treating clinical toxoplasmosis are ...