Name: infection of zebrafish embryos with intracellular bacterial pathogens
Uploaded: 2012-03-15T12:00:00
Duration: 11 min 18 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens at JoVE.com

Yazarlar balık bakımı için Şekil 4, Ulrike Nehrdich ve Davy de Witt görüntüleri ve yararlı tartışmalar için diğer laboratuvar üyeleri için, Chao Cui teşekkür Kat de Kort, Esther Stoop ve Ralph Carvalho istiyorum. Bu çalışma Ekonomik İlişkiler Hollanda Bakanlığı Smart Mix Programı ve Eğitim, Kültür ve Bilim, Avrupa Komisyonu 7. Çerçeve projesi ZF-SAĞLIK (SAĞLIK-F4-2010-242048), Avrupa Marie-Curie Bakanlığı tarafından desteklenmektedir İlk Eğitim Ağı FishForPharma (PITN-GA-2011-289209) ve Avustralya NHMRC (637.394) tarafından. Avustralya Rejeneratif Tıp Enstitüsü Victoria ve Avustralya Hükümeti Eyalet Hükümeti hibe ile desteklenmektedir.

<ol>
	<li>Meijer, A. H., Spaink, H. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Host-pathogen+interactions+made+transparent+with+the+zebrafish+model.">Host-pathogen interactions made transparent with the zebrafish model.</a> Curr. Drug Targets. 12, 1000-1017 (2011).</li><li>Davis, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+visualization+of+mycobacterium-macrophage+interactions+leading+to+initiation+of+granuloma+formation+in+zebrafish+embryos.">Real-time visualization of mycobacterium-macrophage interactions leading to initiation of granuloma formation in zebrafish embryos.</a> Immunity. 17, 693-702 (2002).</li><li>vander Sar, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+embryos+as+a+model+host+for+the+real+time+analysis+of+Salmonella+typhimurium+infections.">Zebrafish embryos as a model host for the real time analysis of Salmonella typhimurium infections.</a> Cell Microbiol. 5, 601-611 (2003).</li><li>Zakrzewska, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage-specific+gene+functions+in+Spi1-directed+innate+immunity.">Macrophage-specific gene functions in Spi1-directed innate immunity.</a> Blood. 116, 1-11 (2010).</li><li>Le Guyader, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origins+and+unconventional+behavior+of+neutrophils+in+developing+zebrafish.">Origins and unconventional behavior of neutrophils in developing zebrafish.</a> Blood. 111, 132-141 (2008).</li><li>Herbomel, P., Thisse, B., Thisse, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ontogeny+and+behaviour+of+early+macrophages+in+the+zebrafish+embryo.">Ontogeny and behaviour of early macrophages in the zebrafish embryo.</a> Development. 126, 3735-3745 (1999).</li><li>Alibaud, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Mycobacterium+marinum+TesA+mutant+defective+for+major+cell+wall-associated+lipids+is+highly+attenuated+in+Dictyostelium+discoideum+and+zebrafish+embryos.">A Mycobacterium marinum TesA mutant defective for major cell wall-associated lipids is highly attenuated in Dictyostelium discoideum and zebrafish embryos.</a> Mol. Microbiol. 80, 919-934 (2011).</li><li>Carvalho, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-throughput+screen+for+tuberculosis+progression.">A high-throughput screen for tuberculosis progression.</a> PLoS One. 6, 16779-16779 (2011).</li><li>van der Sar, A. M., Spaink, H. P., Zakrzewska, A., Bitter, W., Meijer, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specificity+of+the+zebrafish+host+transcriptome+response+to+acute+and+chronic+mycobacterial+infection+and+the+role+of+innate+and+adaptive+immune+components.">Specificity of the zebrafish host transcriptome response to acute and chronic mycobacterial infection and the role of innate and adaptive immune components.</a> Mol. Immunol. 46, 2317-2332 (2009).</li><li>Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+Zebrafish+Embryos+to+Analyze+Gene+Function.">Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function.</a> J. Vis. Exp. (25), e1115-e1115 (2009).</li><li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Dev. Dyn. 203, 253-310 (1995).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Zebrafish+Book.">The Zebrafish Book.</a> A Guide for the Laboratory Use of Zebrafish (Brachydanio rerio). , (1993).</li><li>Gutzman, J. H., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+Brain+Ventricle+Injection.">Zebrafish Brain Ventricle Injection.</a> J. Vis. Exp. (26), e1218-e1218 (2009).</li><li>Ellett, F., Pase, L., Hayman, J. W., Andrianopoulos, A., Lieschke, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mpeg1+promoter+transgenes+direct+macrophage-lineage+expression+in+zebrafish.">mpeg1 promoter transgenes direct macrophage-lineage expression in zebrafish.</a> Blood. 117, 49-56 (2011).</li><li>Stockhammer, O. W., Zakrzewska, A., Hegedus, Z., Spaink, H. P., Meijer, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptome+profiling+and+functional+analyses+of+the+zebrafish+embryonic+innate+immune+response+to+Salmonella+infection.">Transcriptome profiling and functional analyses of the zebrafish embryonic innate immune response to Salmonella infection.</a> J. Immunol. 182, 5641-5653 (2009).</li><li>Renshaw, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transgenic+zebrafish+model+of+neutrophilic+inflammation.">A transgenic zebrafish model of neutrophilic inflammation.</a> Blood. 108, 3976-3978 (2006).</li><li>Stoop, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+embryo+screen+for+mycobacterial+genes+involved+in+the+initiation+of+granuloma+formation+reveals+a+newly+identified+ESX-1+component.">Zebrafish embryo screen for mycobacterial genes involved in the initiation of granuloma formation reveals a newly identified ESX-1 component.</a> Dis. Model Mech. 4, 526-536 (2011).</li><li>Levraud, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+zebrafish+IFN+receptor:+implications+for+the+origin+of+the+vertebrate+IFN+system.">Identification of the zebrafish IFN receptor: implications for the origin of the vertebrate IFN system.</a> Journal of Immunology. 178, 4385-4394 (2007).</li><li>Levraud, J. P., Colucci-Guyon, E., Redd, M. J., Lutfalla, G., Herbomel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+analysis+of+zebrafish+innate+immunity.">In vivo analysis of zebrafish innate immunity.</a> Methods Mol. Biol. 415, 337-363 (2008).</li><li>Brothers, K. M., Newman, Z. R., Wheeler, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+imaging+of+disseminated+candidiasis+in+zebrafish+reveals+role+of+phagocyte+oxidase+in+limiting+filamentous+growth.">Live imaging of disseminated candidiasis in zebrafish reveals role of phagocyte oxidase in limiting filamentous growth.</a> Eukaryot. Cell. 10, 932-944 (2011).</li><li>Colucci-Guyon, E., Tinevez, J. Y., Renshaw, S. A., Herbomel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+of+professional+phagocytes+in+vivo:+unlike+macrophages,+neutrophils+engulf+only+surface-associated+microbes.">Strategies of professional phagocytes in vivo: unlike macrophages, neutrophils engulf only surface-associated microbes.</a> J. Cell Sci. 124, 3053-3059 (2011).</li><li>van Soest, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+static+immersion+and+intravenous+injection+systems+for+exposure+of+zebrafish+embryos+to+the+natural+pathogen+Edwardsiella+tarda.">Comparison of static immersion and intravenous injection systems for exposure of zebrafish embryos to the natural pathogen Edwardsiella tarda.</a> BMC Immunology. 12, 58-58 (2011).</li><li>Adams, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+tolerance+in+replicating+mycobacteria+mediated+by+a+macrophage-induced+efflux+mechanism.">Drug tolerance in replicating mycobacteria mediated by a macrophage-induced efflux mechanism.</a> Cell. 145, 39-53 (2011).</li><li>Ellett, F. L., Lieschke, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Computational+quantification+of+fluorescent+leukocyte+numbers+in+zebrafish+embryos.">Computational quantification of fluorescent leukocyte numbers in zebrafish embryos.</a> Methods in Enzymology. , (2011).</li><li>Yuan, S., Sun, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+mRNA+and+Morpholino+Antisense+Oligonucleotides+in+Zebrafish+Embryos.">Microinjection of mRNA and Morpholino Antisense Oligonucleotides in Zebrafish Embryos.</a> J. Vis. Exp. (27), e1113-e1113 (2009).</li><li>Mathias, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resolution+of+inflammation+by+retrograde+chemotaxis+of+neutrophils+in+transgenic+zebrafish.">Resolution of inflammation by retrograde chemotaxis of neutrophils in transgenic zebrafish.</a> J. Leukoc. Biol. 80, 1281-1288 (2006).</li><li>Hall, C., Flores, M. V., Storm, T., Crosier, K., Crosier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+lysozyme+C+promoter+drives+myeloid-specific+expression+in+transgenic+fish.">The zebrafish lysozyme C promoter drives myeloid-specific expression in transgenic fish.</a> BMC Dev. Biol. 7, 42-42 (2007).</li><li>Gray, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+intravital+imaging+of+macrophage+and+neutrophil+behaviour+during+inflammation+using+a+novel+transgenic+zebrafish.">Simultaneous intravital imaging of macrophage and neutrophil behaviour during inflammation using a novel transgenic zebrafish.</a> Thromb. Haemost. 105, 811-819 (2011).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Bu yazıda tarif enfeksiyonu yöntemler genellikle bilgisayar doğuştan gelen bağışıklık genlerinin ya da bakteriyel virülans genler 1 işlevini incelemek için kullanılır. Intravenöz mikro-enjeksiyon yöntemleri (protokolleri 5 ve 6.1) bu tür çalışmalar için en sık kullanılan. Posterior kan adada kaudal ven 1-günlük embriyoların intravenöz enjeksiyon için en uygun yerdir. Kaudal ven sonraki aşamalarında nüfuz için daha zor hale geldikçe, biz 2-3 dpf&#39;e az embriyo için intravenöz enjeksiyon bölgesi olarak Cuvier ve Kanal tercih. Her durumda kob sayımı için kaplama enjeksiyon inokulum tarafından kontrol edilmelidir bakteri tutarlı numaraları ile embriyo enjekte etmek önemlidir. Aşağıdaki hususların enjeksiyonlar tekrarlanabilir ulaşmak için dikkate alınmalıdır. İlk olarak, yüksek kaliteli cam microcapillary enjeksiyon iğneleri olması şarttır. Iğne ucu kadar büyükse, enjeksiyon meydana kanama için yeterince büyük bir deliği oluşturur veenjekte edilen bakterilerin kan dolaşımını dışarı akacaktır. İkinci olarak, bakteri kan dolaşımı içine doğrudan enjekte edilmesi gerekir. Iğne ucu yolk sac uzatma enjeksiyon sıvısı yayılır damar içine veya eğer değilse, embriyo deneyden atılmalıdır. Üçüncü olarak, M. enjekte etmek için bir taşıyıcı olarak PVP40 kullanılarak marinum cam iğne batıyor gelen bakteri önlemede yardımcı olacaktır. PVP40 enjeksiyon süresi boyunca daha tekrarlanabilir inokulum sonuçlanan, süspansiyon homojen olmasını sağlar. PVP40 da S. için kullanılabilir büyük boyut ve bakterilerin parlak floresan deneyler sırasında enjeksiyon inokulum üzerinde görsel kontrolü sağlar çünkü typhimurium enjeksiyonları, ama burada daha az önemlidir. Enjeksiyonlar uygulama için biz fenol kırmızı boya (% 1 v / v) veya 1 mikron farklı renkler (Invitrogen) mevcut floresan kürelerin kullanılması tavsiye edilir. Teknik hakim edildikten sonra, bu yaklaşık olarak 30 minut alıres agaroz plakalar üzerinde embriyo hizalayarak ve bakteriyel enjeksiyon ses ayarlamak için gereken zaman dahil, 50-100 embriyo enjekte etmek. Kan ada (protokol 5) veya Cuvier (protokol 6.1) kanal içine intravenöz enjeksiyon en sık kullanılan edilirken, bu video makalede açıklanan enfeksiyon alternatif güzergahlar (protokolleri 6.2, 6.3 makrofaj ve nötrofil kemotaksisini çalışmak için yararlı olan ve 6.4), zayıflatılmış bakteri suşları (protokol 6.5) büyüme incelemek ve yüksek hacimli uygulamalar (protokol 6.6) 4-8 zebrabalıkları enfeksiyon modelinde uyarlamak. Açıklandığı mikro-enjeksiyon yöntemleri de virüsler 18, 19, mantar sporları 14, 20 veya protozoon paraziti (Maria Forlenza, kişisel iletişim) enjeksiyonu için uygulanabilir. Bu video makalesinde tarif enjeksiyon prosedürler yararlı bir ek zebr bakterilerin subkutan enjeksiyon için kısa bir süre önce anlatılan prosedürüafish embriyoların 21. Bu prosedür, yüzeyler üzerinde etkili bir doku engulf bakteri olduğu tespit edilmiştir, ancak nötrofiller, bakterilerin fagositozunu incelemek için uygulanmış, makrofajlar aksine, kan içinde ya da sıvı dolu bir kavite içine enjeksiyon gövdesi üzerine bakteriler fagosite neredeyse olamamıştır. Subkutan enjeksiyonlar embriyolar için bu video makalede açıklanan kuyruk kas enjeksiyon için benzer yerleştirilmiş, ancak iğne bir hücre gruplarının üzerinde bakteri enjekte derinin hemen altında eklenir. Bu mikro-enjeksiyon esas enfeksiyon yapay bir yol olduğunu dikkate almak önemlidir. Ancak, erken embriyo bakteriyel patojenler dış maruz karşı oldukça dirençlidir. Aslında, embriyolar bakteriyel süspansiyon içinde kalmış olan batırma testleri, bizim elimizde 22 tekrarlanabilir değildir. Bazı embriyolar daldırma üzerine bulaşabilir ederken, ölüm oranları ve ekspres büyük bir değişim gözlemledikBu tür testler bireysel embriyoları arasında inflamatuvar belirteç genlerin iyon. Bu makalede açıklanan mikro-enjeksiyon yöntemleri tekrarlanabilir enfeksiyonları ulaşmak ve host doğuştan gelen bağışıklık hücreleri ile bakteriyel etkileşimleri çalışmak için özellikle faydalıdır. Bireysel embriyolarında bakteriyel enfeksiyon ölçmek için etkin bir yaklaşım ısmarlama, özel piksel ölçümü yazılımı 17, 23 ile enfekte embriyoların floresan görüntüleri analiz etmektir. Bu yaklaşım enfekte embriyoların sonra kaplama kob sayımı sonuçları ile iyi bir korelasyon olduğu gösterilmiştir. Benzer şekilde, embriyo başına lökosit sayısında göreceli değişiklikler transgenik lökosit fluorofor muhabiri hatlarında dijital görüntü analizi ile ölçülebilir edilmiştir; bu yaklaşım enfeksiyon 24 konak leukopoietic yanıt miktarının için geçerli olacaktır. Konak doğuştan gelen bağışıklık genlerin işlevine tarif enfeksiyonu modelleri birleştirerek in vivo olarak etkili bir şekilde araştırılmıştır edilebilirmorfolino devirme ile. Morpholinos belirli bir hedef RNA ve bu Journal 10, 25 in diğer video makaleler gösterildiği gibi, 1-hücre aşaması zebrafish embriyosu içine enjekte edildiğinde gen ürünleri ifadesi azaltmak sentetik antisens oligonükleotidler şunlardır. Morfolino Knockdown çalışmalarda, karşılaştırılmak üzere tüm embriyo gruplar bakteriyel enjeksiyonları öncesinde doğru sahnelenir büyük önem taşımaktadır. Embriyo zaman içinde giderek yetkin hale gelişmekte olan bir bağışıklık sistemine sahip, çünkü bu özellikle önemlidir. Zebra balığı embriyolarının en önemli doğal immün alt, makrofaj ve nötrofiller, ayırt etmek için şu anda birçok transgenik muhabiri hatları vardır. Mpx ve lyz arttırıcılar nötrofil raportör çizgileri 16, 26, 27 üretmek için kullanılmış olan ve csf1r (FMS) ve mpeg1 arttırıcılar makrofaj gazetecilere 14, 28 üretmek için kullanıldı. Iken csf1r (FMS) ayrıca xanthophores ifade edilir, MPEG1 ifade makrofajlarda münhasıran. Bu video madde de gösterildiği üzere, yeni geliştirilen mpeg1 raportör hatları makrofajların görüntüleme bakteriyel fagositozunu için son derece yararlıdır.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif </td><td> Satıcı </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> Fenol Red </td><td> Sigma </td><td> P0290 </td></tr><tr><td> Gliserin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 228210 </td></tr><tr><td> Difco Middlebrook 7H10 agar </td><td> Becton, Dickenson ve Şirket </td><td> 262710 </td></tr><tr><td> BBL Middlebrook OADC Zenginleştirme </td><td> Becton, Dickenson ve Şirket </td><td> 211886 </td></tr><tr><td> Difco Middlebrook 7H9 Broth </td><td> Becton, Dickenson ve Şirket </td><td> 271310 </td></tr><tr><td> BBL Middlebrook ADC Zenginleştirme </td><td> Becton, Dickenson ve Şirket </td><td> 211887 </td></tr><tr><td> Tween 80 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P1754 </td></tr><tr><td> Polivinilpirrolidon (PVP40) </td><td> Calbiochem, Merck KGaA </td><td> 529504 </td></tr><tr><td> N &lt;/ Em&gt;-Phenylthiourea (PTU) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P7629 </td></tr><tr><td> Etil 3-aminobenzoat metansülfonat tuzu (Tricaine) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5040 </td></tr><tr><td> Metil selüloz </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> M0387 </td></tr><tr><td> SeaPlaque Agaroz (düşük erime noktası agaroz) </td><td> Lonza A.Ş. </td><td> 50100 </td></tr><tr><td> FluoSpheres (1.0 mikron, kırmızı floresan (580/605)) </td><td> Invitrogen </td><td> F8821 </td></tr><tr><td> FluoSpheres (1.0 mikron, (505/515) sarı-yeşil flüoresan) </td><td> Invitrogen </td><td> F8823 </td></tr></tbody></table>

infection of zebrafish embryos with intracellular bacterial pathogens

Zebra balığı (Danio rerio) embriyo giderek-konak ilişkilerinin 1 omurgalı doğuştan gelen bağışıklık sisteminin fonksiyonunu incelemek için bir model olarak kullanılmaktadır. Doğuştan gelen bağışıklık sisteminin önemli hücre tipleri, makrofaj ve nötrofiller, önce adaptif immün yanıtları için gerekli olan lenfositlerin olgunlaşması için embriyogenezisin ilk günlerinde gelişir. Embriyoların sayıda elde kolaylığı, dış gelişme, embriyonik ve larva aşamalarını optik şeffaflık nedeniyle erişilebilirlik, genetik araçları, transgenik muhabiri hatları geniş mutant kaynakları ve koleksiyonları, geniş bir yelpazede tüm zebrabalıkları çok yönlülüğünü eklemek modeli. Salmonella enterica serovar Typhimurium (S. typhimurium) ve Mycobacterium marinum makrofaj hücre içinde bulunabilir ve sık Zebra balığı embriyolarının-konak ilişkilerinin incelemek için kullanılır. Bu iki enfeksiyonu süreçlerbakteriyel patojenler karşılaştırmak ilginç çünkü S. typhimurium enfeksiyonu M. ise, akut ve bir gün içinde ölümcüldür marinum enfeksiyonu kronik ve larva dönemi 2, 3 kadar görüntülenebilir. Embriyo (Şekil 1) bakterilerin mikro-enjeksiyon sitesi enfeksiyon hızla sistemik olacak veya başlangıçta lokalize kalır belirler. Hızlı bir sistemik enfeksiyon ile kurulabilir mikro-enjeksiyon doğrudan posterior kan adada kaudal ven yoluyla kan dolaşımı içine veya Cuvier, gövde damar kalbe bağlayan yolk kesesi üzerinde geniş bir sirkülasyon kanalı Kanal yoluyla bakteri. 1 dpf&#39;e anda, bu aşamada embriyo phagocytically aktif makrofajlar var ama nötrofiller henüz kan adaya enjekte, olgun olmadığı zaman tercih edilir. Embriyolar da fonksiyonel (miyeloperoksidaz üretmeyen) nötrofil, geliştirdik 2-3 dpf&#39;e, az enjeksiyon için Cuvier ve Kanal t olarak tercih edilmektedirdiye enjeksiyon yerinde. Lokal enfeksiyonlar doğru miyeloid hücrelerin yönettiği göç çalışmak için, bakteri kuyruk kas, otik vezikül veya arka beyin ventrikül 4-6 enjekte edilebilir. Buna ek olarak, notokord miyeloid hücrelere normal erişilmez gibi görünen bir yapı, lokal enfeksiyon 7 son derece duyarlı. Yüksek hacimli uygulamalar için kullanışlı bir alternatif gübreleme 8 sonraki ilk saat içinde embriyo sarısı içine bakteri enjekte edilmesidir. Floresan makrofaj veya nötrofil ile floresan bakteri ve transgenik zebrabalıkları çizgileri birleştirerek-konak ilişkilerinin çok-renkli görüntüleme için ideal şartlar oluşturur. Bu video makalede S. ile Zebra balığı embriyolarının damardan ve lokal enfeksiyon için ayrıntılı protokoller açıklayacağız typhimurium veya M. marinum bakteri ve doğuştan gelen bağışıklık sistemi hücreleri ile etkileşim sonraki floresans görüntüleme için.

Watch this Scientific Journal Video about Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens at JoVE.com

Infection of Zebrafish Embryos with Intracellular Bacterial Pathogens

Şeffaf zebrabalıkları embriyolar gibi görselleştirmek için faydalı model bilgisayarlar ve doğuştan gelen bağışıklık hücreleri ve hücre içi bakteriyel patojenler arasında işlevsel çalışma etkileşimleri, kanıtladık<em&gt; Salmonella typhimurium</em&gt; Ve<em&gt; Mycobacterium marinum</em&gt;. Bakteri ve çok-renkli floresans görüntüleme mikro-enjeksiyon zebrafish embriyo enfeksiyonu modellerinin uygulaması ile ilgili önemli tekniklerdir.

Hücre içi bakteriyel patojenler ile Zebra balığı Embryolarının Enfeksiyon

Zebrafish (Danio rerio) embryos are increasingly used as a model for studying the function of the vertebrate innate immune system in host-pathogen ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

'Bioluminescent' Reporter Phage for the Detection of Category A Bacterial Pathogens

Kategori Algılama Bir Bakteriyel Patojenler &#39;Bioluminescent&#39; Muhabir Faj

Yersinia pestis and Bacillus anthracis are Category A bacterial pathogens that are the causative agents of the plague and anthrax, respectively 1. ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Single Cell Measurements of Vacuolar Rupture Caused by Intracellular Pathogens

Vakuolar Kopma Tek Hücre ölçümleri Hücre içi patojenlerin neden

Shigella flexneri are pathogenic bacteria that invade host cells entering into an endocytic vacuole. Subsequently, the rupture of this membrane-enclosed ...

Discovery of New Intracellular Pathogens by Amoebal Coculture and Amoebal Enrichment Approaches

Amoebal kokültürü ve Amoebal Zenginleştirme Yaklaşımlar New hücre içi patojenlerin keşif

Intracellular pathogens such as legionella, mycobacteria and Chlamydia-like organisms are difficult to isolate because they often grow poorly or not at ...

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

Generation and Multi-phenotypic High-content Screening of Coxiella burnetii Transposon Mutants

Üretim ve Çok fenotipik Yüksek içerik Eleme<em&gt; Coxiella burnetii</em&gt; Transposon Mutantlar

Invasion and colonization of host cells by bacterial pathogens depend on the activity of a large number of prokaryotic proteins, defined as virulence ...

Applying an Inducible Expression System to Study Interference of Bacterial Virulence Factors with Intracellular Signaling

Bir uyarılabilir İfade Sistemi uygulamak Hücre içi Sinyali ile Bakteriyel Virulans Faktörler Girişim Eğitim için

The technique presented here allows one to analyze at which step a target protein, or alternatively a small molecule, interacts with the components of a ...

Identification of Rare Bacterial Pathogens by 16S rRNA Gene Sequencing and MALDI-TOF MS

16S rRNA gen Sıralama ve MALDI-TOF MS tarafından Nadir Bakteriyel patojenlerin tanımlanması

There are a number of rare and, therefore, insufficiently described bacterial pathogens which are reported to cause severe infections especially in ...

Isolation of Single Intracellular Bacterial Communities Generated from a Murine Model of Urinary Tract Infection for Downstream Single-cell Analysis

İdrar yolu enfeksiyonu aşağı akım tek hücreli analiz için bir fare modelinden oluşturulan tek hücre içi bakteriyel toplulukların yalıtım

In this article, we outline a procedure used to isolate individual intracellular bacterial communities from a mouse that has been experimentally infected ...

Opsonophagocytic Killing Assay to Assess Immunological Responses Against Bacterial Pathogens

Opsonophagocytic öldürme tahlil bakteriyel patojenlere karşı immünolojik yanıt değerlendirmek için

A key aspect of the immune response to bacterial colonization of the host is phagocytosis. An opsonophagocytic killing assay (OPKA) is an experimental ...

Visualization of Macrophage Lytic Cell Death During Mycobacterial Infection in Zebrafish Embryos via Intravital Microscopy

İntravital Mikroskopi ile Zebrabalığı Embriyolarında Mikobakteriyel Enfeksiyon Sırasında Makrofaj Litik Hücre Ölümünün Görüntülenmesi

Zebrafish is an excellent model organism for studying innate immune cell behavior due to its transparent nature and reliance solely on its innate immune ...

Determination of Chemical Inhibitor Efficiency against Intracellular Toxoplasma Gondii Growth Using a Luciferase-Based Growth Assay

Determination of Chemical Inhibitor Efficiency against Intracellular Toxoplasma Gondii Growth Using a Luciferase-Based Growth Assay

Luciferase Tabanlı Büyüme Testini Kullanarak Hücre İçi Toksoplazma Gondii Büyümesine Karşı Kimyasal Inhibitör Verimliliğin Belirlenmesi

Toxoplasma gondii is a protozoan pathogen that widely affects the human population. The current antibiotics used for treating clinical toxoplasmosis are ...