Name: isolation of soluble and insoluble prp oligomers in the normal human brain
Uploaded: 2012-10-03T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Soluble and Insoluble PrP Oligomers in the Normal Human Brain at JoVE.com

ال الكتاب ممتنون للدماغ والعمود الفقري الإنسان مركز الموارد الموائع (لوس أنجلوس، CA) لتوفير عينات الدماغ العادي. وأيد هذه الدراسة من قبل المعاهد الوطنية للصحة (NIH) R01NS062787، ومؤسسة CJD بالأمان البيولوجي، التحالف، فضلا عن مركز جامعة للشيخوخة والصحة بدعم من مؤسسة ماكجريجور وصندوق الرئيس الكمالية (كيس ويسترن ريزرف) .

1. إعداد جناسة الدماغ والمنظفات للذوبان (S2) وغير القابلة للذوبان، الكسور (P2) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأخذ 100 ملغ المجمدة أنسجة المخ الإنسان وإضافة 100 ميكرولتر العازلة تحلل (10 ملي تريس، 150 مم كلوريد الصوديوم، 0.5٪ Nonidet P-40 (NP-40)، EDTA 0.5٪، ودرجة الحموضة...

<ol>
	<li>Prusiner, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prions.+Proc.">Prions. Proc.</a> Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 13363-13383 (1998).</li><li>Oesch, B., Westaway, D., W&#228;lchli, M., McKinley, M. P., Kent, S. B. H., Aebersold, R., Barry, R. A., Tempst, P., Teplow, D. B., Hood, L. E., Prusiner, S. B., Weissmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cellular+gene+encodes+scrapie+PrP+27-30+protein.">A cellular gene encodes scrapie PrP 27-30 protein.</a> Cell. 40, 735-746 (1985).</li><li>Bolton, D. C., McKinley, M. P., Prusiner, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+protein+that+purifies+with+the+scrapie+prion.">Identification of a protein that purifies with the scrapie prion.</a> Science. 218, 1309-1311 (1982).</li><li>Prusiner, S. B., McKinley, M. P., Bowman, K. A., Bolton, D. C., Bendheim, P. E., Groth, D. F., Glenner, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scrapie+prions+aggregate+to+form+amyloid-like+birefringent+rods.">Scrapie prions aggregate to form amyloid-like birefringent rods.</a> Cell. 35, 349-358 (1983).</li><li>Hope, J., Morton, L. J., Farquhar, C. F., Multhaup, G., Beyreuther, K., Kimberlin, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+major+polypeptide+of+scrapie-associated+fibrils+(SAF)+has+the+same+size,+charge+distribution+and+N-terminal+protein+sequence+as+predicted+for+the+normal+brain+protein+(PrP).">The major polypeptide of scrapie-associated fibrils (SAF) has the same size, charge distribution and N-terminal protein sequence as predicted for the normal brain protein (PrP).</a> EMBO J. 5, 2591-2597 (1986).</li><li>Prusiner, S. B., Groth, D. F., Bolton, D. C., Kent, S. B., Hood, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+and+structural+studies+of+a+major+scrapie+prion+protein.">Purification and structural studies of a major scrapie prion protein.</a> Cell. 38, 127-134 (1984).</li><li>Hall, D., Edskes, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silent+prions+lying+in+wait:+a+two-hit+model+of+prion/amyloid+formation+and+infection.">Silent prions lying in wait: a two-hit model of prion/amyloid formation and infection.</a> J. Mol. Biol. 336, 775-786 (2004).</li><li>Yuan, J., Xiao, X., McGeehan, J., Dong, Z., Cali, I., Fujioka, H., Kong, Q., Kneale, G., Gambetti, P., Zou, W. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insoluble+aggregates+and+protease-resistant+conformers+of+prion+protein+in+uninfected+human+brains.">Insoluble aggregates and protease-resistant conformers of prion protein in uninfected human brains.</a> J. Biol. Chem. 281, 34848-34858 (2006).</li><li>Yuan, J., Dong, Z., Guo, J. P., McGeehan, J., Xiao, X., Wang, J., Cali, I., McGeer, P. L., Cashman, N. R., Bessen, R., Surewicz, W. K., Kneale, G., Petersen, R. B., Gambetti, P., Zou, W. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accessibility+of+a+critical+prion+protein+region+involved+in+strain+recognition+and+its+implications+for+the+early+detection+of+prions.">Accessibility of a critical prion protein region involved in strain recognition and its implications for the early detection of prions.</a> Cell. Mol. Life Sci. 65, 631-643 (2008).</li><li>Zou, W. Q., Zheng, J., Gray, D. M., Gambetti, P., Chen, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibody+to+DNA+detects+scrapie+but+not+normal+prion+protein.">Antibody to DNA detects scrapie but not normal prion protein.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 1380-1385 (2004).</li><li>Gambetti, P., Dong, Z., Yuan, J., Xiao, X., Zheng, M., Alshekhlee, A., Castellani, R., Cohen, M., Barria, M. A., Gonzalez-Romero, D., Belay, E. D., Schonberger, L. B., Marder, K., Harris, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+human+disease+with+abnormal+prion+protein+sensitive+to+protease.">A novel human disease with abnormal prion protein sensitive to protease.</a> Ann. Neurol. 63, 697-708 (2008).</li><li>Zou, W. Q., Puoti, G., Xiao, X., Yuan, J., Qing, L., Cali, I., Shimoji, M., Langeveld, J. P., Castellani, R., Notari, S., Crain, B., Schmidt, R. E., Geschwind, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variably+protease-sensitive+prionopathy:+A+new+sporadic+disease+of+the+prion+protein.">Variably protease-sensitive prionopathy: A new sporadic disease of the prion protein.</a> Ann. Neurol. 68, 162-172 (2010).</li><li>Zou, W. Q., Xiao, X., Yuan, J., Puoti, G., Fujioka, H., Wang, X., Richardson, S., Zhou, X., Zou, R., Li, S., Zhu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amyloid-beta42+interacts+mainly+with+insoluble+prion+protein+in+the+Alzheimer+brain.">Amyloid-beta42 interacts mainly with insoluble prion protein in the Alzheimer brain.</a> J. Biol. Chem. 286, 15095-15105 (2011).</li><li>Zou, W. Q., Colucci, M., Gambetti, P., Chen, S. G., Potter, N. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+prion+proteins.">Characterization of prion proteins.</a> Methods in Molecular Biology-Neurogenetics: Methods and Protocols. , 305-314 (2002).</li><li>Tzaban, S., Friedlander, G., Schonberger, O., Horonchik, L., Yedidia, Y., Shaked, G., Gabizon, R., Taraboulos, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protease-sensitive+scrapie+prion+protein+in+aggregates+of+heterogeneous+sizes.">Protease-sensitive scrapie prion protein in aggregates of heterogeneous sizes.</a> Biochemistry. 41, 12868-12875 (2002).</li></ol>

مزيج من النهج ذكرت هنا غير قابلة للذوبان يعزل باستمرار بي ار بي المجاميع C وقابل للذوبان oligomers بي ار بي C من دماغ الإنسان العادي. تنبيذ فائق في 100،000 x ج لمدة ساعة واحدة هو أسلوب الكلاسيكية التي استخدمت على نطاق واسع لفصل برأسية غير قابلة للذوبان بي ار ب?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> التعليقات (اختياري) </td></tr><tr><td> Phenylmethylsulfonyl فلوريد </td><td> سيغما الدريخ </td><td> P7626 </td><td> 72 مم في بروبانول-2 </td></tr><tr><td> بروتين K </td><td> سيغما الدريخ </td><td> P2308 </td><td> 2 ملغ / مل في H 2 O </td></tr><tr><td> PNGase F </td><td> نيو انغلاند Biolabs </td><td> MWGF200 </td><td></td></tr><tr><td> LE-80K نابذة فائقة السرعة، SW55 الدوار </td><td> بيكمان كولتر </td><td> الجزء رقم 365668، 356860 </td><td></td></tr><tr><td> Superdex 200 HR الخرز </td><td> GE للرعاية الصحية </td><td> 17-1088-01 </td><td></td></tr><tr><td> AKTA FPLC النظام </td><td> GE للرعاية الصحية </td><td> 18-1900-26 </td><td></td></tr><tr><td> علامات الوزن الجزيئي </td><td> سيغما الدريخ </td><td> MWGF200 </td><td> تباينت </td></tr><tr><td> Dynabeads M-280 الخرز المغناطيسي </td><td> إينفيتروجن </td><td> 143-01 </td><td></td></tr><tr><td> 3F4 الأجسام المضادة </td><td> كوفانس </td><td> SIG-39600 </td><td></td></tr><tr><td> 1E4 الأجسام المضادة </td><td> خلية العلوم </td><td> M1840 </td><td></td></tr><tr><td> هلام استعداد 15٪ تريس، حمض الهيدروكلوريك مسبقة الصب المواد الهلامية </td><td> بيو راد </td><td> 345-0020 </td><td></td></tr></tbody></table>

isolation of soluble and insoluble prp oligomers in the normal human brain

الحدث المركزي في التسبب في الأمراض البريونية ينطوي على تحويل المضيف ترميز البروتين بي ار بي الخلوية بريون C المسببة للأمراض في شكل الإسوي في بي ار بي SC 1. بي ار بي C هو المنظفات للذوبان وبروتين حساسة للK (PK)-الهضم، في حين تشكل المنظفات بي ار بي برأسية غير قابلة للذوبان المجاميع ومقاومة جزئيا إلى PK 2-6. ومن المعروف أن تحويل C بي ار بي بي ار بي إلى اتفاقية استكهولم لإشراك الانتقال بتكوين لα β-حلزونية لورقة هياكل البروتين. ومع ذلك، لا تزال في مسار الجسم الحي غير مفهومة. A الذاتية مؤقت بي ار بي برأسية والمتوسطة * بي ار بي أو &quot;بريون الصمت&quot;، لم يتم بعد تحديدها في الدماغ غير مصاب 7. باستخدام مزيج من النهج البيوفيزيائية والكيمياء الحيوية، وحددنا المجاميع غير قابلة للذوبان بي ار بي C (C iPrP المعينة) من أدمغة الثدييات غير مصاب ومثقف الخلايا العصبيةخلايا 8 و 9. هنا، نحن تصف الإجراءات التفصيلية لهذه الأساليب، بما في ذلك في تنبيذ فائق العازلة المنظفات والترسيب السكروز التدرج خطوة، وحجم الإقصاء اللوني، iPrP تخصيب اليورانيوم بحلول البروتين الجيني 5 (g5p) التي تربط خصيصا لأشكال بي ار بي تغيير هيكليا 10، وPK المعاملة. مزيج من هذه الأساليب ليس فقط غير قابلة للذوبان يعزل بي ار بي بي ار بي برأسية والمجاميع C ولكن أيضا للذوبان بي ار بي oligomers C من دماغ الإنسان العادي. منذ بروتوكولات الموصوفة هنا قد استخدمت لعزل كل من بي ار بي برأسية من العقول المصابة وiPrP C من العقول غير مصاب، لأنها توفر لنا فرصة لمقارنة الاختلافات في الميزات الفيزيائية، السمية العصبية، والعدوى بين الأشكال الإسوية اثنين. ومثل هذه الدراسة تحسن كثيرا فهمنا لمسببات الأمراض المعدية والبروتينية. علم وظائف الأعضاء والفيزيولوجيا المرضية للC iPrP غير واضحة في الوقت الحاضر. والجدير بالذكر أن في A-ID حديثاوجدنا entified المرض البريوني البشري ووصف بنسب مختلفة البروتيني حساسة prionopathy، جديد برأسية بي ار بي أن تشارك سلوك متفاعل مناعيا وتجزئة C مع iPrP 11 و 12. وعلاوة على ذلك، ونحن في الآونة الأخيرة أظهرت أن iPrP C هو أهم الأنواع التي تتفاعل مع بروتين اميلويد β في مرض الزهايمر 13. في نفس الدراسة، تم استخدام هذه الأساليب لعزل المجاميع Abeta وoligomers في مرض الزهايمر 13، مما يدل تطبيقها على المجاميع البروتين غير بريون المشاركة في الاضطرابات العصبية الأخرى.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Soluble and Insoluble PrP Oligomers in the Normal Human Brain at JoVE.com

Isolation of Soluble and Insoluble PrP Oligomers in the Normal Human Brain

نوع جديد من بروتين بريون الخلوي (بي ار بي<sup&gt; C</sup&gt;) وقد تم مؤخرا المحددة في العقول البشرية غير مصاب باستخدام الأساليب المذكورة هنا. ويمكن استخدام هذه الأساليب لعزل الأنواع المختلفة بي ار بي، في حين أن بعض من هم من المفيد أيضا في عزل المجاميع الأخرى من البروتين تتجمع العقول البشرية.

عزل Oligomers بي ار بي القابلة للذوبان وغير القابلة للذوبان في دماغ الإنسان العادي

The central event in the pathogenesis of prion diseases involves a conversion of the host-encoded cellular prion protein PrPC into its pathogenic isoform ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester (CFSE)

Identification and Isolation of Slow-Dividing Cells in Human Glioblastoma Using Carboxy Fluorescein Succinimidyl Ester CFSE

تحديد وعزل بطيئة تقسيم الخلايا في الإنسان عن طريق ورم أرومي دبقي كربوكسي فلوريسئين Succinimidyl استر (CFSE)

Tumor heterogeneity represents a fundamental feature supporting tumor robustness and presents a central obstacle to the development of therapeutic ...

The Use of Primary Human Fibroblasts for Monitoring Mitochondrial Phenotypes in the Field of Parkinson's Disease

استخدام الخلايا الليفية الإنسان الأساسية لرصد نمط ظاهري الميتوكوندريا في مجال مرض باركنسون

Parkinson's disease (PD) is the second most  common movement disorder and affects 1% of people over the age of 60 1. Because ageing is  the most important ...

Lesion Explorer: A Video-guided, Standardized Protocol for Accurate and Reliable MRI-derived Volumetrics in Alzheimer's Disease and Normal Elderly

الآفة إكسبلورر: A، بروتوكول موحد موجهة الفيديو لدقة الحجمي وموثوق بها التصوير بالرنين المغناطيسي المستمدة في مرض الزهايمر والمسنين عادي

Obtaining in vivo human brain tissue volumetrics from MRI is often complicated by various technical and biological issues. These challenges are ...

In Vivo Optical Imaging of Brain Tumors and Arthritis Using Fluorescent SapC-DOPS Nanovesicles

In Vivo Optical Imaging of Brain Tumors and Arthritis Using Fluorescent SapC-DOPS Nanovesicles

في فيفو التصوير الضوئي من أورام الدماغ والتهاب المفاصل عن طريق نيون SapC-DOPS Nanovesicles

We describe a multi-angle rotational optical imaging (MAROI) system for in vivo monitoring of physiopathological processes labeled with a fluorescent ...

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

Excitotoxic Stimulation of Brain Microslices as an In vitro Model of Stroke

excitotoxic المواد تحفيز الدماغ باعتبارها Microslices<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج من السكتة الدماغية

Examining molecular mechanisms involved in neuropathological conditions, such as ischemic stroke, can be difficult when using whole animal systems. As ...

Multi-electrode Array Recordings of Human Epileptic Postoperative Cortical Tissue

متعدد القطب تسجيلات صفيف من داء الصرع بعد الجراحة القشرية الأنسجة البشرية

Epilepsy, affecting about 1% of the population, comprises a group of neurological disorders characterized by the periodic occurrence of seizures, which ...

Isolation, Cryopreservation and Culture of Human Amnion Epithelial Cells for Clinical Applications

العزلة، والحفظ بالتبريد والثقافة من الخلايا الظهارية البشرية السلى للتطبيقات السريرية

Human amnion epithelial cells (hAECs) derived from term or pre-term amnion membranes have attracted attention from researchers and clinicians as a ...

Isolation of Human Lymphatic Endothelial Cells by Multi-parameter Fluorescence-activated Cell Sorting

عزل خلايا الإنسان اللمفاوي البطانية التي كتبها متعدد المعلمة تنشيط الإسفار الفرز خلية

Lymphatic system disorders such as primary lymphedema, lymphatic malformations and lymphatic tumors are rare conditions that cause significant morbidity ...

Using Saccadometry with Deep Brain Stimulation to Study Normal and Pathological Brain Function

باستخدام Saccadometry مع ديب تحفيز الدماغ لدراسة العادية والمرضية وظيفة الدماغ

The oculomotor system involves a large number of brain areas including parts of the basal ganglia, and various neurodegenerative diseases including ...

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

الفوسفور 31 الرنين المغناطيسي الطيفي: أداة لقياس<em&gt; في فيفو</em&gt; القدرة الميتوكوندريا الفسفرة التأكسدية في العضلات الهيكلية البشرية

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo ...