Name: in ovo electroporation in embryonic chick retina
Uploaded: 2012-02-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina at JoVE.com

We willen graag aan de heer Maaz Enver bedanken voor het gebruik van zijn HD-camera (Cannon VIXIA HFS100). Dit werk werd mede ondersteund door subsidies van NIH (EY018738), New Jersey Commissie op het ruggenmerg Onderzoek (08 tot 3074-SCR-E-0 en 10 tot 3.091-SCR-E-0), en Busch Biomedical Research Award.

Aangezien sommige delen van het protocol worden uitgevoerd zoals eerder beschreven in andere Jupiter video&#39;s 2 en papers 3 met minor modificatie we zullen niet bespreken die in detail hier. 1. Egg Handling en Naald Voorbereiding <ol><li> Eieren kunnen worden opgeslagen in een wijnkoeler bij ongeveer 13 ° C maximaal 1 week. Als de temperatuur te hoog is, zal embryo&#39;s abnormaal begint te ontwikkelen, terwijl lagere temperatuur veroorzaakt een hoge mortaliteit. ...

<ol>
	<li>Doh, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+retinal+cell+development+in+chick+embryo+by+immunohistochemistry+and+in+ovo+electroporation+techniques.">Analysis of retinal cell development in chick embryo by immunohistochemistry and in ovo electroporation techniques.</a> BMC. Dev. Biol. 10, (2010).</li><li>Blank, M. C., Chizhikov, V., Millen, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Ovo+Electroporations+of+HH+Stage+10+Chicken+Embryos.">In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos.</a> J. Vis. Exp. (9), e408-e408 (2007).</li><li>Nakamura, H., Funahashi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Introduction+of+DNA+into+chick+embryos+by+in+ovo+electroporation.">Introduction of DNA into chick embryos by in ovo electroporation.</a> Methods. 24, 43-48 (2001).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.+1951.">A series of normal stages in the development of the chick embryo. 1951.</a> Dev. Dyn.. 195, 231-272 (1992).</li><li>Hamburger, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+stage+series+of+the+chick+embryo.">The stage series of the chick embryo.</a> Dev. Dyn. 195, 273-275 (1992).</li></ol>

Gerichte retinale injectie en in-ovo elektroporatie in embryonale netvlies aan E4 stadium kan specifiek zijn gericht op het netvlies stamcellen resulteert in de mogelijkheid om alle zes grote netvlies celtypen te visualiseren op het cel-niveau. In ovo elektroporatie op HH10 (~ E1.5) gericht op de optic vesicle kan cellen die ontwikkelen om het oog vormen transfecteren. Echter deze cellen hebben een zeer hoge omzet bij deze tijd en deze methode is niet specifiek voor retinale cellen. Het kan zijn dat de...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> Bevruchte pathogeenvrije (SPF) witte Leghorn kip eieren </td><td> Sunrise Boerderijen (Catskill, NY) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Kip ei incubator </td><td> GQF productie, Savannah, GA </td><td> Model-1550 </td><td> Ingesteld op 60% luchtvochtigheid en 37,5 ° C. </td></tr><tr><td> Glas capillairen </td><td> Wereld precisie-instrument Inc </td><td> TW150F-4 </td><td></td></tr><tr><td> 0,1 ml spuit </td><td> Hamilton Co Reno, Nevada </td><td> Gasdicht 1710 </td><td> Alternatief 1ml injectiespuit kan worden gebruikt als ook </td></tr><tr><td> Masterflex Silicone (peroxide) Tubing </td><td> Cole-Parmer </td><td> HV-96400-13 </td&gt; <td> Knip een klein stukje (1 cm) voor de bevestiging van de glazen naald op de spuit </td></tr><tr><td> Pincet </td><td> Dumont </td><td> AA </td><td></td></tr><tr><td> Micromanipulator </td><td> Wereld precisie-instrument Inc </td><td> M3301-M3 </td><td></td></tr><tr><td> Plasmide DNA </td><td></td><td></td><td> pCAG-GFP werd geleend van Dr Connie Cepko </td></tr><tr><td> Fast Green FCF </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> F7252 </td><td> Verdun het tot 0,025% met PBS </td></tr><tr><td> Pulse generator </td><td> Harvard Apparatus, MA </td><td> BTX ECM 830 </td><td> Blokgolf generator </td></tr><tr><td> Elektroden </td><td> Harvard Apparatus, MA </td><td> BTX-model 514 </td><td> Onze elektroden werden 3-5 mm afstand van elkaar </td></tr><tr><td> Monochroom Digitale Camera </td><td> Zeiss, Duitsland </td><td> Eenxiocam MRM </td><td></td></tr><tr><td> TL-Dissection Microscoop </td><td> Leica Microsystems, Duitsland </td><td> Leica MZ16FA </td><td></td></tr><tr><td> Upright fluorescentiemicroscoop </td><td> Zeiss, Duitsland </td><td> Zeiss Axio Imager A1 </td><td></td></tr></tbody></table>

in ovo electroporation in embryonic chick retina

Kip embryonale netvlies is een uitstekend hulpmiddel om retinale ontwikkeling te bestuderen in hogere gewervelde dieren. Vanwege de grote omvang en externe ontwikkeling, is het relatief zeer makkelijk te manipuleren het kuiken embryonale netvlies met behulp van recombinant-DNA / RNA-technologie. Elektroporatie van DNA / RNA-constructen in het embryonale netvlies hebben een groot voordeel voor genregulatie in het netvlies stam / voorlopercellen tijdens het netvlies ontwikkeling te bestuderen. Verschillende soorten van testen, zoals reporter-gen-test, gen over-expressie, gene knock down (shRNA) enz. kan worden uitgevoerd met behulp van de elektroporatie techniek. Deze video demonstreert gericht retinale injectie en in-ovo elektroporatie in het embryonale kuiken netvlies aan de Hamburger en Hamilton stadium 22-23, dat is ongeveer embryonale dag 4 (E4). Hier laten we een snelle en handig in ovo electroporatie techniek waarbij een plasmide DNA dat green fluorescent protein (GFP) expressie brengt als een marker wordt rechtstreeks geleverd in dechick embryonale subretinale ruimte en gevolgd door elektrische pulsen aan DNA-opname te vergemakkelijken door het netvlies stam / voorlopercellen. De nieuwe methode van retinale injectie en elektroporatie op E4 laat de visualisatie van alle retinale typen cellen, inclusief de late-geboren neuronen 1, die moeilijk is geweest met de conventionele methode van injectie en elektroporatie op E1.5 2.

Watch this Scientific Journal Video about In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina at JoVE.com

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

Het algemene doel van deze video is te laten zien hoe je doelgericht retinale injectie uit te voeren en<em&gt; In ovo</em&gt; Elektroporatie van DNA / RNA-constructen in het kuiken embryonale netvlies aan de Hamburger en Hamilton stadium 22-23, dat is ongeveer embryonale dag 4 (E4). Deze techniek is zeer nuttig om genexpressie, genregulatie, en morfologische veranderingen in de ontwikkeling van Chick netvlies te bestuderen.

In Ovo Elektroporatie in Embryonale Chick Retina

Chicken embryonic retina is an excellent tool to study retinal development in higher vertebrates. Because of large size and external development, it is ...

Research

JoVE Journal

Biology

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

In Ovo Electroporations van HH Stage 10 kippenembryo&#39;s

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick

Methode voor Whole Mount antilichaam kleuring in Chick

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Kuiken Ex ovo Cultuur en Ex ovo CAM test: Hoe het echt werkt

Chicken eggs in the early phase of breeding are between in vitro and in vivo systems and provide a vascular test environment not only to study ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

De voorbereiding van embryo&#39;s voor Elektronenmicroscopie van de Drosophila Embryonale hart buis

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Primary Culture and Plasmid Electroporation of the Murine Organ of Corti. 

Primaire Cultuur en Plasmide Elektroporatie van de muizen orgaan van Corti.

In all mammals, the sensory epithelium for audition is located along the spiraling organ of Corti that resides within the conch shaped cochlea of the ...

Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation

Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation

Ontcijfering Axonale Pathways van genetisch bepaalde groepen van neuronen in de Chick Neural Tube Door gebruik te maken In ovo Elektroporatie

Employment of enhancer elements to drive expression of reporter genes in neurons is a widely used paradigm for tracking axonal projection. For tracking ...

Video Bioinformatics Analysis of Human Embryonic Stem Cell Colony Growth

Video Bioinformatica Analyse van menselijke embryonale stamcellen Colony Growth

Because video data are complex and are comprised of many images, mining information from video material is difficult to do without the aid of computer ...

Single Cell Transfection in Chick Embryos

Single Cell Transfectie in kippenembryo&#39;s

A central theme in developmental biology is the diversification of lineages and the elucidation of underlying molecular mechanisms. This entails a ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Patch Clamp en perfusie technieken voor het bestuderen van Ion Channels Uitgedrukt in Xenopus Eicellen

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo Elektroporatie van Morpholinos in de Adult zebravis Retina

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...