Name: in ovo electroporation in embryonic chick retina
Uploaded: 2012-02-05T13:00:00
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Nous tenons à remercier M. Enver Maaz pour l&#39;utilisation de son appareil photo HD (Cannon VIXIA HFS100). Ce travail a été soutenu en partie par des subventions des NIH (EY018738), New Jersey Commission sur la recherche sur la moelle épinière (08-3074-RCS-E-0 et 10-3091-RCS-E-0), et le Prix Busch recherche biomédicale.

Depuis quelques parties du protocole sont réalisées comme décrit précédemment dans d&#39;autres vidéos et des documents de Jove 2 3 avec des modifications mineures, nous ne discuterons pas ceux en détail ici. 1. La manipulation des œufs et de Préparation à aiguilles <ol><li> Les œufs peuvent être stockés dans un refroidisseur de vin à environ 13 ° C pendant 1 semaine. Si la température est trop élevée, les embryons commence à se développer anormalement, tandi...

<ol>
	<li>Doh, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+retinal+cell+development+in+chick+embryo+by+immunohistochemistry+and+in+ovo+electroporation+techniques.">Analysis of retinal cell development in chick embryo by immunohistochemistry and in ovo electroporation techniques.</a> BMC. Dev. Biol. 10, (2010).</li><li>Blank, M. C., Chizhikov, V., Millen, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Ovo+Electroporations+of+HH+Stage+10+Chicken+Embryos.">In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos.</a> J. Vis. Exp. (9), e408-e408 (2007).</li><li>Nakamura, H., Funahashi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Introduction+of+DNA+into+chick+embryos+by+in+ovo+electroporation.">Introduction of DNA into chick embryos by in ovo electroporation.</a> Methods. 24, 43-48 (2001).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.+1951.">A series of normal stages in the development of the chick embryo. 1951.</a> Dev. Dyn.. 195, 231-272 (1992).</li><li>Hamburger, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+stage+series+of+the+chick+embryo.">The stage series of the chick embryo.</a> Dev. Dyn. 195, 273-275 (1992).</li></ol>

Ciblée de la rétine et d&#39;injection in ovo dans électroporation dans la rétine embryonnaire au stade E4 peut cibler spécifiquement les cellules progénitrices la rétine dues à la capacité de visualiser tous les six principaux types de cellules rétiniennes au niveau de la cellule unique. En électroporation in ovo à HH10 (~ E1.5) ciblant le vésicule optique est capable de transfecter des cellules qui se développent pour former l&#39;œil. Cependant, ces cellules ont un chiffre d&...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires </td></tr><tr><td> Fécondés exempts d&#39;agents pathogènes (SPF) des œufs blancs de poulet Leghorn </td><td> Sunrise Farms (Catskill, État de New York) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Oeuf de poule couveuse </td><td> GQF de fabrication, Savannah, Géorgie </td><td> Modèle-1550 </td><td> Régler à l&#39;humidité de 60% et de 37,5 ° C. </td></tr><tr><td> Tubes capillaires en verre pour </td><td> Mondiale de précision Instrument Inc </td><td> TW150F-4 </td><td></td></tr><tr><td> 0,1 ml seringue </td><td> Hamilton Co. Reno, Nevada </td><td> Étanche au gaz 1710 </td><td> Seringue En variante 1ml peut être utilisé aussi bien </td></tr><tr><td> Masterflex silicone (peroxyde) Tube </td><td> Cole-Parmer </td><td> HV-96400-13 </td&gt; <td> Coupez un petit morceau (1 cm) pour attacher l&#39;aiguille de verre à la seringue </td></tr><tr><td> Pince à épiler </td><td> Dumont </td><td> AA </td><td></td></tr><tr><td> Micromanipulateur </td><td> Mondiale de précision Instrument Inc </td><td> M3301-M3 </td><td></td></tr><tr><td> L&#39;ADN plasmidique </td><td></td><td></td><td> pCAG-GFP a été emprunté par le Dr Connie Cepko </td></tr><tr><td> Fast Green FCF </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> F7252 </td><td> Diluez à 0,025% avec du PBS </td></tr><tr><td> Le générateur d&#39;impulsions </td><td> Harvard Apparatus, MA </td><td> BTX ECM 830 </td><td> Générateur d&#39;ondes carrées </td></tr><tr><td> Électrodes </td><td> Harvard Apparatus, MA </td><td> Modèle BTX 514 </td><td> Nos électrodes sont espacées de 3-5 mm en dehors </td></tr><tr><td> Appareil photo numérique monochrome </td><td> Zeiss, en Allemagne </td><td> Unexiocam MRM </td><td></td></tr><tr><td> Microscope à dissection fluorescent </td><td> Leica Microsystems, Allemagne </td><td> Leica MZ16FA </td><td></td></tr><tr><td> Upright Microscope à fluorescence </td><td> Zeiss, en Allemagne </td><td> Zeiss Axio Imager A1 </td><td></td></tr></tbody></table>

in ovo electroporation in embryonic chick retina

Rétine de poulet embryonnaire est un excellent outil pour étudier le développement de la rétine chez les vertébrés supérieurs. Parce que de grande taille et de développement externe, il est relativement très facile de manipuler la rétine de poulet embryonnaire en utilisant l&#39;ADN recombinant / technologie de l&#39;ARN. L&#39;électroporation de l&#39;ADN / ARN des constructions dans la rétine embryonnaire ont un grand avantage pour étudier la régulation des gènes dans la rétine cellules souches / progénitrices au cours du développement de la rétine. Différents types de tests tels que dosage du gène rapporteur, gène sur-expression, le gène abattre (shRNA), etc peut être réalisée en utilisant la technique d&#39;électroporation. Cette vidéo montre ciblé d&#39;injection de la rétine et dans électroporation in ovo dans la rétine de poulet embryonnaire au stade de Hamburger et Hamilton 22-23, ce qui représente environ jour embryonnaire 4 (E4). Ici, nous montrons une réponse rapide et pratique dans lequel technique d&#39;électroporation in ovo un ADN plasmidique qui exprime la protéine fluorescente verte (GFP) comme un marqueur est livré directement dans lapoussin embryonnaire espace sous-rétinien et suivie par des impulsions électriques pour faciliter l&#39;absorption de l&#39;ADN par la rétine cellules souches / progénitrices. La nouvelle méthode d&#39;injection de la rétine et l&#39;électroporation à E4 permet la visualisation de tous les types de cellules rétiniennes, y compris la fin de neurones d&#39;origine 1, qui a été difficile avec la méthode conventionnelle de l&#39;injection et l&#39;électroporation à E1.5 2.

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In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

L&#39;objectif global de cette vidéo est de montrer comment effectuer l&#39;injection ciblée de la rétine et<em&gt; In ovo</emÉlectroporation&gt; de l&#39;ADN / ARN des constructions dans la rétine de poulet embryonnaire au Hamburger et le stade de Hamilton 22-23, ce qui représente environ jour embryonnaire 4 (E4). Cette technique est très utile pour étudier l&#39;expression des gènes, la régulation des gènes, et les changements morphologiques dans le développement de la rétine de poulet.

En électroporation Ovo dans la rétine de poussin embryonnaire

Chicken embryonic retina is an excellent tool to study retinal development in higher vertebrates. Because of large size and external development, it is ...

Research

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Biology

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

En électroporations Ovo d&#39;embryons au stade de poulet 10 HH

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

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