Name: in ovo electroporation in embryonic chick retina
Uploaded: 2012-02-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina at JoVE.com

ברצוננו להודות למר Maaz אנוור לשימוש של המצלמה שלו HD (קנון VIXIA HFS100). עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי תרומות של NIH (EY018738), ניו ג&#39;רזי ועדת המחקר של חוט השדרה (08-3074-SCR-E-0 ו 10-3091-SCR-E-0), ובוש פרס Biomedical Research.

מאז חלקים מסוימים של פרוטוקול מתבצעות כפי שתואר קודם לכן עם שינוי מזערי קטעי וידאו אחרים יופיטר 2 וניירות 3 לא נדון אותם בפירוט כאן. 1. ביצה טיפול והכנה מחט <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביצים ניתן לא...

<ol>
	<li>Doh, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+retinal+cell+development+in+chick+embryo+by+immunohistochemistry+and+in+ovo+electroporation+techniques.">Analysis of retinal cell development in chick embryo by immunohistochemistry and in ovo electroporation techniques.</a> BMC. Dev. Biol. 10, (2010).</li><li>Blank, M. C., Chizhikov, V., Millen, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Ovo+Electroporations+of+HH+Stage+10+Chicken+Embryos.">In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos.</a> J. Vis. Exp. (9), e408-e408 (2007).</li><li>Nakamura, H., Funahashi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Introduction+of+DNA+into+chick+embryos+by+in+ovo+electroporation.">Introduction of DNA into chick embryos by in ovo electroporation.</a> Methods. 24, 43-48 (2001).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.+1951.">A series of normal stages in the development of the chick embryo. 1951.</a> Dev. Dyn.. 195, 231-272 (1992).</li><li>Hamburger, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+stage+series+of+the+chick+embryo.">The stage series of the chick embryo.</a> Dev. Dyn. 195, 273-275 (1992).</li></ol>

ממוקד הזרקת ברשתית וב electroporation לג&#39;ימי ברשתית עוברית בשלב E4 יכול ממוקדת ובתאים הרשתית וכתוצאה מכך היכולת לחזות את כל ששת סוגי התאים העיקריים רשתית ברמת תא בודד. ב electroporation לג&#39;ימי ב HH10 (~ E1.5) מיקוד שלפוחית ​​הראיה הוא מסוגל transfect תאים המתפתחים כדי ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> מופרות הפתוגן חינם (SPF) לבנים ליוורנו ביצי תרנגולת </td><td> זריחה (חוות קטסקיל, ניו יורק) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> עוף ביצה חממה </td><td> GQF ייצור, סוואנה, GA </td><td> מודל 1550 </td><td> הגדר לחות 60% ו 37.5 ° C. </td></tr><tr><td> צינורות זכוכית נימי </td><td> העולם Precision Instrument בע&quot;מ </td><td> TW150F-4 </td><td></td></tr><tr><td> 0.1 מ&quot;ל במזרק </td><td> המילטון ושות&#39; רינו, נבאדה </td><td> Gastight 1710 </td><td> מזרק 1ml לחלופין ניתן להשתמש גם </td></tr><tr><td> Masterflex סיליקון (מי חמצן) Tubing </td><td> קולמן בן הזוג </td><td> HV-96400-13 </td&gt; <td> חותכים חתיכה קטנה (1 ס&quot;מ) לחיבור מחט זכוכית המזרק </td></tr><tr><td> מלקטת </td><td> דומון </td><td> א.א. </td><td></td></tr><tr><td> Micromanipulator </td><td> העולם Precision Instrument בע&quot;מ </td><td> M3301-M3 </td><td></td></tr><tr><td> פלסמיד דנ&quot;א </td><td></td><td></td><td> pCAG-GFP הושאל ד&quot;ר קוני Cepko </td></tr><tr><td> מהיר גרין FCF </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> F7252 </td><td> לדלל אותו 0.025% עם PBS </td></tr><tr><td> דופק גנרטור </td><td> הרווארד Apparatus, MA </td><td> BTX ECM 830 </td><td> גל מרובע הגנרטור </td></tr><tr><td> אלקטרודות </td><td> הרווארד Apparatus, MA </td><td> BTX דגם 514 </td><td> האלקטרודות שלנו לא היו קצובות, 3-5 מ&quot;מ זה מזה </td></tr><tr><td> מצלמה דיגיטלית מונוכרום </td><td> Zeiss, גרמניה </td><td>xiocam MRM </td><td></td></tr><tr><td> Dissection מיקרוסקופ פלואורסצנטי </td><td> Leica Microsystems, גרמניה </td><td> לייקה MZ16FA </td><td></td></tr><tr><td> מיקרוסקופ פלואורסצנטי זקוף </td><td> Zeiss, גרמניה </td><td> Zeiss Axio Imager A1 </td><td></td></tr></tbody></table>

in ovo electroporation in embryonic chick retina

הרשתית עוף העוברית היא כלי מצוין ללמוד פיתוח רשתית בבעלי חוליות גבוהות יותר. בגלל גודל גדול ופיתוח חיצוני, זה יחסית קל מאוד לתפעל את הרשתית חומוס עובריים באמצעות ה-DNA רקומביננטי / טכנולוגיית RNA. Electroporation של DNA / RNA בונה לתוך הרשתית עובריים יש יתרון גדול ללמוד ויסות הגנים בגזע / אבי תאים ברשתית במהלך התפתחות הרשתית. סוג אחר של מבחני כגון assay כתב הגן, הגן על הביטוי, הגן להפיל (shRNA) וכו &#39;ניתן לבצע באמצעות טכניקה electroporation. סרט הווידאו הזה מדגים הזרקת רשתית ממוקד ב electroporation לג&#39;ימי לתוך הרשתית חומוס העוברית על המבורגר והמילטון בשלב 22-23, שזה בערך יום עובריים 4 (E4). כאן אנו מראים מהירה ונוחה בטכניקה electroporation לג&#39;ימי לפיה DNA פלסמיד המבטא חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) כסמן מועבר ישירותחומוס עובריים שטח subretinal ואחריו פולסים חשמליים כדי להקל על קליטת ה-DNA על ידי גזע / אבי תאים ברשתית. שיטה חדשה של הזרקת electroporation רשתית ב E4 מאפשר הדמיה של כל סוגי תאים ברשתית, כולל המנוח, יליד נוירונים 1, אשר היה קשה עם השיטה המקובלת של הזרקת electroporation על E1.5 2.

Watch this Scientific Journal Video about In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina at JoVE.com

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

המטרה הכללית של סרט זה היא להראות כיצד לבצע הזרקת רשתית ממוקד<em&gt; ב לג&#39;ימי</em&gt; Electroporation של DNA / RNA בונה לתוך הרשתית חומוס העוברית על המבורגר ושלב המילטון 22-23, שזה בערך יום עובריים 4 (E4). טכניקה זו שימושית מאוד ללמוד ביטוי גנים, ויסות הגנים, ושינוי מורפולוגי בפיתוח הרשתית חומוס.

ב electroporation לג&#39;ימי ברשתית צ&#39;יק עובריים

Chicken embryonic retina is an excellent tool to study retinal development in higher vertebrates. Because of large size and external development, it is ...

Research

JoVE Journal

Biology

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

ב Electroporations אובו של HH 10 עוברים שלב עוף

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick

שיטת מכתים נוגדן שלם הר ב צ&#39;יק

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

אפרוח אובו לשעבר תרבות אובו לשעבר CAM Assay: איך זה באמת עובד

Chicken eggs in the early phase of breeding are between in vitro and in vivo systems and provide a vascular test environment not only to study ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

הכנת עוברים אלקטרונים מיקרוסקופית של תסיסנית לב עוברי צינור

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Primary Culture and Plasmid Electroporation of the Murine Organ of Corti. 

תרבות ראשיים electroporation פלסמיד של האיבר Murine של קורטי.

In all mammals, the sensory epithelium for audition is located along the spiraling organ of Corti that resides within the conch shaped cochlea of the ...

Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation

Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation

פענוח מסלולים axonal של קבוצות מוגדרות גנטית של נוירונים התחתית צ&#39;יק עצבית ניצול ב אובו Electroporation

Employment of enhancer elements to drive expression of reporter genes in neurons is a widely used paradigm for tracking axonal projection. For tracking ...

Video Bioinformatics Analysis of Human Embryonic Stem Cell Colony Growth

וידאו ביואינפורמטיקה ניתוח גדילה אנושי בתאי גזע עובריים קולוני

Because video data are complex and are comprised of many images, mining information from video material is difficult to do without the aid of computer ...

Single Cell Transfection in Chick Embryos

תא יחיד transfection בעוברים צ&#39;יק

A central theme in developmental biology is the diversification of lineages and the elucidation of underlying molecular mechanisms. This entails a ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

הצמד תיקון וטכניקות זלוף עבור לימוד תעלות יונים מתבטא Xenopus ביציות

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

ב electroporation vivo של Morpholinos לתוך הרשתית דג הזברה למבוגרים

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...