Name: in ovo electroporation in embryonic chick retina
Uploaded: 2012-02-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina at JoVE.com

Мы хотели бы поблагодарить г-на Маац Энвер для использования его камера HD (Cannon VIXIA HFS100). Эта работа была частично поддержана грантами NIH (EY018738), Нью-Джерси комиссии по исследованию спинного мозга (08-3074-SCR-E-0 и 10-3091-SCR-E-0), а Буш биомедицинских исследований Award.

Так как некоторые части протокола осуществляется, как описано ранее в других Юпитер видео 2 и статьи 3, с незначительными изменениями мы не будем обсуждать те подробно. 1. Обработка яиц и иглы подготовка <ol><li> Яйца можно хранить в винный холодильник примерно н?...

<ol>
	<li>Doh, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+retinal+cell+development+in+chick+embryo+by+immunohistochemistry+and+in+ovo+electroporation+techniques.">Analysis of retinal cell development in chick embryo by immunohistochemistry and in ovo electroporation techniques.</a> BMC. Dev. Biol. 10, (2010).</li><li>Blank, M. C., Chizhikov, V., Millen, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Ovo+Electroporations+of+HH+Stage+10+Chicken+Embryos.">In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos.</a> J. Vis. Exp. (9), e408-e408 (2007).</li><li>Nakamura, H., Funahashi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Introduction+of+DNA+into+chick+embryos+by+in+ovo+electroporation.">Introduction of DNA into chick embryos by in ovo electroporation.</a> Methods. 24, 43-48 (2001).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.+1951.">A series of normal stages in the development of the chick embryo. 1951.</a> Dev. Dyn.. 195, 231-272 (1992).</li><li>Hamburger, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+stage+series+of+the+chick+embryo.">The stage series of the chick embryo.</a> Dev. Dyn. 195, 273-275 (1992).</li></ol>

Целевые сетчатки инъекции и электропорации ово в эмбриональные сетчатки на стадии E4 может конкретно сетчатки клеток-предшественников в результате чего способность визуализировать все шесть основных типов клеток сетчатки на одном уровне клетки. В ово электропорации в H...

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Компания </td><td> Номер по каталогу </td><td> Комментарии </td></tr><tr><td> Оплодотворенные патогенов (SPF) белых яиц куриных леггорн </td><td> Восход хозяйств (Катскилл, Нью-Йорк) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Куриное яйцо инкубатор </td><td> GQF производства, Саванна, штат Джорджия </td><td> Модель-1550 </td><td> Установить влажности 60% и 37,5 ° C. </td></tr><tr><td> Стеклянные капиллярные трубки </td><td> Всемирный прецизионного приборостроения Инк </td><td> TW150F-4 </td><td></td></tr><tr><td> 0,1 мл шприц </td><td> Компания Hamilton Рино, штат Невада </td><td> Газонепроницаемый 1710 </td><td> Кроме того 1 мл шприц можно использовать и </td></tr><tr><td> Masterflex силикон (пероксид) труб </td><td> Коул-Parmer </td><td> HV-96400-13 </td&gt; <td> Отрежьте небольшой кусочек (1 см) для крепления стеклянных иглу шприца </td></tr><tr><td> Пинцет </td><td> Дюмон </td><td> А.А. </td><td></td></tr><tr><td> Микроманипулятор </td><td> Всемирный прецизионного приборостроения Инк </td><td> M3301-M3 </td><td></td></tr><tr><td> ДНК плазмиды </td><td></td><td></td><td> pCAG-GFP была заимствована у доктора Кони Cepko </td></tr><tr><td> Быстрый зеленый FCF </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> F7252 </td><td> Разбавить его до 0,025% с PBS </td></tr><tr><td> Генератор импульсов </td><td> Гарвардский аппарата, MA </td><td> BTX ECM 830 </td><td> Площадь генератор волн </td></tr><tr><td> Электроды </td><td> Гарвардский аппарата, MA </td><td> BTX модель 514 </td><td> Наши электроды находились на расстоянии 3-5 мм друг от друга </td></tr><tr><td> Монохромный цифровой камеры </td><td> Zeiss, Германия </td><td>xiocam MRM </td><td></td></tr><tr><td> Флуоресцентного микроскопа Dissection </td><td> Leica Microsystems, Германия </td><td> Leica MZ16FA </td><td></td></tr><tr><td> Вертикальный флуоресцентного микроскопа </td><td> Zeiss, Германия </td><td> Zeiss Axio Imager A1 </td><td></td></tr></tbody></table>

in ovo electroporation in embryonic chick retina

Куриные эмбриональных сетчатки является отличным инструментом для изучения развития сетчатки у высших позвоночных. Из-за больших размеров и внешнего развития, это сравнительно легко манипулировать куриных эмбриональных сетчатки с использованием рекомбинантной ДНК / РНК технологии. Электропорации ДНК / РНК конструкций в эмбриональной сетчатки имеют большое преимущество для изучения регуляции генов в сетчатку стволовых / прогениторных клеток в процессе развития сетчатки. Различные типы тестов, такие как ген-репортер анализ, ген за выражение, ген сбить (ShRNA) и т.д. можно выполнить с помощью электропорации техники. Это видео демонстрирует целевой сетчатки инъекции и ово электропорации в эмбриональной сетчатки куриного на гамбургер и Гамильтон стадии 22-23, что составляет около 4-й день эмбрионального (Е4). Здесь мы показываем, быстрый и удобный в ово техника электропорации которой ДНК плазмиды, что выражает зеленый флуоресцентный белок (GFP) в качестве маркера доставляется вкуриных эмбриональных субретинальной пространство и затем электрические импульсы, чтобы облегчить поглощение ДНК сетчатки стволовых / прогениторных клеток. Новый метод сетчатки инъекции и электропорации на E4 обеспечивает визуализацию всех типов клеток сетчатки, в том числе позднего происхождения нейроны 1, который было трудно с обычным методом инъекции и электропорации на E1.5 2.

Watch this Scientific Journal Video about In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina at JoVE.com

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

Основная цель этого видео, чтобы показать, как выполнять целевые сетчатки впрыска и<em&gt; В ово</em&gt; Электропорации ДНК / РНК конструкций в куриных эмбриональных сетчатки на гамбургер и Гамильтон стадии 22-23, что составляет около 4-й день эмбрионального (Е4). Эта техника очень полезна для изучения экспрессии генов, регуляции генов и морфологические изменения в развивающихся куриных сетчатки.

В Ovo Электропорация в эмбриональной сетчатки Chick

Chicken embryonic retina is an excellent tool to study retinal development in higher vertebrates. Because of large size and external development, it is ...

Research

JoVE Journal

Biology

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

В Ovo Electroporations Его Святейшества Стадия 10 эмбрионов куриного

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick

Метод полного окрашивания антител горе в Чик

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Цыпленок Ех ово Культура и Ех ово CAM Пробирной: как это действительно работает

Chicken eggs in the early phase of breeding are between in vitro and in vivo systems and provide a vascular test environment not only to study ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Подготовка эмбрионов для электронной микроскопии Drosophila Эмбриональные трубки сердца

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Primary Culture and Plasmid Electroporation of the Murine Organ of Corti. 

Первичные культуры и плазмиды электропорации мышей органа Корти.

In all mammals, the sensory epithelium for audition is located along the spiraling organ of Corti that resides within the conch shaped cochlea of the ...

Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation

Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation

Расшифровка аксонального Пути генетически определенные группы нейронов в Чик нервной трубки Используя В ово Электропорация

Employment of enhancer elements to drive expression of reporter genes in neurons is a widely used paradigm for tracking axonal projection. For tracking ...

Video Bioinformatics Analysis of Human Embryonic Stem Cell Colony Growth

Видео биоинформатики Анализ человеческих эмбриональных роста клеток колонии стволовых

Because video data are complex and are comprised of many images, mining information from video material is difficult to do without the aid of computer ...

Single Cell Transfection in Chick Embryos

Одноместный Трансфекция сотовый на куриных эмбрионах

A central theme in developmental biology is the diversification of lineages and the elucidation of underlying molecular mechanisms. This entails a ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Зажим Patch и перфузии Методы изучения ионных каналов, выраженные в Xenopus Ооцитов

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

В естественных условиях электропорации Morpholinos в Retina взрослых данио рерио

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...