Name: in ovo electroporation in embryonic chick retina
Uploaded: 2012-02-05T13:00:00
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Nos gustaría dar las gracias al Sr. Enver Maaz para el uso de su cámara de alta definición (Cannon VIXIA HFS100). Este trabajo fue apoyado en parte por subvenciones de NIH (EY018738), Nueva Jersey Comisión de Investigación de la Médula Espinal (08-3074-SCR-E-0 y 10-3091-SCR-0-E), y Busch Premio de Investigación Biomédica.

Dado que algunas partes del protocolo se realizó tal como se ha descrito previamente en otros vídeos JOVE 2 y 3 papeles con modificación menor no vamos a discutir aquellos en detalle aquí. 1. Manejo de los huevos y preparación de la aguja <ol><li> Los huevos pueden ser almacenados en un enfriador de vino menos aproximadamente 13 ° C hasta por 1 semana. Si la temperatura es demasiado alta, los embriones comienzan a desarrollarse anormalmente, mientras que una tem...

<ol>
	<li>Doh, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+retinal+cell+development+in+chick+embryo+by+immunohistochemistry+and+in+ovo+electroporation+techniques.">Analysis of retinal cell development in chick embryo by immunohistochemistry and in ovo electroporation techniques.</a> BMC. Dev. Biol. 10, (2010).</li><li>Blank, M. C., Chizhikov, V., Millen, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Ovo+Electroporations+of+HH+Stage+10+Chicken+Embryos.">In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos.</a> J. Vis. Exp. (9), e408-e408 (2007).</li><li>Nakamura, H., Funahashi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Introduction+of+DNA+into+chick+embryos+by+in+ovo+electroporation.">Introduction of DNA into chick embryos by in ovo electroporation.</a> Methods. 24, 43-48 (2001).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.+1951.">A series of normal stages in the development of the chick embryo. 1951.</a> Dev. Dyn.. 195, 231-272 (1992).</li><li>Hamburger, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+stage+series+of+the+chick+embryo.">The stage series of the chick embryo.</a> Dev. Dyn. 195, 273-275 (1992).</li></ol>

Dirigida por inyección en la retina y la electroporación in ovo en la retina de embrión en la etapa E4 pueden dirigirse específicamente a las células retinianas progenitoras derivadas de la capacidad de visualizar todos los seis tipos principales de células de retina en el nivel de células individuales. En la electroporación in ovo en HH10 (~ E1.5) centradas en la vesícula óptica es capaz de transfectar células que se desarrollan para formar el ojo. Sin embargo, estas célu...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre del reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios </td></tr><tr><td> Fertilizados libres de patógenos (SPF) White Leghorn huevos de gallina </td><td> Granjas de Sunrise (Catskill, Nueva York) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Incubadora de huevo de gallina </td><td> MAC es la fabricación, Savannah, GA </td><td> Modelo-1550 </td><td> Se establece en 60% de humedad y 37.5 ° C. </td></tr><tr><td> Vidrio capilares tubos </td><td> World Precision Instrument Inc. </td><td> TW150F-4 </td><td></td></tr><tr><td> 0,1 ml jeringa </td><td> Hamilton Co. Reno, Nevada </td><td> Estanca entre 1710 </td><td> Alternativamente jeringa 1ml puede ser utilizado como así </td></tr><tr><td> Masterflex de silicona (peróxido) Tubería </td><td> Cole-Parmer </td><td> HV-96400-13 </td&gt; <td> Corte un pedazo pequeño (1 cm) para fijar la aguja de cristal a la jeringa </td></tr><tr><td> Pinzas </td><td> Dumont </td><td> AA </td><td></td></tr><tr><td> Micromanipulador </td><td> World Precision Instrument Inc. </td><td> M3301-M3 </td><td></td></tr><tr><td> El ADN del plásmido </td><td></td><td></td><td> pCAG-GFP fue tomado de la Dra. Connie Cepko </td></tr><tr><td> Fast Green FCF </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> F7252 </td><td> Diluir a 0,025% con PBS </td></tr><tr><td> Generador de impulsos </td><td> Aparato de Harvard, MA </td><td> BTX ECM 830 </td><td> Generador de onda cuadrada </td></tr><tr><td> Electrodos </td><td> Aparato de Harvard, MA </td><td> BTX Modelo 514 </td><td> Nuestros electrodos estaban separados 3-5 mm de distancia </td></tr><tr><td> Cámara digital blanco y negro </td><td> Zeiss, Alemania </td><td> Axiocam MRM </td><td></td></tr><tr><td> Microscopio de disección fluorescente </td><td> Leica Microsystems, Alemania </td><td> Leica MZ16FA </td><td></td></tr><tr><td> Microscopio de fluorescencia vertical </td><td> Zeiss, Alemania </td><td> Zeiss Axio Imager A1 </td><td></td></tr></tbody></table>

in ovo electroporation in embryonic chick retina

La retina embrionaria de pollo es una excelente herramienta para estudiar el desarrollo de la retina en los vertebrados superiores. Debido al enorme tamaño y desarrollo externo, es comparativamente muy fácil de manipular la retina de embriones de pollo con ADN recombinante / tecnología de ARN. La electroporación de ADN / ARN construcciones dentro de la retina embrionaria tienen una gran ventaja para estudiar la regulación de genes en la retina células madre / progenitoras durante el desarrollo de la retina. Diferentes tipos de ensayos tales como la prueba del gen, la sobre-expresión del gen, el gen tumbar (shRNA), etc se puede realizar utilizando la técnica de electroporación. Este video muestra la inyección dirigida la retina y en la electroporación in ovo en la retina de embriones de pollo en el Hamburger y Hamilton etapa de 22-23, que es aproximadamente el día embrionario 4 (E4). Aquí nos muestran un rápido y conveniente en la técnica de electroporación in ovo por el cual un plásmido de ADN que expresa la proteína verde fluorescente (GFP) como marcador se entregarán directamente en elde embriones de pollo subretiniano espacio y seguido por pulsos eléctricos para facilitar la absorción de ADN por la retina células madre / progenitoras. El nuevo método de inyección de retina y la electroporación en E4 permite la visualización de todos los tipos de células retinales, incluyendo la neuronas tarde-nacido en 1, que ha sido difícil con el método convencional de inyección y la electroporación en E1.5 2.

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In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

El objetivo general de este video es mostrar cómo llevar a cabo la inyección específica de retina y<em&gt; In ovo</em&gt; Electroporación de ADN / ARN construcciones en la retina de embriones de pollo en el Hamburger y la etapa de Hamilton 22-23, que es aproximadamente el día embrionario 4 (E4). Esta técnica es muy útil para estudiar la expresión génica, la regulación de genes, y el cambio morfológico en el desarrollo de retina de pollo.

En electroporación in ovo en la retina de embriones de pollo

Chicken embryonic retina is an excellent tool to study retinal development in higher vertebrates. Because of large size and external development, it is ...

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Biology

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

En Electroporations Ovo de embriones de pollo HH Etapa 10

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

Investigación

Biología

Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick

Método para la tinción de anticuerpos enteros en el monte del polluelo

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

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Pollo Ex ovo Cultura y Ex ovo CAM Ensayo: cómo funciona realmente

Chicken eggs in the early phase of breeding are between in vitro and in vivo systems and provide a vascular test environment not only to study ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparación de embriones para Microscopía Electrónica de la Drosophila Tubo cardíaco embrionario

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Primary Culture and Plasmid Electroporation of the Murine Organ of Corti. 

Cultura primaria y electroporación plásmido del órgano de Corti murino.

In all mammals, the sensory epithelium for audition is located along the spiraling organ of Corti that resides within the conch shaped cochlea of the ...

Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation

Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation

Descifrar Caminos axonal de los grupos definidos genéticamente las neuronas en el tubo neural del polluelo Utilizando In ovo La electroporación

Employment of enhancer elements to drive expression of reporter genes in neurons is a widely used paradigm for tracking axonal projection. For tracking ...

Video Bioinformatics Analysis of Human Embryonic Stem Cell Colony Growth

Vídeo Bioinformática Análisis de Crecimiento Humano Colonia células madre embrionarias

Because video data are complex and are comprised of many images, mining information from video material is difficult to do without the aid of computer ...

Single Cell Transfection in Chick Embryos

Transfección de células individuales en embriones de pollo

A central theme in developmental biology is the diversification of lineages and the elucidation of underlying molecular mechanisms. This entails a ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

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Patch clamp y técnicas de perfusión para el estudio de los canales iónicos expresados ​​en Xenopus Ovocitos

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

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En electroporación in vivo de Morpholinos en la retina de pez cebra adultos

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...