Name: in ovo electroporation in embryonic chick retina
Uploaded: 2012-02-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina at JoVE.com

Vi vill tacka Mr Maaz Enver för användning av sin HD-kamera (Cannon VIXIA HFS100). Detta arbete stöddes delvis av bidrag från NIH (EY018738), New Jersey kommissionen om Spinal Cord forskning (08-3074-SCR-E-0 och 10 till 3091-SCR-E-0) och Busch biomedicinsk forskning Award.

Eftersom vissa delar av protokollet utförs som tidigare beskrivits i andra Jové videor 2 och papper 3 med mindre modifiering vi inte kommer att diskutera dem i detalj här. 1. Ägg Hantering och nål Förberedelse <ol><li> Ägg kan lagras i ett vin svalare vid omkring 13 ° C under upp till 1 vecka. Om temperaturen är för hög, kommer embryon börja utveckla onormalt, medan lägre temperaturer orsakar hög dödlighet. När du är redo att inkubera ta ut ägg från...

<ol>
	<li>Doh, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+retinal+cell+development+in+chick+embryo+by+immunohistochemistry+and+in+ovo+electroporation+techniques.">Analysis of retinal cell development in chick embryo by immunohistochemistry and in ovo electroporation techniques.</a> BMC. Dev. Biol. 10, (2010).</li><li>Blank, M. C., Chizhikov, V., Millen, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Ovo+Electroporations+of+HH+Stage+10+Chicken+Embryos.">In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos.</a> J. Vis. Exp. (9), e408-e408 (2007).</li><li>Nakamura, H., Funahashi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Introduction+of+DNA+into+chick+embryos+by+in+ovo+electroporation.">Introduction of DNA into chick embryos by in ovo electroporation.</a> Methods. 24, 43-48 (2001).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.+1951.">A series of normal stages in the development of the chick embryo. 1951.</a> Dev. Dyn.. 195, 231-272 (1992).</li><li>Hamburger, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+stage+series+of+the+chick+embryo.">The stage series of the chick embryo.</a> Dev. Dyn. 195, 273-275 (1992).</li></ol>

Riktade retinal injektion och ovo elektroporation i embryonal näthinnan i E4 skede kan specifikt rikta retinala stamceller resulterar i förmågan att visualisera alla sex huvudtyper näthinnan cell på en enda cell nivå. Ovo elektroporering vid HH10 (~ E1.5) riktade till optiken vesikel är i stånd att transfektera celler som utvecklas för att bilda den ögat. Emellertid, dessa celler har en väldigt hög omsättning vid denna tid och denna metod är inte specifik för retinala celler. Det kan var...

<table border="1"><tbody><tr><td> Namnet på den reagenset </td><td> Bolaget </td><td> Katalognummer </td><td> Comments </td></tr><tr><td> Befruktade patogen-fria, SPF) vita leghorn kycklingägg </td><td> Solens upp-Gårdar (Catskill, NY) </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Kyckling ägget inkubator </td><td> GQF tillverkning, Savannah, GA </td><td> Modell-1550 </td><td> Inställd på 60% luftfuktighet och 37,5 ° C. </td></tr><tr><td> Glas kapillärrören </td><td> Värld Precision Instrument Inc. Med </td><td> TW150F-4 </td><td></td></tr><tr><td> 0,1 ml spruta </td><td> Hamilton Co Reno, Nevada </td><td> Gastäta 1710 </td><td> Alternativt 1ml spruta kan användas som väl </td></tr><tr><td> Masterflex silikon (peroxid) slang </td><td> Cole-Parmer </td><td> HV-96.400-13 </td&gt; <td> Skära en liten bit (1 cm) för att fästa glaset nålen till sprutan </td></tr><tr><td> Pincett </td><td> Dumont </td><td> AA- </td><td></td></tr><tr><td> Mikromanipulator </td><td> Värld Precision Instrument Inc. Med </td><td> M3301-M3- </td><td></td></tr><tr><td> Plasmid-DNA </td><td></td><td></td><td> pCAG-GFP lånades från Dr Connie Cepko </td></tr><tr><td> Snabb Green FCF </td><td> Sigma-Aldrich- </td><td> F7252 </td><td> Späda ut det till 0,025% med PBS </td></tr><tr><td> Pulse generator </td><td> Harvard Apparatus, MA </td><td> BTX ECM-enheten 830 </td><td> Kvadratisk våggenerator </td></tr><tr><td> Elektroder </td><td> Harvard Apparatus, MA </td><td> BTX modell 514 </td><td> Våra elektroder placerade 3-5 mm från varandra </td></tr><tr><td> Monokrom Digitalkamera </td><td> Zeiss-, Tyskland </td><td> Enxiocam MRM- </td><td></td></tr><tr><td> Fluorescerande dissektionsmikroskop </td><td> Leica Microsystems, Tyskland </td><td> Leica MZ16FA </td><td></td></tr><tr><td> Upright fluorescensmikroskop </td><td> Zeiss-, Tyskland </td><td> Zeiss Axio Imager A1 </td><td></td></tr></tbody></table>

in ovo electroporation in embryonic chick retina

Kyckling embryonal näthinnan är ett utmärkt verktyg för att studera retinal utveckling i högre ryggradsdjur. På grund av storlek och extern utveckling, är det jämförelsevis mycket enkelt att manipulera ungen embryonala näthinnan med hjälp av rekombinant DNA / RNA-teknik. Elektroporering av DNA / RNA-konstruktioner i embryonala näthinnan har en stor fördel att studera genreglering i retinala stamceller / progenitorceller under retinal utveckling. Annorlunda typ av analyser såsom reportergen-analysen, gen över-uttryck,-genen knock ned (shRNA) etc kan utföras med användning den elektroporering tekniken. Denna video demonstrerar riktade retinal injektion och ovo elektroporation i embryonala kycklingen näthinnan på Hamburger och Hamilton steg 22-23, som handlar om embryonala Dag 4 (E4). Här visar vi en snabba och bekväma att in ovo-elektroporation teknik varigenom en plasmid-DNA som uttrycker grönt fluorescerande protein (GFP) i form av en markör levereras HlVl direkt in i denbrud embryonisk subretinala utrymmet och följt av elektriska pulser för att underlätta DNA-upptag genom att retinala stam / progenitorceller. Den nya metod för retinal injektion och elektroporering vid E4: an tillåter den visualisering av alla retinala celltyper, inklusive den sena-födda neuroner 1, vilket har varit svårt med den konventionella metoden för injektion och elektroporering vid E1.5 2.

Watch this Scientific Journal Video about In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina at JoVE.com

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

Det övergripande målet för den här videon är att visa hur man utför riktade retinal injektion och<em&gt; I ovo</em&gt; Elektroporation av DNA / RNA-konstruktioner i ungen embryonala näthinnan på Hamburger och Hamilton steg 22-23, som handlar om embryonala Dag 4 (E4). Denna teknik är mycket användbar för att studera genuttryck, genreglering och morfologiska förändringar i utvecklingen av chick näthinnan.

I Ovo Elektroporation i embryonal Chick Retina

Chicken embryonic retina is an excellent tool to study retinal development in higher vertebrates. Because of large size and external development, it is ...

Research

JoVE Journal

Biology

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

I Ovo Electroporations av HH Stage 10 kycklingembryon

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick

Metod för hela berget antikropp färgning i Chick

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Chick Ex ovo Kultur och Ex ovo CAM analysen: hur det verkligen fungerar

Chicken eggs in the early phase of breeding are between in vitro and in vivo systems and provide a vascular test environment not only to study ...

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Preparation of embryos for Electron Microscopy of the Drosophila embryonic heart tube

Beredning av embryon för elektronmikroskopi av Drosophila Embryonala hjärta tub

The morphogenesis of the Drosophila  embryonic heart tube has emerged as a valuable model system for studying cell migration, cell-cell adhesion and cell ...

Primary Culture and Plasmid Electroporation of the Murine Organ of Corti. 

Primär Kultur och Plasmid elektroporation av Murine organ Corti.

In all mammals, the sensory epithelium for audition is located along the spiraling organ of Corti that resides within the conch shaped cochlea of the ...

Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation

Deciphering Axonal Pathways of Genetically Defined Groups of Neurons in the Chick Neural Tube Utilizing in ovo Electroporation

Dechiffrera axonal vägar genetiskt definierade grupper av nervceller i Chick Neural Tube Använda I ovo Elektroporation

Employment of enhancer elements to drive expression of reporter genes in neurons is a widely used paradigm for tracking axonal projection. For tracking ...

Video Bioinformatics Analysis of Human Embryonic Stem Cell Colony Growth

Video Bioinformatik Analys av mänskliga embryonala stamceller Colony Tillväxt

Because video data are complex and are comprised of many images, mining information from video material is difficult to do without the aid of computer ...

Single Cell Transfection in Chick Embryos

Single Cell Transfektion i kycklingembryon

A central theme in developmental biology is the diversification of lineages and the elucidation of underlying molecular mechanisms. This entails a ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Patch Clamp och tekniker perfusion för att studera jonkanaler Uttryckt i Xenopus Oocyter

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo Electroporation of Morpholinos into the Adult Zebrafish Retina

In vivo elektroporering av Morpholinos i Adult Zebrafish Retina

Many devastating inherited eye diseases result in progressive and irreversible blindness because humans cannot regenerate dying or diseased retinal ...