Name: single cell measurement of dopamine release with simultaneous voltage-clamp and amperometry
Uploaded: 2012-11-21T12:00:00
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हम इस पांडुलिपि की महत्वपूर्ण समीक्षा के लिए डॉ. Sanika Chirwa धन्यवाद. यह काम राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान (DA026947, DA021471, और NS071122) द्वारा समर्थित किया गया.

1. उपकरण और आपूर्ति <ol><li> पृष्ठभूमि शोर को कम करने के लिए विरोधी कंपन (TMI) तालिका के शीर्ष पर एक फैराडे पिंजरे माउंट. </li><li> एक साथ पैच दबाना amperometry रिकॉर्डिंग प्रणाली उत्कृष्ट डीआईसी प्रकाशिकी और एक लंबे समय से ?...

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	<li>Michael, A. C., Ikeda, M., Justice, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+contributing+to+the+recovery+of+striatal+releasable+dopamine+following+MFB+stimulation.">Mechanisms contributing to the recovery of striatal releasable dopamine following MFB stimulation.</a> Brain Res. 421, 325-335 (1987).</li><li>Gonon, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prolonged+and+extrasynaptic+excitatory+action+of+dopamine+mediated+by+D1+receptors+in+the+rat+striatum+in+vivo.">Prolonged and extrasynaptic excitatory action of dopamine mediated by D1 receptors in the rat striatum in vivo.</a> J. Neurosci. 17, 5972-5978 (1997).</li><li>Sulzer, D., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+quantal+size+by+presynaptic+mechanisms.">Regulation of quantal size by presynaptic mechanisms.</a> Rev. Neurosci. 11, 159-212 (2000).</li><li>Napolitano, A., Cesura, A. M., Da Prada, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+monoamine+oxidase+and+catechol+O-methyltransferase+in+dopaminergic+neurotransmission.">The role of monoamine oxidase and catechol O-methyltransferase in dopaminergic neurotransmission.</a> J. Neural. Transm. Suppl. 45, 35-45 (1995).</li><li>Sulzer, D., Maidment, N. T., Rayport, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amphetamine+and+other+weak+bases+act+to+promote+reverse+transport+of+dopamine+in+ventral+midbrain+neurons.">Amphetamine and other weak bases act to promote reverse transport of dopamine in ventral midbrain neurons.</a> J. Neurochem. 60, 527-535 (1993).</li><li>Salahpour, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+amphetamine-induced+hyperactivity+and+reward+in+mice+overexpressing+the+dopamine+transporter.">Increased amphetamine-induced hyperactivity and reward in mice overexpressing the dopamine transporter.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 4405-4410 (2008).</li><li>Khoshbouei, H., Wang, H., Lechleiter, J. D., Javitch, J. A., Galli, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amphetamine-induced+dopamine+efflux.+A+voltage-sensitive+and+intracellular+Na+-dependent+mechanism.">Amphetamine-induced dopamine efflux. A voltage-sensitive and intracellular Na+-dependent mechanism.</a> J. Biol. Chem. 278, 12070-12077 (2003).</li><li>Goodwin, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amphetamine+and+methamphetamine+differentially+affect+dopamine+transporters+in+vitro+and+in.">Amphetamine and methamphetamine differentially affect dopamine transporters in vitro and in.</a> , 284-2978 (2009).</li><li>Kahlig, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amphetamine+induces+dopamine+efflux+through+a+dopamine+transporter+channel.">Amphetamine induces dopamine efflux through a dopamine transporter channel.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 3495-3500 (2005).</li><li>Swant, J., Chirwa, S., Stanwood, G., Khoshbouei, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methamphetamine+reduces+LTP+and+increases+baseline+synaptic+transmission+in+the+CA1+region+of+mouse+hippocampus.">Methamphetamine reduces LTP and increases baseline synaptic transmission in the CA1 region of mouse hippocampus.</a> PLoS One. 5, e11382 (2010).</li><li>Gnegy, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+Ca2++regulates+amphetamine-induced+dopamine+efflux+and+currents+mediated+by+the+human+dopamine+transporter.">Intracellular Ca2+ regulates amphetamine-induced dopamine efflux and currents mediated by the human dopamine transporter.</a> Mol. Pharmacol. 66, 137-143 (2004).</li></ol>

युगपत वोल्टेज दबाना और amperometry निम्नलिखित लाभ हैं. सभी प्रकार की कोशिकाओं पहुंच रहे हैं और रिकॉर्डिंग के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. कोशिकाओं या न्यूरॉन जहां रिकॉर्डिंग कर रहे हैं की पहचान सरल और सीधा ह?...

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td> उपकरण </td></tr><tr><td> विरोधी कंपन तालिका w / फैराडे पिंजरे </td><td> तकनीकी निर्माण निगम </td><td> 63-500 श्रृंखला </td><td> हम 63-543 मॉडल का उपयोग </td></tr><tr><td> उलटा माइक्रोस्कोप Nikon ते-2000 </td><td> Nikon </td><td> बंद </td><td> अब ग्रहण तिवारी </td></tr><tr><td> दो कम शोर एम्पलीफायरों axopatch 200B </td><td> आणविक उपकरणों </td><td></td><td> 800-635-5577 </td></tr><tr><td> 1-CV 203 बुउ headstage </td><td> आणविक उपकरणों </td><td></td><td> 800-635-5578 </td></tr><tr><td> 1-HL-U विंदुक धारक </td><td> आणविक उपकरणों </td><td></td><td> 800-635-5579 </td></tr><tr><td> Digidata 1440A ए / डी कनवर्टर </td><td> आणविक उपकरणों </td><td></td><td> 800-635-5580 </td></tr><tr><td> दो Siskyou manipulators, छोड़ दियाऔर सही हाथ </td><td> सिस्कियो </td><td> MX6600R MX6600L </td><td> 877-313-6418 </td></tr><tr><td> लेजर विंदुक डांड़ी </td><td> Sutter उपकरण </td><td> P-2000 </td><td> 888-883-0128 </td></tr><tr><td> कम शोर की कार्बन फाइबर amperometric इलेक्ट्रोड </td><td> ProCFE </td><td></td><td> <a href="http://www.dagan.com" target="_blank">www.dagan.com</a> </td></tr><tr><td> कम शोर क्वार्ट्ज विंदुक </td><td> Sutter उपकरण </td><td> QF100-70-7.5 </td><td> 888-883-0128 </td></tr><tr><td> 12-वोल्ट कार बैटरी </td><td></td><td></td><td> व्यापक रूप से उपलब्ध </td></tr><tr><td> कार बैटरी चार्जर </td><td></td><td></td><td> व्यापक रूप से उपलब्ध </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> अभिकर्मक </td></tr><tr><td> सोडियम क्लोराइड (NaCl) </td><td> सिग्मा </td><td> S7653 </td><td></td></tr><tr><td> HEPES </td><td> सिग्मा </td><td> H3375 </td><td></td></tr><tr><td> द्रक्षौज </td><td> सिग्मा </td><td> G7528 </td><td></td></tr><tr><td> मैग्नीशियम सल्फेट (4 MgSO) </td><td> सिग्मा </td><td> M2643 </td><td></td></tr><tr><td> पोटेशियम फॉस्फेट अकेले आधार का (2 KH 4 पीओ) </td><td> सिग्मा </td><td> P5655 </td><td></td></tr><tr><td> पोटेशियम क्लोराइड (KCl) </td><td> सिग्मा </td><td> P9333 </td><td></td></tr><tr><td> कैल्शियम क्लोराइड dihydrate (2 2 0 • 2H CACL) </td><td> सिग्मा </td><td> 223506 </td><td></td></tr><tr><td> मैग्नेशियम क्लोराइड hexahydrate (2 2 0 • 6H MgCl) </td><td> सिग्मा </td><td> M2670 </td><td></td></tr><tr><td> EGTA </td><td> सिग्मा </td><td> E0396 </td><td></td></tr></tbody></table>

single cell measurement of dopamine release with simultaneous voltage-clamp and amperometry

अन्तर्ग्रथनी फांक dopamine में अपनी रिहाई के बाद अपने पूर्व और बाद synaptic 1 लक्ष्य के माध्यम से अपने जैविक गुणों डालती है. dopamine संकेत प्रसार 2-3, कोशिकी 4 एंजाइमों, और झिल्ली 5 ट्रांसपोर्टरों द्वारा समाप्त होता है. dopamine न्यूरॉन्स की पेरी synaptic फांक में स्थित dopamine ट्रांसपोर्टर, एक आवक dopamine प्रवाह (तेज) के माध्यम से जारी amines साफ करता है. dopamine ट्रांसपोर्टर भी विपरीत दिशा में काम करने के लिए एक जावक परिवहन या 5 dopamine के तपका बुलाया प्रक्रिया में अंदर से बाहर करने के लिए amines जारी कर सकते हैं. 20 से अधिक साल पहले Sulzer एट अल बताया dopamine ट्रांसपोर्टर गतिविधि के दो मोड में काम कर सकते हैं: आगे (तेज) (तपका) और रिवर्स 5. ट्रांसपोर्टर के माध्यम से तपका के माध्यम से जारी neurotransmitter dopamine की एक बड़ी राशि को बाह्य अंतरिक्ष में ले जाने के लिए, कर सकते हैं और कोशिकी dopamine घंटे में एक प्रमुख विनियामक भूमिका निभा दिखाया गया है6 omeostasis. यहाँ हम वर्णन कैसे एक साथ पैच दबाना और amperometry रिकॉर्डिंग millisecond समय संकल्प के साथ तपका तंत्र जब झिल्ली क्षमता नियंत्रित किया जाता है के माध्यम से जारी dopamine को मापने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. इस के लिए, पूरे सेल वर्तमान और oxidative संकेतों (amperometric) एक साथ मापा एक Axopatch 200B एम्पलीफायर (आण्विक उपकरण, पूरे सेल वर्तमान रिकॉर्डिंग के लिए 1000 हर्ट्ज पर एक कम पास Bessel फिल्टर सेट के साथ) का उपयोग कर रहे हैं. है है लिए कार्बन फाइबर इलेक्ट्रोड रिकॉर्डिंग amperometry एक 2 प्रवर्धक (200B Axopatch) से जुड़ा है और प्लाज्मा झिल्ली को आसन्न रखा और 700 एमवी में आयोजित. पूरे सेल और oxidative धाराओं (amperometric) और दर्ज किया जा सकता है संबंध वर्तमान वोल्टेज एक वोल्टेज कदम प्रोटोकॉल का उपयोग कर उत्पन्न किया जा सकता है. सामान्य amperometric अंशांकन, जो एकाग्रता के लिए रूपांतरण की आवश्यकता के विपरीत, वर्तमान प्रभावी मात्रा 7 पर विचार किए बिना सीधे सूचना दी है. इस प्रकार, परिणामी डेटाएक कम dopamine तपका सीमा का प्रतिनिधित्व करते हैं क्योंकि कुछ ट्रांसमीटर थोक समाधान के लिए खो दिया है.

Amperometry के साथ संयुक्त पैच दबाना उपाय कर सकते हैं वोल्टेज - निर्भर DAT-मध्यस्थता डीए तपका 2A चित्रा. DAT मध्यस्थता डीए तपका के एक प्रतिनिधि प्रायोगिक विन्यास और जब intracellular परिवेश और झिल्ली क्षमता एक पैच विं?...

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Single Cell Measurement of Dopamine Release with Simultaneous Voltage-clamp and Amperometry

amperometric तकनीक oxidative सहज dopamine oxidization द्वारा उत्पादित वर्तमान पता लगाने के द्वारा एक एकल कोशिका से dopamine रिलीज उपाय. युगपत वोल्टेज क्लैंप और amperometry पद्धति dopamine ट्रांसपोर्टर और dopamine के रिवर्स परिवहन पर इस गतिविधि के नियामक भूमिका के समग्र &quot;गतिविधि&quot; के बीच यंत्रवत संबंध प्रकट करते हैं.

युगपत वोल्टेज दबाना और Amperometry साथ dopamine जारी की एकल कोशिका मापन

After its release into the synaptic cleft, dopamine exerts its biological properties via its pre- and post-synaptic targets1. The dopamine signal is ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Functional Mapping with Simultaneous MEG and EEG

एक साथ एमईजी और ईईजी के साथ कार्यात्मक मानचित्रण

We use magnetoencephalography (MEG) and electroencephalography (EEG) to locate and determine the temporal evolution in brain areas involved in the ...

Presynaptic Dopamine Dynamics in Striatal Brain Slices with Fast-scan Cyclic Voltammetry

फास्ट स्कैन चक्रीय Voltammetry के साथ Striatal मस्तिष्क स्लाइसें में presynaptic Dopamine गतिशीलता

Extensive research has focused on the neurotransmitter dopamine because of its importance in the mechanism of action of drugs of abuse (e.g. cocaine and ...

Single-cell Profiling of Developing and Mature Retinal Neurons

विकासशील और परिपक्व रेटिना न्यूरॉन्स की रूपरेखा एकल कक्ष

Highly specialized, but exceedingly small populations of cells play important roles in many tissues. The identification of cell-type specific markers and ...

Optical Recording of Suprathreshold Neural Activity with Single-cell and Single-spike Resolution

एकल कोशिका और एकल कील संकल्प के साथ suprathreshold तंत्रिका गतिविधि के ऑप्टिकल रिकॉर्डिंग

Signaling of information in the vertebrate central nervous system is often carried by populations of neurons rather than individual neurons. Also ...

Simultaneous Electroencephalography, Real-time Measurement of Lactate Concentration and Optogenetic Manipulation of Neuronal Activity in the Rodent Cerebral Cortex

युगपत Electroencephalography, लैक्टेट एकाग्रता और neuronal गतिविधि के Optogenetic हेरफेर के कृंतक प्रमस्तिष्क प्रांतस्था में वास्तविक समय मापन

Although the brain represents less than 5% of the body  by mass, it utilizes approximately one quarter of the glucose used by the body  at rest1. The ...

Deep Brain Stimulation with Simultaneous fMRI in Rodents

कृंतक में एक साथ fMRI साथ डीप ब्रेन उसकाव

In order to visualize the global and downstream neuronal responses to deep brain stimulation (DBS) at various targets, we have developed a protocol for ...

Preparation of Neuronal Co-cultures with Single Cell Precision

सिंगल सेल प्रेसिजन साथ Neuronal सह संस्कृति की तैयारी

Microfluidic embodiments of the Campenot chamber have attracted great interest from the neuroscience community. These interconnected co-culture platforms ...

Simultaneous Detection of c-Fos Activation from Mesolimbic and Mesocortical Dopamine Reward Sites Following Naive Sugar and Fat Ingestion in Rats

मेसोलिम्बिक और Mesocortical डोपामाइन इनाम साइटों से सी-Fos एक्टिवेशन के साथ पता लगाना भोले चीनी और चूहों में वसा घूस के बाद

This study uses cellular c-fos activation to assess effects of novel ingestion of fat and sugar on brain dopamine (DA) pathways in rats. Intakes of sugars ...

Electrophysiological Method for Whole-cell Voltage Clamp Recordings from Drosophila Photoreceptors

Electrophysiological Method for Whole-cell Voltage Clamp Recordings from Drosophila Photoreceptors

से पूरे सेल वोल्ट क्लैंप रिकॉर्डिंग के लिए इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल विधि<em&gt; ड्रोसोफिला</em&gt; फोटोरिसेप्टर

Whole-cell voltage clamp recordings from Drosophila melanogaster photoreceptors have revolutionized the field of invertebrate visual transduction, ...

Levator Auris Longus Preparation for Examination of Mammalian Neuromuscular Transmission Under Voltage Clamp Conditions

Levator Auris Longus Preparation for Examination of Mammalian Neuromuscular Transmission Under Voltage Clamp Conditions

उंनमनी Auris लंग्स वोल्टेज क्लैंप शर्तों के तहत स्तनधारी Neuromuscular ट्रांसमिशन की परीक्षा के लिए तैयारी

This protocol describes a technique to record synaptic transmission from the neuromuscular junction under current-clamp and voltage-clamp conditions. An ...