Name: determination of mammalian cell counts, cell size and cell health using the moxi z mini automated cell counter
Uploaded: 2012-06-21T12:00:00
Duration: 13 min 16 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Determination of Mammalian Cell Counts, Cell Size and Cell Health Using the Moxi Z Mini Automated Cell Counter at JoVE.com

1. Bereiding van de monsters <ol><li> Verdun de celsuspensie met ORFLO verdunningsmiddel of een geschikt oplosmiddel, zodat de cel concentratie binnen het bereik van het instrument (3.000 tot 500.000 cellen / ml voor Type M-cassette, of 3.000 tot 2.500.000 cellen / ml voor cassette Type S). </li><li> Een verdunning van 1u05-01u20 (Type M cassette) of geen verwatering tot 1:5 verdunning (Type S cassette) wordt aanbevolen voor de meeste zoogdiercellijnen, maar de aangewezen verdunning is afhankelijk van celtype en zaaien dichtheid. De hoeveelheid vereist een nauwkeurige telling ongeveer 75 pi. </li></ol> 2. Running Monsters <ol><li> Zet de Moxi Z op door op de knop en het beginscherm wordt weergegeven. </li><li> Druk op de lade naar beneden en plaats een cassette in de Moxi Z. De Pipetteer 75μL Sample ... het scherm wordt weergegeven. </li><li> Pipetteer een 75 ul monster in de vulopening van de cassette (blauwe ovaallabel 1 of 2, afhankelijk van welk uiteinde van de cassette is geplaatst in het instrument). Deze zijn disposable cassettes die kunnen worden gebruikt 2 tests. Opmerking: Plaats de pipetpunt direct in de laden goed bij ~ 45 ° hoek, zodat de tip wordt gevangen onder de voorste rand van de put. Bij afgifte, is het belangrijk dat het vacuüm niet &quot;vooruit&quot; van de afgifte van de vloeistof als kan leiden luchtbellen de cassette te voeren. Het wordt aanbevolen om een ​​kleine kraal (de grootte van binnenkomst goed) van vloeibare vorm over het wel en hebben tijdens het afgeven. </li><li> Voor het tellen van de meeste cellen van zoogdieren, waar dan ook raak het scherm aan te beginnen. Voor het tellen van zeer kleine deeltjes (4 tot 8 micrometer gemiddelde diameter voor Type M en 3-8 micrometer gemiddelde diameter voor type S), kan de Moxi Z worden uitgevoerd in Small Particle Mode. Opmerking: de cassettes wordt in de zwarte balk boven het scherm. In deze stand Moxi Z stelt de diameter schaal 2 tot 10 urn als standaard en voert de telling uzingen geoptimaliseerde parameters voor de detectie van kleine cellen. Druk op de TOUCH HIER Small Particle Mode knop (zwart vierkant) om de test te starten en uit te voeren in deze modus. </li><li> De Moxi Z begint de test en het aantal cellen resultaten volledig zal zijn in ongeveer 8 seconden (type M cassette) of 15 seconden (Type S cassette). </li><li> De Curve Montage en MVI-berekeningen begint automatisch en vereisen slechts een paar extra seconden. Wanneer een geschikte fit is gevonden, worden de resultaten dan automatisch op het scherm. </li><li> Om Poortsignalen de standaard overname mode te maken, drukt u op de Curve Fit graaf om te schakelen naar Poortsignalen modus. </li><li> Op dit punt de cassette kan worden verwijderd uit het apparaat. </li></ol> 3. Het beheer van gegevens <ol><li> Als Automodus scaling is uitgeschakeld, worden de resultaten in eerste instantie weergegeven voor een curve fit rekenen op een diameter schaal van 2-34 micrometer (Type M cassette) of 2-26 μm (Type S cassette). Als Automode schaal is dan de Moxi Z de horizontale as (x-as) automatisch aanpassen aan de gamma die het dichtst bij de breedte van de curve-fit populatie tegelijkertijd alle curve-fit worden weergegeven. </li><li> Als Automodus scaling is uitgeschakeld, om handmatig de resultaten weer te geven met een hogere resolutie, raakt u het 2-26 micrometer pictogram (type M) of de 2-18 micrometer icoon (Type S). Opmerking: De cassette type wordt aangegeven in het blauwe vak in de linkerbovenhoek van het scherm. Dit wordt aanbevolen als tellen kleinere cellen of deeltjes zowel de curve-fitting mogelijkheden als de gebruiker in staat om visueel onderscheid nuances van de gegevens te verbeteren. </li><li> Bij het verhogen van de horizontale resolutie, zal de schaal knop dynamisch aan te passen om te fietsen tussen de beschikbare x-as schaal bereiken: 2-34, 2-26, 2-18, en 2-10 um voor de Type M cassette, of 2 -26, 2-18 en 2-10 urn voor de cassette type S. Deze functie is alleen beschikbaar onmiddellijk na een celgetal. </li><li> Count informatie (cellen / ml) voor de curve-fit gemonteerd of gated regio wordt weergegeven in een zwarte doos onder de linkerkant van het histogram. De gemiddelde celgrootte informatie wordt weergegeven in de zwarte doos onder de rechterkant van het histogram. </li><li> Het MVI-waarde wordt weergegeven een blauw vak in de rechterbovenhoek van het histogram. Als de test is uitgevoerd in kleine deeltjes-modus, is de MVI niet van toepassing en zal worden weergegeven als &quot;MVI = SPM&quot;. Ook als de concentratie van cellen buiten het MVI werkbereik, een boodschap van &quot;MVI = Out of Range&quot; wordt weergegeven. </li><li> Om de huidige histogram op te slaan, raakt u de OK icoon. Dit bespaart de gegevens met een naam van &quot;Test XXX&quot; waarbij XXX de desbetreffende test nummer. </li><li> Om handmatig de poort van de histogram, raakt aan de Curve Fit telresultaten knop drukt. Dit maakt Poortsignalen de standaard overname-modus. Schuif vervolgens elke blauwe gating marker om de poorten te stellen of tik op ee links en rechts pijltjes (deze verschijnen op het aanraken van de blauwe gating marker) voor fijn hek aanpassingen Alleen de cellen tussen de markers worden geteld. Het histogram verticale schaal wordt automatisch geschaald op basis van de curve-fit bevolking amplitude. Om deze verticale schaal aan te passen, veegt u het scherm omhoog of omlaag in het histogram regio. </li><li> Raak het Gated graaf resultaten om de display terug te keren naar curve fit-modus en de curve fit-modus de standaard overname mode te maken. </li><li> Druk vervolgens op de OK icoon om de resultaten op te slaan en naar het startscherm terug te keren. Om de resultaten te verwijderen, drukt u op het pictogram Verwijderen op elk gewenst moment definitief te verwijderen van de resultaten van de test. </li></ol> 4. Analyse van Eerder Verworven gegevens <ol><li> Om een opgeslagen toets te openen, drukt u op de Histogram icoon op het beginscherm. </li><li> Pictogrammen voor maximaal negen opgeslagen histogrammen wordt weergegeven op het scherm.Druk op de juiste pictogram voor de test van belang of druk op de Page Up of Page Down pictogrammen om meer testresultaten te bekijken. </li><li> Elk histogram zal worden geopend in een van beide de Curve Fit graaf-modus of Gesloten graaf-modus, afhankelijk van hoe het is opgeslagen. In een gesloten Graaf modus kunt gating markers worden geplaatst zoals gewenst door te schuiven elke blauwe gating marker onafhankelijk van elkaar. Auto Gate door het aanraken van de gewenste piek. Tik op om te schakelen tussen de gated graaf en Curve Fit graaf modi. </li><li> Druk op de Zoom en Unzoom pictogrammen om de verticale schaal van het histogram aan te passen. De verticale schaal kan ook worden veranderd door verticaal een vinger op het scherm omhoog (te verhogen) of omlaag (te verlagen). </li><li> Druk op de Delete icoon om definitief te verwijderen van de resultaten van de test. </li><li> Druk op de Done-pictogram omsluit de testresultaten en terug te keren naar het beginscherm. (Opmerking: ingezoomd zicht worden niet opgeslagen.) </li></ol> 5. Gegevens overzetten naar een pc <ol><li> De gegevens kunnen worden overgebracht naar een PC met behulp van de Orflo Moxichart applicatie of via een USB-overdracht door het inpluggen van de Moxi Z USB-kabel aan een PC of Mac. Voor de Bluetooth-overdracht (MoxiChart), eerst vast te stellen van het toestel Bluetooth-ID door te drukken op het Bluetooth-pictogram in het beginscherm van de Moxi Z-eenheid. </li><li> Op de computer, opent u de MoxiChart applicatie en klik op Bluetooth-pictogram in de rechter bovenhoek. Kies vervolgens het apparaat dat overeenkomt met de Bluetooth-ID van de Moxi Z en selecteer een doelmap voor de geüploade bestanden. </li><li> Moxichart automatisch de overdracht van alle bestanden naar de opgegeven map via de Bluetooth-verbinding. </li><li> Bestanden die via Bluetooth (MoxiChart) of USB kan worden geopend en analydirect zed met de MoxiChart aanvraag, of, omdat ze zijn opgemaakt. csv-bestanden, kunnen ze direct worden geopend in Microsoft Excel of andere programma&#39;s voor gegevensanalyse naar bijkomend / custom analyse. </li></ol> 6. Representatieve resultaten Om de precisie en nauwkeurigheid van de Moxi Z te beoordelen, tellingen van HEK-293 cellen, HeLa-cellen, CHO-K1, Gist, Jurkat E6-1-cellen, PC12 cellen, en precisie-gekalibreerd kraal suspensies met concentraties variërend van 0-500,000 cellen / ml (type M cassette) en 0-2-2.5e 6 cellen / ml (Type S cassette) werden geteld en vergeleken met een Coulter Z2 en Moxi Z. Alle zoogdiercellen werden verkregen van de American Type Culture Collection (ATCC) en gekweekt zoals eerder beschreven 7-11. In het kort werden cellen gekweekt in suspensie in 75 mm2 weefselkweekflessen met kern media RPMI 1640 (Jurkat E6-1, PC12), MEM (HEK-293, HeLa-cellen) of F12K (CHO-K1) cellen. Alle media werd aangevuld met10% foetaal runderserum en 100 U penicillin/100 pg streptomycine. Kolven werden gehandhaafd in een incubator bij 37 ° C met 5% CO2. Cellen werden elke 3 dagen. Gistcellen (X5, C. albicans, Vin 13) werden geschonken en gebruikt onmiddellijk als voorzien. Uitgangsmonster concentraties ~ 500.000 cellen / ml voor type M cassette gegevens ~ 2 2.5e 6 cellen / ml voor de cassette type S werden vastgesteld met de Coulter Z2. Na de theoretische concentraties werden voorbereid door middel van seriële verdunningen met fysiologische buffers (Isoton II of Balanced Salt Hank&#39;s oplossing). Elke concentratie werden gemeten door monsters identiek beide systemen uitgezet tegen elkaar. Zoals blijkt uit fig. 2, er een sterke lineaire correlatie (type M r 2&gt; 0,9886, Type S r 2&gt; 0,9781) tussen de tellingen voor alle monsters. De concentraties werden ook vergeleken met de verwachte / theoretische celconcentraties met zowel de Moxi Z en de Z2 ( <strong&gt; Figuur 3) en nogmaals aangetoond sterke lineaire correlaties (Type M r 2&gt; 0,9758, Type S r 2&gt; 0,9774). Om de precisie te beoordelen, werden HEK-293 en HeLa-cel-tellingen uitgevoerd met behulp van de Coulter Z2, Moxi Z, en een hemocytometer. De gemiddelde variatiecoëfficiënt (CV, n = 19) van het bloedbeeld het gebruik van de Moxi Z (Type M cassette), Coulter Z2 en een hemocytometer werden berekend met CV&#39;s gemeten van 5 afzonderlijke tellingen in de 200,000-300,000 cellen / ml bereik. De kleine gemiddelde CV (figuur 4) van de Moxi Z is vergelijkbaar met die van de Z2 en is representatief voor de hoge mate van precisie alleen haalbaar is met Coulter op basis van het tellen van technologieën. Dimensionering precisie van de Moxi Z instrument werd naast geëvalueerd door het meten van de gekochte, precisie gekalibreerd polystyreen bolletjes. Gemiddelde deeltjesgrootte metingen (n = 5) van Moxi Z werd uitgezet tegen de fabrikant gerapporteerd afmetingen. Zoals in Figuur 5, de Moxi Z metingen consistent afgestemd de fabrikant waarden met een hoge lineaire correlatie (R2 = 0,9989). Naast omvang en aantal gegevens, Moxi Z biedt een reagens-vrije, algemene beoordeling van de zoogdiercelculturen gezondheid, met het gemelde Moxi Levensvatbaarheid Index (MVI) waarde. Deze index wordt gegenereerd van een verhouding van het aantal cellen in de populatie van belang met betrekking tot het totale deeltjesvormige telt. Om de MVI meetmogelijkheden te tonen, werden MVI lezingen (Type M cassette) in vergelijking met standaard handleiding en flowcytometrische levend / dode meettechnieken. Populaties van dode (&lt;10% haalbaar) HEK-293 en HeLa cellen werden gecreëerd door overnacht incubatie van het levende cellen in een voedingsmedium vrij, natriumfluoride verdunningsmiddel (Isoton II, Beckman) bij 37 ° C. Gecontroleerde theoretische levensvatbaarheid niveaus werden bereid door het mengen van ratiometrically bekende concentraties van levende en dode cellen. Resulting oplossingen werden geanalyseerd voor de levensvatbaarheid van het niveau in twee exemplaren, met zowel hemocytometer telt en flowcytometer metingen. Hemocytometer metingen werden uitgevoerd bij een traditionele 50/50 mengsel van 0,1% Trypan blauwe oplossing en cellen. Flowcytometrie metingen zijn verricht met behulp van een Guava PCA cytometer (Merck) met de Viacount reagens en de door de fabrikant opgegeven protocol (Merck). Zoals getoond in figuur 6, de Pearson correlatiecoëfficiënt waarden (r2) &quot;van de lineaire passing van de MVI gegevens analoge hemocytometer levensvatbaarheid percentages&quot; HEK cellen en HeLa cellen werden r 2 = 0,9937 en r2 = 0,9728, respectievelijk. Deze resultaten tonen aan dat deze aanpak kunst gezondheid informatie geeft over een breed scala aan levensvatbaarheid van de cellen die gunstig vergelijken met de levende / dode metingen verkregen met behulp van een flowcytometer of hemocytometer. Tabellen en figuren (Van Dittami et al., 2011.) 15: Figuur 1. Dunne-film Coulter Tellen: Elektrische stroom wordt door de Cel Sensing Zone van de dunne-film cassette. Als cellen stromen enkel bestand door middel van de CSZ, worden de tijdelijke toename van de spanning gemeten door de Moxi Z. <img alt="Figuur 2" src="/files/ftp_upload/3842/3842fig2.jpg" /> Figuur 2. Moxi Z tellingen vergelijkbaar Coulter Z2 telt. Identieke graven cel kraal suspensies werden geteld met behulp zowel Coulter Z2 en Moxi Z. Gemiddeld aantal waarden (n = 3-4) van de Moxi Z tellingen werden uitgezet ten opzichte van de Coulter overeenkomstige Z2 telt en R2 waarden van de lineaire fit bepaald. A) Type M cassette - concentratiegebied van 0 - 500.000 cellen / ml. B) Type S cassette - concentratiegebied van 0 - 2-2.5e 6 / ml.Error balken geven ± 1 standaarddeviatie. Figuur 3. Moxi Z concentratiemetingen vs theoretische cel concentraties. A) Type M cassette - Theoretische waarde van de concentratie werden bereid uit seriële verdunningen van een eerste 500.000 cellen / ml monster B) Type S cassette -. Theoretische waarde van de concentratie werden bereid uit seriële verdunningen van een eerste 2 - 2.5e 6 cellen / ml monster. Foutbalken geven ± 1 standaarddeviatie. <img alt="Figuur 4" src="/files/ftp_upload/3842/3842fig4.jpg" /> Figuur 4. Variatiecoëfficiënt voor de Coulter Z2, Moxi Z (Type M cassette), en hemocytometer. De gemiddelde variatiecoëfficiënt (CV, n = 19) van de HEK-293 en HeLa-cel-tellingen voor elke benadering werden berekend met cv&#39;s gemeten van 5 afzonderlijke tellingen van HEK-293 en HeLa cellen in de 200.000 - 300.000 cellen / ml bereik. Foutbalken geven ± 1 standaarddeviatie. Figuur 5. Precisie van de deeltjesgrootte metingen met behulp van Moxi Moxi Z-Z gemeten kraal grootte (Type M cassette) vs fabrikant gemeld kraal grootte. Foutbalken geven ± 1 standaarddeviatie. <img alt="Figuur 6" src="/files/ftp_upload/3842/3842fig6.jpg" /> Figuur 6. Cultuur Health Assessment met behulp van MVI - Vergelijking van de MVI-metingen (Type M cassette) en Guava PCA Viacount levensvatbaarheid versus visuele, trypanblauw gekleurd levensvatbaarheid telt met behulp van een hemocytometer.

<ol>
	<li>Fernyhough, M. E., Helterline, D. L., Vierck, J. L., Hill, R. A., Dodson, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coulter+counter+use+in+the+enumeration+of+muscle+and+fat+stem+cells.">Coulter counter use in the enumeration of muscle and fat stem cells.</a> Methods. Cell. Sci. 25, 221-225 (2003).</li><li>Blades, A. N., Flavell, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observations+on+the+use+of+the+Coulter+model+D+electronic+cell+counter+in+clinical+haematology.">Observations on the use of the Coulter model D electronic cell counter in clinical haematology.</a> J. Clin. Pathol. 16, 158-163 (1963).</li><li>Morris, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Particle+Size+Analysis+of+Beer+Solids+using+a+Coulter+Counter.">Particle Size Analysis of Beer Solids using a Coulter Counter.</a> J. Inst. Brew. 90, 162-166 (1984).</li><li>Marth, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electronic+Somatic+Cell+Counting+Procedure.">Electronic Somatic Cell Counting Procedure.</a> Standard Methods for the Examination of Dairy Products. , 134-140 (1978).</li><li>Parks, L. R., Jurbergs, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Number+and+size+distribution+of+particles+in+cellulosic+solutions.">Number and size distribution of particles in cellulosic solutions.</a> J. Appl. Polym. Sci. 11, 193-199 (1960).</li><li>Davis, R. E., Green, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automatic+platelet+counting+with+the+Couler+particle+counter.">Automatic platelet counting with the Couler particle counter.</a> J. Clin. Pathol. 20, 777-779 (1967).</li><li>Dittami, G. D., Rabbitt, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrically+evoking+and+electrochemically+resolving+quantal+release+on+a+microchip.">Electrically evoking and electrochemically resolving quantal release on a microchip.</a> Lab on a Chip. 10, 30-35 (2010).</li><li>Nahreini, P., Hanson, A., Prasad, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-yield+production+of+recombinant+antibody+fragments+in+HEK-293+cells+using+sodium+butyrate.">High-yield production of recombinant antibody fragments in HEK-293 cells using sodium butyrate.</a> BioTechiques. 34, 968-972 (2003).</li><li>Escuyer, V., Collier, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anthrax+Protective+Antigen+Interacts+with+a+Specific+Receptor+on+the+surface+of+CHO-K1+Cells.">Anthrax Protective Antigen Interacts with a Specific Receptor on the surface of CHO-K1 Cells.</a> Infection and Immunity. 59, 3381-3386 (1991).</li><li>Isaacs, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Borrelia+bugdorferi+bind+to+epithelial+cell+proteoglycans.">Borrelia bugdorferi bind to epithelial cell proteoglycans.</a> J. Clin. Invest. 93, 809-819 (1994).</li><li>Saito, Y., Takahashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+selenoprotein+P+as+a+selenium+supply+protein.">Characterization of selenoprotein P as a selenium supply protein.</a> Eur. J. Biochem. 269, 5746-5751 (2002).</li><li>Kataoka, S., Tsuruo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physician+Education:+Apoptosis.">Physician Education: Apoptosis.</a> Oncologist. 1, 399-401 (1996).</li><li>Liegler, T. J., Hyun, W., Yen, T. S., Stites, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+and+quantification+of+live,+apoptotic,+and+necrotic+human+peripheral+lymphocytes+by+single-laser+flow+cytometry.">Detection and quantification of live, apoptotic, and necrotic human peripheral lymphocytes by single-laser flow cytometry.</a> Clin. Diagn. Lab Immunol. 2, 369-376 (1995).</li><li>Sheridan, J. W., Bishop, C. J., Simmons, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biophysical+and+morphological+correlates+of+kinetic+change+and+death+in+a+starved+human+melanoma+cell+line.">Biophysical and morphological correlates of kinetic change and death in a starved human melanoma cell line.</a> J. Cell. Sci. 49, 119-137 (1981).</li><li>Dittami, G. M., Rabbitt, R. D., Ayliffe, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ORFLO+Moxi+Z:+Revolutionizing+electronic+cell+count+accuracy+and+cell+viability+estimates+through+curve+fitting.">ORFLO Moxi Z: Revolutionizing electronic cell count accuracy and cell viability estimates through curve fitting.</a> Life Science Magazine, VWR International. , (2011).</li></ol>

Gregory M. Dittami en HE Ayliffe zijn medewerkers van Orflo Technologies, het bedrijf dat ontworpen, produceert en verkoopt de Moxi Z. Richard D. Rabbitt biedt in deeltijd, betaald consulting expertise aan Orflo Technologies. Productie en gratis toegang tot dit artikel wordt gesponsord door Orflo Technologies.

De onderliggende uitvoering van de Coulter aanpak kan zeer deterministisch van de algehele nauwkeurigheid van de metingen. Een kritische gebied is de correctie van de ruwe-cel-tellingen voor &quot;toeval events&quot; waar twee of meer cellen tegelijk door het diafragma en worden gemeten als een elektrische gebeurtenis. &quot;Toeval gebeurtenissen&quot; bijdragen tot fouten die varieert afhankelijk van een aantal factoren, waaronder celgrootte en mate van bundeling (Davis et al. 1967) 6. Hierdoor kan de vereiste toeval correctie voor elk monster niet worden voorspeld zeer verschillende tussen cellen / deeltje typen en ook verschillende culturen identieke celtypen. Gevestigde theorie, verankerd in de eerste publicaties Coulter, omvat de toepassing van een logaritmische aanpassing van de ruwe tellingen gebaseerd op het aantal waargenomen en aan een empirisch bepaalde, deeltjes-specifieke correctiefactor z. Hoewel nauwkeurige tellingen kan worden bereikt met tzijn correctie-algoritme wordt beperkt de praktische toepassing vanwege de grote variaties in z waarden tussen celtypes en de overeenkomstige moeilijk nauwkeurig te voorspellen zijn waarde. Hier de &quot;echte&quot; cellen die de Moxi Z curve fitting in combinatie met het samenvallen correctie-algoritme de Moxi Z corrigeert voor dynamisch toeval de werkelijke concentratie te bereiken. In vergelijking met de resultaten verkregen met hoogwaardige Coulter Z2 de Moxi Z geproduceerd vergelijkbare aantallen in een concentratie van 0 - 500.000 cellen / ml (type M cassette) en 3000 - 2 2.5e 6 cellen / ml (Type S cassette) . Bovendien is de Moxi Z bereikt deze telling nauwkeurigheid een soortgelijke lage variatiecoëfficiënt in counts en nauwkeurigheid in deeltjesgrootte die kenmerkend is voor de gouden standaard Coulter-techniek celtellingen. Bovendien is de hier gepresenteerde gegevens blijkt dat de Moxi Z kan waardevolle informatieten aanzien van de algehele gezondheid van de celculturen. De Moxi Z maakt gebruik van de curve fitting aanpak met een eigen software algoritme om deze cultuur van medische controle te bepalen. Morfologische veranderingen in verband met celdood, zoals blebbing, breken en volumetrische vervalsing (Kataoka en Tsuruo 1996 Liegler et al. 1995, Sheridan et al. 1981) 12-14, maken het mogelijk de Moxi-Z impedimetrische verschillen onderscheiden leven populaties en dode cellen / puin populaties. De MVI wordt gegenereerd door analyse van de cultuur / deeltjesgrootteverdeling de relatieve bijdragen van de deeltjes vuil, gekrompen necrotische cellen en de curve uitgerust celpopulatie van interesse. De MVI waarde geeft daardoor een populatie index of ratiometrische maat voor de monodisperse populatie telt ten opzichte van de totale deeltjes populatie profiel. Deze waarde is dan algoritmisch-aangepast op basis van bevolkingsstatistieken en empirische waarnemingen. Because de MVI kijkt naar andere parameters dan de traditionele benaderingen vlekken, is het niet te verwachten dat deze technieken spiegel, maar in plaats daarvan is een waardevol alternatief blik in de gezondheid van een cel cultuur, met name met betrekking tot het puin en microbiële verontreinigingen. Kortom, de Moxi-Z celgetalmeter is een ultra klein tafelmodel instrument dat een nauwkeurige en reproduceerbare testen van het aantal cellen, celgrootte, en de gezondheid van de cellen met behulp van de Coulter Principe en curve-fitting software-algoritmen in combinatie met een gepatenteerde dunne-film-sensor-technologie biedt . Met type M cassette is kan het tellen van deeltjes varieert 4-25 micron (dynamisch bereik van 2-34 micron) in 8 seconden. Met cassette het type S is kan het tellen van deeltjes varieert van 3 - 20 micron in diameter (dynamisch bereik van 2-26 micron) in 15 seconden. Bovendien is de Moxi-Z voert Keuringen zonder gebruik van de reagentia. Het is veel minder arbeidsintensief intensive en subjectieve dan handmatig tellen. In vergelijking met standaard Coulter tellen, de Moxi sneller aanmerkelijk kleiner, levert informatie, aanzienlijk minder onderhoud gemakkelijker te gebruiken, en een fractie van de kosten.

<table border="1" ><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td><td> Reacties </td></tr><tr><td> ORFLO Diluent </td><td> ORFLO </td><td> MXA006 </td><td></td></tr><tr><td> Cassette Dispenser </td><td> ORFLO </td><td></td><td> Slaat tot 25 cassettes voor handige dispenser </td></tr><tr><td> USB-kabel </td><td> ORFLO </td><td></td><td> Verbindt instrument om PC / Mac of lichtnetadapter </td></tr><tr><td> Power Adapter (VS en de EU-modellen) </td><td> ORFLO </td><td></td><td> Sluit USB-kabel aan op een stopcontact </td></tr><tr><td> USB Flash Drive </td><td> ORFLO </td><td></td><td> Winkels Moxi Z software en gebruikershandleiding </td></tr><tr><td> Controle van de ijking Beads </td><td> ORFLO </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Elektronische Kalibratie Cassette </td><td> ORFLO </td><td></td><td> Elektronische cassette voor het verifiëren van het systeem goed werkt en kalibratie </td></tr></tbody></table>

determination of mammalian cell counts, cell size and cell health using the moxi z mini automated cell counter

Deeltjes en celtellingen wordt gebruikt voor diverse toepassingen, zoals routine celkweek, hematologische analyse en de industrie 1-5. Een kritische doorbraak in cel / deeltjestelling technieken was de ontwikkeling van de Coulter techniek Wallace Coulter dan 50 jaar geleden. De techniek houdt in de toepassing van een elektrisch veld over een microscopisch kleine opening en hydrodynamisch richten enkele deeltjes door de opening. De resulterende occlusie van de opening van de deeltjes levert een meetbare verandering in elektrische impedantie die direct en nauwkeurig worden gecorreleerd celgrootte / volume. De erkenning van de aanpak als de benchmark in cel / deeltjes te tellen komt voort uit de buitengewone precisie en nauwkeurigheid van de deeltjesgrootte en telt, in het bijzonder in vergelijking met handleiding en beeldvorming op basis technologieën (nauwkeurigheid in de orde van 98% voor Coulter tellers versus 75 - 80% voor manuele en visie-gebaseerde systemen). Dezekan worden toegeschreven aan het feit dat, in tegenstelling tot de beeldvorming benaderingen naar cel tellen, de Coulter Techniek een echte drie-dimensionale (3-D) het meten van cellen / deeltjes die aanzienlijk aantal storingen teruggebracht van puin en clustering maakt door het berekenen van nauwkeurige volumetrische informatie over de cellen / deeltjes. Algemeen is dit een middel voor het opsommen van de dimensionering en cellen in een nauwkeuriger, minder vervelend, minder tijdrovend en minder subjectieve wijze dan andere tel technieken 6. Ondanks de bekendheid van de Coulter techniek in cel tellen, is het wijdverbreide gebruik in de dagelijkse biologische studies zijn onbetaalbaar vanwege de kosten en de grootte van traditionele instrumenten. Hoewel een goedkopere Coulter gebaseerd instrument is geproduceerd, heeft beperkingen ten opzichte van de duurdere tegenhangers in de correctie &quot;toeval gebeurtenissen&quot; waarin twee of meer cellen door het diafragma en gelijktijdig gemeten. Another beperking met bestaande technologieën Coulter is het gebrek aan statistieken over de algemene gezondheid van de cel monsters. Bijgevolg moet aanvullende technieken vaak gebruikt in combinatie met Coulter tellen levensvatbaarheid van de cellen te bepalen. Dit strekt zich uit experimentele setup-tijd en kosten, omdat de traditionele methoden van de levensvatbaarheid beoordeling nodig cel kleuring en / of het gebruik van dure en zware apparatuur zoals een flowcytometer. De Moxi Z mini geautomatiseerde cel teller, hier beschreven, is een ultra-kleine tafelmodel instrument dat de nauwkeurigheid van de Coulter Principe combineert met een dunne-film-sensor-technologie in staat te stellen precieze maatvoering en het tellen van deeltjes, variërend 3 tot 25 micron, afhankelijk van de celtellingen de cassette gebruikt. De M type cassette kan worden deeltjes tellen van de gemiddelde diameter van 4-25 micron (dynamisch bereik 2-34 micron), het type S cassette kan worden deeltjes met en gemiddelde diameter van 3 tellen - 20 micron (dynamische range 2-26 micron). Aangezien het systeem een ​​volumetrische meetmethode de 4-25 micron overeen met een celvolume reeks van 34 - 8180 fL en 3 - 20 micron overeen met een cel volume-gebied van 14 tot 4200 fL, welke relevant is voor de niet-bolvormige deeltjes worden gemeten. Van zoogdieren celtellingen met de Moxi Z uitvoert, worden de cellen geteld eerst verdund met ORFLO of dergelijke verdunningsmiddel. Een cel tellen cassette is geplaatst in het instrument, en het monster is geladen in de haven van de cassette. Duizenden cellen worden getrokken, enkele bestand via een &quot;Cell Sensing Zone&quot; (CSZ) in de dunnefilm membraan over 8-15 seconden. Na de run het instrument gebruikt eigen curve-fitting in combinatie met een eigen software algoritme toeval geval correctie voorzien met een evaluatie van de algemene gezondheid cultuur door bepaling van de verhouding van het aantal cellen in de populatie van belang het aantal deeltjes. Het totale aantal deeltjes Met inbegripe gekrompen en afgebroken dode cellen, evenals andere vuil en verontreinigingen. De resultaten zijn weergegeven in histogram formaat met een automatische curvefit met poorten die handmatig kan worden bijgesteld te worden. Uiteindelijk is de Moxi Z kan tellen met een precisie en nauwkeurigheid te vergelijken met een Coulter Z2, de huidige gouden standaard, terwijl ze bijkomend kunst gezondheid informatie. Verder realiseert deze resultaten in minder tijd, met een kleinere footprint, met aanzienlijk eenvoudiger bediening en onderhoud, en tegen een fractie van de kosten van vergelijkbare technologieën.

Watch this Scientific Journal Video about Determination of Mammalian Cell Counts, Cell Size and Cell Health Using the Moxi Z Mini Automated Cell Counter at JoVE.com

Determination of Mammalian Cell Counts, Cell Size and Cell Health Using the Moxi Z Mini Automated Cell Counter

De Moxi Z miniatuur automatische celgetalmeter is een nieuw instrument dat de Coulter principe combineert met gepatenteerde dunne-film-sensor-technologie en een eigen software algoritme om dimensionering uit te voeren en het tellen van een breed scala grootte van de deeltjes en aan de algehele gezondheid van monodisperse te bepalen zoogdiercellen culturen. Dit protocol beschrijft het gebruik van dit instrument voor het tellen en de beoordeling van de gezondheid van de celculturen.

Bepaling van de zoogdieren bloedcellen, celgrootte en Health Met behulp van de Moxi Z Mini geautomatiseerde cel Counter

Particle and cell counting is used for a variety of applications including routine cell culture, hematological analysis, and industrial controls1-5. A ...

Research

JoVE Journal

Biology

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

Op lange termijn Imaging zoogdiercellen met behulp van Wide-Field Microscopie

Pulse-chase Analysis of N-linked Sugar Chains from Glycoproteins in Mammalian Cells

Pulse-chase analyse van N-gebonden suikerketens van glycoproteïnen in zoogdiercellen

Attachment of the Glc3Man9GlcNAc2 precursor oligosaccharide to nascent polypeptides in the ER is a common modification for secretory proteins. Although ...

MISSION esiRNA for RNAi Screening in Mammalian Cells

MISSIE esiRNA voor RNAi Screening in zoogdiercellen

RNA interference (RNAi) is a basic cellular mechanism for the control of gene expression. RNAi is induced by short double-stranded RNAs also known as ...

Determining Cell Number During Cell Culture using the Scepter Cell Counter

Het bepalen van het aantal cellen tijdens de celdeling Cultuur met de Scepter Cell Counter

Counting cells is often a necessary but tedious step for in vitro cell culture. Consistent cell concentrations ensure experimental reproducibility and ...

Analysis of Cell Cycle Position in Mammalian Cells

Analyse van celcyclus Positie in zoogdiercellen

The regulation of cell proliferation is central to tissue morphogenesis during the development of multicellular organisms. Furthermore, loss of control of ...

Pull-down of Calmodulin-binding Proteins

Pull-down van calmoduline-bindende eiwitten

Calcium (Ca2+) is an ion vital in regulating cellular function through a variety of mechanisms. Much of Ca2+ signaling is mediated through the ...

Measurement of Heme Synthesis Levels in Mammalian Cells

Meting van Heme Synthesis Levels in zoogdiercellen

Heme serves as the prosthetic group for a wide variety of proteins known as hemoproteins, such as hemoglobin, myoglobin and cytochromes. It is involved in ...

Generation of Plasmid Vectors Expressing FLAG-tagged Proteins Under the Regulation of Human Elongation Factor-1&#945; Promoter Using Gibson Assembly

Generation of Plasmid Vectors Expressing FLAG-tagged Proteins Under the Regulation of Human Elongation Factor-1ÃƒÅ½Ã‚Â± Promoter Using Gibson Assembly

Generatie van plasmide vectoren die-FLAG tagged eiwitten onder de verordening van de Mens elongatiefactor-1α Promoter Met behulp van Gibson Vergadering

Gibson assembly (GA) cloning offers a rapid, reliable, and flexible alternative to conventional DNA cloning methods. We used GA to create customized ...

Direct Protein Delivery to Mammalian Cells Using Cell-permeable Cys2-His2 Zinc-finger Domains

Direct Protein Delivery to Mammalian Cells Using Cell-permeable Cys2-His2 Zinc-finger Domains

Direct Eiwit Levering aan zoogdiercellen behulp van Cell-permeabel Cys<sub&gt; 2</sub&gt; -Zijn<sub&gt; 2</sub&gt; Zinkvinger Domeinen

Due to their modularity and ability to be reprogrammed to recognize a wide range of DNA sequences, Cys2-His2 zinc-finger DNA-binding domains have emerged ...

Anaerobic Growth and Maintenance of Mammalian Cell Lines

Anaërobe groei en het onderhoud van zoogdieren cellijnen

Most mucosal surfaces along with the midpoints in tumors and stem cell niches are geographic areas of the body that are anoxic. Previous studies show that ...