Name: determination of mammalian cell counts, cell size and cell health using the moxi z mini automated cell counter
Uploaded: 2012-06-21T12:00:00
Duration: 13 min 16 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Determination of Mammalian Cell Counts, Cell Size and Cell Health Using the Moxi Z Mini Automated Cell Counter at JoVE.com

<ol>
	<li>Fernyhough, M. E., Helterline, D. L., Vierck, J. L., Hill, R. A., Dodson, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coulter+counter+use+in+the+enumeration+of+muscle+and+fat+stem+cells.">Coulter counter use in the enumeration of muscle and fat stem cells.</a> Methods. Cell. Sci. 25, 221-225 (2003).</li><li>Blades, A. N., Flavell, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observations+on+the+use+of+the+Coulter+model+D+electronic+cell+counter+in+clinical+haematology.">Observations on the use of the Coulter model D electronic cell counter in clinical haematology.</a> J. Clin. Pathol. 16, 158-163 (1963).</li><li>Morris, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Particle+Size+Analysis+of+Beer+Solids+using+a+Coulter+Counter.">Particle Size Analysis of Beer Solids using a Coulter Counter.</a> J. Inst. Brew. 90, 162-166 (1984).</li><li>Marth, E. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electronic+Somatic+Cell+Counting+Procedure.">Electronic Somatic Cell Counting Procedure.</a> Standard Methods for the Examination of Dairy Products. , 134-140 (1978).</li><li>Parks, L. R., Jurbergs, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Number+and+size+distribution+of+particles+in+cellulosic+solutions.">Number and size distribution of particles in cellulosic solutions.</a> J. Appl. Polym. Sci. 11, 193-199 (1960).</li><li>Davis, R. E., Green, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automatic+platelet+counting+with+the+Couler+particle+counter.">Automatic platelet counting with the Couler particle counter.</a> J. Clin. Pathol. 20, 777-779 (1967).</li><li>Dittami, G. D., Rabbitt, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrically+evoking+and+electrochemically+resolving+quantal+release+on+a+microchip.">Electrically evoking and electrochemically resolving quantal release on a microchip.</a> Lab on a Chip. 10, 30-35 (2010).</li><li>Nahreini, P., Hanson, A., Prasad, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-yield+production+of+recombinant+antibody+fragments+in+HEK-293+cells+using+sodium+butyrate.">High-yield production of recombinant antibody fragments in HEK-293 cells using sodium butyrate.</a> BioTechiques. 34, 968-972 (2003).</li><li>Escuyer, V., Collier, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anthrax+Protective+Antigen+Interacts+with+a+Specific+Receptor+on+the+surface+of+CHO-K1+Cells.">Anthrax Protective Antigen Interacts with a Specific Receptor on the surface of CHO-K1 Cells.</a> Infection and Immunity. 59, 3381-3386 (1991).</li><li>Isaacs, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Borrelia+bugdorferi+bind+to+epithelial+cell+proteoglycans.">Borrelia bugdorferi bind to epithelial cell proteoglycans.</a> J. Clin. Invest. 93, 809-819 (1994).</li><li>Saito, Y., Takahashi, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+selenoprotein+P+as+a+selenium+supply+protein.">Characterization of selenoprotein P as a selenium supply protein.</a> Eur. J. Biochem. 269, 5746-5751 (2002).</li><li>Kataoka, S., Tsuruo, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physician+Education:+Apoptosis.">Physician Education: Apoptosis.</a> Oncologist. 1, 399-401 (1996).</li><li>Liegler, T. J., Hyun, W., Yen, T. S., Stites, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+and+quantification+of+live,+apoptotic,+and+necrotic+human+peripheral+lymphocytes+by+single-laser+flow+cytometry.">Detection and quantification of live, apoptotic, and necrotic human peripheral lymphocytes by single-laser flow cytometry.</a> Clin. Diagn. Lab Immunol. 2, 369-376 (1995).</li><li>Sheridan, J. W., Bishop, C. J., Simmons, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biophysical+and+morphological+correlates+of+kinetic+change+and+death+in+a+starved+human+melanoma+cell+line.">Biophysical and morphological correlates of kinetic change and death in a starved human melanoma cell line.</a> J. Cell. Sci. 49, 119-137 (1981).</li><li>Dittami, G. M., Rabbitt, R. D., Ayliffe, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ORFLO+Moxi+Z:+Revolutionizing+electronic+cell+count+accuracy+and+cell+viability+estimates+through+curve+fitting.">ORFLO Moxi Z: Revolutionizing electronic cell count accuracy and cell viability estimates through curve fitting.</a> Life Science Magazine, VWR International. , (2011).</li></ol>

גרגורי מ Dittami ו HE Ayliffe הם עובדי Orflo טכנולוגיות, החברה נועד, מייצרת ומשווקת צ&#39;Moxi ריצ&#39;רד ד Rabbitt מספק חלקית, התמחות בייעוץ ששולם Orflo טכנולוגיות. הפקה וגישה חופשית למאמר זה ממומן על ידי Orflo טכנולוגיות.

יישום הגישה הבסיסית קולטר יכול להיות דטרמיניסטי מאוד הדיוק הכולל של המדידות. אזור קריטי הוא תיקון של ספירת תאים גלם &quot;אירועים צירוף מקרים&quot; שבהם שני תאים או יותר בו זמנית שעוברים דרך פתח, והם נמדדים כאירוע חשמל אחת. &quot;אירועים צירוף מקרים&quot; לתרום שגיאה אשר משתנה בהתאם למספר גורמים, ביניהם גודל התא ומידת אשכולות (Davis et al 1967) 6. כתוצאה מכך, תיקון במקרה הנדרש למדגם נתון לא ניתן לחזות, משתנה באופן נרחב בין התא / סוגי החלקיקים וגם בין תרבויות שונות של סוגי תאים זהים. הוקמה התיאוריה, נעוצה בפרסומים הראשונים של קולטר, כולל החלת התאמה לוגריתמי של ספירת גלם המבוססים על מספר האירועים שנצפו ו אמפירי שנקבע, חלקיק מסוים גורם התיקון, z. בעוד ספירת מדויקים ניתן להשיג כראוי עם לאאלגוריתם תיקון שלו, זה מוגבל תחולת המעשי בשל שוני גדול בין מספר ערכים זי בין סוגי תאים ועל הקושי המקביל לנבא בדייקנות את הערך שלו. כאן, באמצעות ספירת &quot;נכון&quot; תא מזוהה על ידי מתאים Moxi עקומת Z יחד עם אלגוריתם תיקון צירוף מקרים, Z Moxi דינמי מתקנת עבור מקרה כדי להשיג את הריכוזים האמיתיים. בהשוואה לתוצאות שהושגו באמצעות high-end קולטר Z2, המיוצר Z Moxi סעיפים דומים על פני טווח הריכוז של 0 - 500,000 תאים למ&quot;ל (קלטת סוג M) ו 3000 - 2-2.5e 6 תאים למ&quot;ל (קלטת S Type) . יתר על כן, Z Moxi משיגה דיוק ספירת עם מקדם נמוך דומה של שונות בספירת ו דיוק לשינוי גודל החלקיקים האופייני תקן זהב, קולטר, טכניקה ספירת תאים. יתר על כן, הנתונים שהוצגו כאן מצביעים על כך Z Moxi יכול לספק מידע רב ערךלגבי הבריאות הכללית של תרביות תאים. Z Moxi ממנף את הגישה העקומה הולמת עם אלגוריתם תוכנה קניינית כדי לקבוע הערכה בריאות ותרבות. שינויים מורפולוגיים הקשורות מוות של תאים, כגון blebbing, מתפרקת, ועיוותים נפחי (Kataoka ו Tsuruo 1996, Liegler et al 1995, Sheridan et al 1981) 12-14, מאפשרים Moxi-Z כדי להבחין בהבדלים בין impedimetric חיים אוכלוסיות תאים מתים / פסולת האוכלוסיות. MVI מופק על ידי ניתוח התפלגות תרבות / החלקיקים בגודל לזהות את התרומה היחסית של פסולת החלקיקים, תאים נמקי מכווץ, ואת עקומת-מצויד האוכלוסייה התא של עניין. ערך MVI ובכך משקף המדד האוכלוסייה או מידה ratiometric של ספירת אוכלוסין monodisperse ביחס לפרופיל החלקיקים הכולל האוכלוסייה. ערך זה הוא אז אלגוריתמית עונתיות נתוני האוכלוסייה המבוססים על תצפיות אמפיריות. Becausדואר MVI מסתכל פרמטרים אחרים מאשר גישות צביעה מסורתיות, זה לא צפוי לשקף את הטכניקות הללו אלא מספק תצוגה חלופית חשובה לבריאותם של התרבות תאים, במיוחד ביחס פסולת ומזהמים חיידקים. לסיכום, נגד Moxi-Z התא היא מכשיר אולטרה benchtop קטן המספק מדויקים, מבחני לשחזור של ספירת תאים, גודל התא, בריאות התא באמצעות העיקרון קולטר עקומת-הולם האלגוריתמים בשילוב עם טכנולוגיית סרט דק פטנט חיישן . עם קלטת M סוג הוא מסוגל לספור חלקיקים הנעים בין 4 - 25 מיקרון בקוטר (טווח דינמי של 2 - 34 מיקרון), ב -8 שניות. עם קלטת S Type היא מסוגלת לספור חלקיקים הנעים בין 3 - 20 מיקרון בקוטר (טווח דינמי של 2 - 26 מיקרון), תוך 15 שניות. יתר על כן, Moxi-Z מבצעת הערכות בריאות ללא שימוש של חומרים כימיים. זה Inte העבודה הרבה פחותnsive וסובייקטיבי יותר לספור ידנית. לעומת ספירת קולטר רגיל, Moxi הוא מהיר יותר, משמעותית יותר, מספק מידע נוסף, דורש תחזוקה הרבה פחות, קל יותר לשימוש, ומהווה חלק קטן מהעלות.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> ORFLO diluent </td><td> ORFLO </td><td> MXA006 </td><td></td></tr><tr><td> קלטת Dispenser </td><td> ORFLO </td><td></td><td> חנויות עד 25 קלטות של מחלק נוח </td></tr><tr><td> כבל USB </td><td> ORFLO </td><td></td><td> המכשיר מתחבר למחשב / Mac או מתאם מתח </td></tr><tr><td> מתאם מתח (ארה&quot;ב והאיחוד האירופי דגמים בלבד) </td><td> ORFLO </td><td></td><td> מתחבר כבל ה-USB לשקע ה-AC </td></tr><tr><td> USB Flash Drive </td><td> ORFLO </td><td></td><td> חנויות Moxאני Z תוכנה הוראות שימוש </td></tr><tr><td> בדוק כיול חרוזים </td><td> ORFLO </td><td></td><td></td></tr><tr><td> כיול אלקטרוני קלטת </td><td> ORFLO </td><td></td><td> קלטת אלקטרונית לאימות פעולת המערכת כיול נכונה </td></tr></tbody></table>

determination of mammalian cell counts, cell size and cell health using the moxi z mini automated cell counter

Particle and cell counting is used for a variety of applications including routine cell culture, hematological analysis, and industrial controls1-5. A critical breakthrough in cell/particle counting technologies was the development of the Coulter technique by Wallace Coulter over 50 years ago. The technique involves the application of an electric field across a micron-sized aperture and hydrodynamically focusing single particles through the aperture. The resulting occlusion of the aperture by the particles yields a measurable change in electric impedance that can be directly and precisely correlated to cell size/volume. The recognition of the approach as the benchmark in cell/particle counting stems from the extraordinary precision and accuracy of its particle sizing and counts, particularly as compared to manual and imaging based technologies (accuracies on the order of 98% for Coulter counters versus 75-80% for manual and vision-based systems). This can be attributed to the fact that, unlike imaging-based approaches to cell counting, the Coulter Technique makes a true three-dimensional (3-D) measurement of cells/particles which dramatically reduces count interference from debris and clustering by calculating precise volumetric information about the cells/particles. Overall this provides a means for enumerating and sizing cells in a more accurate, less tedious, less time-consuming, and less subjective means than other counting techniques6.
Despite the prominence of the Coulter technique in cell counting, its widespread use in routine biological studies has been prohibitive due to the cost and size of traditional instruments. Although a less expensive Coulter-based instrument has been produced, it has limitations as compared to its more expensive counterparts in the correction for "coincidence events" in which two or more cells pass through the aperture and are measured simultaneously. Another limitation with existing Coulter technologies is the lack of metrics on the overall health of cell samples. Consequently, additional techniques must often be used in conjunction with Coulter counting to assess cell viability. This extends experimental setup time and cost since the traditional methods of viability assessment require cell staining and/or use of expensive and cumbersome equipment such as a flow cytometer.
The Moxi Z mini automated cell counter, described here, is an ultra-small benchtop instrument that combines the accuracy of the Coulter Principle with a thin-film sensor technology to enable precise sizing and counting of particles ranging from 3-25 microns, depending on the cell counting cassette used. The M type cassette can be used to count particles from with average diameters of 4 - 25 microns (dynamic range 2 - 34 microns), and the Type S cassette can be used to count particles with and average diameter of 3 - 20 microns (dynamic range 2 - 26 microns). Since the system uses a volumetric measurement method, the 4-25 microns corresponds to a cell volume range of 34 - 8,180 fL and the 3 - 20 microns corresponds to a cell volume range of 14 - 4200 fL, which is relevant when non-spherical particles are being measured. To perform mammalian cell counts using the Moxi Z, the cells to be counted are first diluted with ORFLO or similar diluent. A cell counting cassette is inserted into the instrument, and the sample is loaded into the port of the cassette. Thousands of cells are pulled, single-file through a "Cell Sensing Zone" (CSZ) in the thin-film membrane over 8-15 seconds. Following the run, the instrument uses proprietary curve-fitting in conjunction with a proprietary software algorithm to provide coincidence event correction along with an assessment of overall culture health by determining the ratio of the number of cells in the population of interest to the total number of particles. The total particle counts include shrunken and broken down dead cells, as well as other debris and contaminants. The results are presented in histogram format with an automatic curve fit, with gates that can be adjusted manually as needed.
Ultimately, the Moxi Z enables counting with a precision and accuracy comparable to a Coulter Z2, the current gold standard, while providing additional culture health information. Furthermore it achieves these results in less time, with a smaller footprint, with significantly easier operation and maintenance, and at a fraction of the cost of comparable technologies.

Watch this Scientific Journal Video about Determination of Mammalian Cell Counts, Cell Size and Cell Health Using the Moxi Z Mini Automated Cell Counter at JoVE.com

Determination of Mammalian Cell Counts, Cell Size and Cell Health Using the Moxi Z Mini Automated Cell Counter

Z Moxi נגד מיניאטורי תא אוטומטי הוא כלי רומן המשלב עקרון קולטר עם הטכנולוגיה סרט דק פטנט חיישן אלגוריתם תוכנה קניינית לבצע שינוי גודל ועוד היד נטויה של מגוון רחב של גודל החלקיקים, כמו גם כדי לקבוע את הבריאות הכללית של monodisperse תא תרבויות יונקים. פרוטוקול זה מתאר את השימוש בכלי זה לספור ולהעריך את הבריאות של תרביות תאים.

קביעת ספירת תאים יונקים, גודל התא ובריאות נייד באמצעות ת Moxi מיני מונה אוטומטי Cell

Particle and cell counting is used for a variety of applications including routine cell culture, hematological analysis, and industrial controls1-5. A ...

Research

JoVE Journal

Biology

Long-term Imaging Mammalian Cells using Wide-Field Microscopy

לטווח ארוך הדמיה בתאי יונקים באמצעות מיקרוסקופית שדה רחב

Pulse-chase Analysis of N-linked Sugar Chains from Glycoproteins in Mammalian Cells

Pulse-מרדף ניתוח של N-linked שרשראות סוכר מ גליקופרוטאינים בתאי יונקים

Attachment of the Glc3Man9GlcNAc2 precursor oligosaccharide to nascent polypeptides in the ER is a common modification for secretory proteins. Although ...

Using an Automated Cell Counter to Simplify Gene Expression Studies: siRNA Knockdown of IL-4 Dependent Gene Expression in Namalwa Cells

שימוש מונה תא אוטומטי כדי לפשט את הביטוי מחקרים ג&#39;ין: siRNA מציאה הביטוי IL 4-Gene תלויים תאים Namalwa

The use of siRNA mediated gene knockdown is continuing to be an important tool in studies of gene expression.  siRNA studies are being conducted not only ...

MISSION esiRNA for RNAi Screening in Mammalian Cells

המשימה esiRNA עבור הקרנת RNAi בתאי יונקים

RNA interference (RNAi) is a basic cellular mechanism for the control of gene expression. RNAi is induced by short double-stranded RNAs also known as ...

Determining Cell Number During Cell Culture using the Scepter Cell Counter

קביעת מספר נייד במהלך תרבית תאים באמצעות מונה Cell שרביט השלטון

Counting cells is often a necessary but tedious step for in vitro cell culture. Consistent cell concentrations ensure experimental reproducibility and ...

Analysis of Cell Cycle Position in Mammalian Cells

ניתוח של עמדת מחזור התא בתאי יונקים

The regulation of cell proliferation is central to tissue morphogenesis during the development of multicellular organisms. Furthermore, loss of control of ...

Pull-down of Calmodulin-binding Proteins

הנפתח של calmodulin מחייב חלבונים

Calcium (Ca2+) is an ion vital in regulating cellular function through a variety of mechanisms. Much of Ca2+ signaling is mediated through the ...

Measurement of Heme Synthesis Levels in Mammalian Cells

מדידה של רמות הרן סינתזה בתאי יונקים

Heme serves as the prosthetic group for a wide variety of proteins known as hemoproteins, such as hemoglobin, myoglobin and cytochromes. It is involved in ...

Generation of Plasmid Vectors Expressing FLAG-tagged Proteins Under the Regulation of Human Elongation Factor-1&#945; Promoter Using Gibson Assembly

דור של פלסמיד וקטורים לבטא חלבונים מתויג FLAG על פי תקנות ההסדרה של יזם אדם התארכות Factor-1α שימוש גיבסון עצרת

Gibson assembly (GA) cloning offers a rapid, reliable, and flexible alternative to conventional DNA cloning methods. We used GA to create customized ...

Direct Protein Delivery to Mammalian Cells Using Cell-permeable Cys2-His2 Zinc-finger Domains

Direct Protein Delivery to Mammalian Cells Using Cell-permeable Cys2-His2 Zinc-finger Domains

משלוח חלבון ישיר לשימוש בתאי יונקי Cys Cell-חדיר<sub&gt; 2</sub&gt; כלי-<sub&gt; 2</sub&gt; Domains אבץ האצבע

Due to their modularity and ability to be reprogrammed to recognize a wide range of DNA sequences, Cys2-His2 zinc-finger DNA-binding domains have emerged ...