Name: odorant-induced responses recorded from olfactory receptor neurons using the suction pipette technique
Uploaded: 2012-04-05T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Odorant-induced Responses Recorded from Olfactory Receptor Neurons using the Suction Pipette Technique at JoVE.com

Detta arbete stöddes av NIH DC009613, Human Frontiers Science Program och Morley Care Fellowship (till JR).

1. Inspelning Inställning Inspelningen kammaren monterad på en Nikon Eclipse TE2000U inverterat mikroskop med faskontrastoptik som är monterad på ett luftbord och elektriskt skärmade med användning av en Faraday-bur. Den Plexiglas inspelning kammare består av två sektioner delvis separerade av en barriär och limmas på en silaniserat objektglas. En del av kammaren används för att reglera cellerna medan den andra används för stimulus-exponering under inspelningen för att minimera ...

<ol>
	<li>Reisert, J., Zhao, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perspectives+on:+Information+and+coding+in+mammalian+sensory+physiology:+Response+kinetics+of+olfactory+receptor+neurons+and+the+implications+in+olfactory+coding.">Perspectives on: Information and coding in mammalian sensory physiology: Response kinetics of olfactory receptor neurons and the implications in olfactory coding.</a> J. Gen. Physiol. 138, 303-310 (2011).</li><li>Kaupp, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+signalling+in+vertebrates+and+insects:+differences+and+commonalities.">Olfactory signalling in vertebrates and insects: differences and commonalities.</a> Nat. Rev. Neurosci. 11, 188-200 (2010).</li><li>Tirindelli, R., Dibattista, M., Pifferi, S., Menini, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+pheromones+to+behavior.">From pheromones to behavior.</a> Physiol. Rev. 89, 921-956 (2009).</li><li>Kleene, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+electrochemical+basis+of+odor+transduction+in+vertebrate+olfactory+cilia.">The electrochemical basis of odor transduction in vertebrate olfactory cilia.</a> Chem. Senses. 33, 839-859 (2008).</li><li>Baylor, D. A., Lamb, T. D., Yau, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responses+of+retinal+rods+to+single+photons.">Responses of retinal rods to single photons.</a> J. Physiol. 288, 613-634 (1979).</li><li>Wang, J., Kefalov, V. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+Suction+Recordings+from+Mouse+Cone+Photoreceptors.">Single-cell Suction Recordings from Mouse Cone Photoreceptors.</a> J. Vis. Exp. (35), e1681 (2010).</li><li>Lowe, G., Gold, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spatial+distributions+of+odorant+sensitivity+and+odorant-induced+currents+in+salamander+olfactory+receptor+cells.">The spatial distributions of odorant sensitivity and odorant-induced currents in salamander olfactory receptor cells.</a> J. Physiol. 442, 147-168 (1991).</li><li>Reisert, J., Matthews, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Na+-dependent+Ca2++extrusion+governs+response+recovery+in+frog+olfactory+receptor+cells.">Na+-dependent Ca2+ extrusion governs response recovery in frog olfactory receptor cells.</a> J. Gen. Physiol. 112, 529-535 (1998).</li><li>Reisert, J., Matthews, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adaptation+of+the+odour-induced+response+in+frog+olfactory+receptor+cells.">Adaptation of the odour-induced response in frog olfactory receptor cells.</a> J. Physiol. 519, 801-813 (1999).</li><li>Matthews, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+compact+modular+flow+heater+for+the+superfusion+of+mammalian+cells.">A compact modular flow heater for the superfusion of mammalian cells.</a> J. Physiol. 518P, 13 (1999).</li><li>Reisert, J., Matthews, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+recording+of+receptor+current+and+intraciliary+Ca2++concentration+in+salamander+olfactory+receptor+cells.">Simultaneous recording of receptor current and intraciliary Ca2+ concentration in salamander olfactory receptor cells.</a> J. Physiol. 535, 637-645 (2001).</li></ol>

<p class="jove_content"&gt; Sug pipett tekniken är en elektrofysiologisk metod som används för att registrera lukten-inducerade långsam receptor nuvarande och snabba bifasiska potentialer åtgärder från en ORN samtidigt. Eftersom plasmamembranet i cellen inte brutit lämnar denna metod den intracellulära miljön ostörd säkerställa att odorant svaren inte ändras på grund av förändringar i de cytoplasmiska jonkoncentrationer eller utspädning av intracellulära faktorer. Celler kan spelas in från för långa löptider (upp till 4 t...

<table border="1"><tbody><tr><td> Namn på materialet </td><td> Typ </td><td> Företag </td><td> Katalog / Modell nummer </td><td> Kommentarer </td></tr><tr><td> Luftbord </td><td> utrustning </td><td> Newport </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Air Pump </td><td> utrustning </td><td> Newport </td><td> ACGP </td><td></td></tr><tr><td> Pipettera Avdragare </td><td> utrustning </td><td> Sutter </td><td> P-97 </td><td></td></tr><tr><td> Borsilikatglas </td><td> utrustning </td><td> WPI </td><td> 1B150-4 </td><td></td></tr><tr><td> Nikon Eclipse inverterat mikroskop </td><td> utrustning </td><td> Nikon </td><td> TE2000U </td><td> Utrustad med Hg-lampa, GFP filter och mål 20X och 5X åtminstone </td></tr><tr><td> Förstärkare PC-501A </td><td> utrustning </td><td> Varnare </td><td> 64-0008 </td><td> Huvudsteg 1 GΩ </td></tr><tr><td> Diamantkniv </td><td> Utrustning </td><td> Skräddarsytt </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Digitizer Mikro1401 A / D </td><td> utrustning </td><td> Cambridge Electronic Design </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Filterenhet 3382 </td><td> utrustning </td><td> Krohn Hite bolag </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Signal </td><td> programvara </td><td> Cambridge Electronic Design </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Gjutna Ag / AgCl-pellets </td><td> utrustning </td><td> WPI </td><td> 64-1297 </td><td></td></tr><tr><td> Pipetthållare </td><td> utrustning </td><td> Varnare </td><td> 64-0997 </td><td> Anpassad modifierad för att passa huvudsteg </td></tr><tr><td> Inspelning kammare </td><td> Utrustning </td><td> Skräddarsytt </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Mikromanipulator MP85-1028 </td><td> utrustning </td><td> Sutter Instrument </td><td> Mikromanipulator MP85-1028 </td> &lt;td&gt; </td></tr><tr><td> Mineralolja </td><td> Lösning </td><td> Sigma </td><td> 330.779-1L </td><td></td></tr><tr><td> Oscilloskop TDS 1001 </td><td> utrustning </td><td> Tektronix </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Tre-barreled fyrkantiga glasrör </td><td> Utrustning </td><td> Varnare </td><td> 64-0119 </td><td> 0,6 mm innerdiameter, 5 cm lång </td></tr><tr><td> Ventil </td><td> utrustning </td><td> Lee Company </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Valvelink 8,2 </td><td> utrustning </td><td> Automatisera Vetenskaplig </td><td></td><td></td></tr><tr><td> SF-77B Perfusion snabb steg </td><td> utrustning </td><td> Varnare </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

odorant-induced responses recorded from olfactory receptor neurons using the suction pipette technique

Djur prov på illaluktande miljön omkring dem genom chemosensory system som finns i näshålan. Chemosensory signaler påverkar komplexa beteenden såsom mat val, rovdjur, conspecific och mate erkännande och andra socialt relevanta ledtrådar. Luktreceptorceller neuroner (Örns) ligger i den dorsala delen av näshålan inbäddad i luktepitel. Dessa bipolära nervceller skickar ett axon till luktloben (se Fig. 1, Reisert &amp; Zhao 1, ursprungligen publicerad i Journal of General Physiology) och utöka en enda dendrit till epiteliala gränsen där Cilia stråla in i slem som täcker lukt epitel. Flimmerhåren innehåller maskinen signaltransduktion som slutligen leder till excitatoriska nuvarande inflöde genom ciliära transduktion kanaler, en cyklisk nukleotid-gated (CNG) kanal och en Ca 2 +-aktiverad CL - kanal (bild 1). Den påföljande depolarization triggar aktionspotentialen generationen på cellkroppen 2-4. I den här videon beskriver vi användningen av &quot;sug pipett teknik&quot; för att spela in luktämne-inducerade svar från Örns. Denna metod utvecklades ursprungligen för att spela in från spö fotoreceptorer 5 och en variant av denna metod kan hittas på jove.com modifierats för att spela in från fotoreceptorer mus kon 6. Sug pipett Tekniken anpassades senare att även spela in från Örns 7,8. Kortfattat, efter dissociation av luktepitel och cellisolering, är hela cellkroppen av en ORN sugs in i spetsen av en inspelning pipett. Den dendrit och flimmerhåren förblir exponerade till badlösningen och därmed tillgänglig för lösning ändras för att möjliggöra t.ex. luktämne eller farmakologisk blockerare applikation. I denna konfiguration är ingen tillgång till den intracellulära miljön fått (ingen hel-cellspänning klämma) och den intracellulära spänningen förblir fri att variera. Detta alltows samtidig inspelning av den långsamma receptorn ström som har sitt ursprung i flimmerhåren och snabba potentialer åtgärder eldas med cellkroppen 9. Skillnaden i kinetik mellan dessa två signaler medger att de kan separeras med användning av olika filter inställningar. Denna teknik kan användas på alla vildtyp eller knockout-mus eller att spela selektivt från Örns som också uttrycker GFP att märka specifika undergrupper av Örns, t.ex. uttrycker en given luktreceptor eller jonkanal.

Watch this Scientific Journal Video about Odorant-induced Responses Recorded from Olfactory Receptor Neurons using the Suction Pipette Technique at JoVE.com

Odorant-induced Responses Recorded from Olfactory Receptor Neurons using the Suction Pipette Technique

Luktreceptorceller neuroner (Örns) omvandlar lukt signaler först till en receptor ström som i sin tur utlöser aktionspotentialer som förmedlas till andra ordningens neuron i luktbulben. Här beskriver vi tekniken sug pipett för att spela in samtidigt luktämnen-inducerad receptor ström och potentialer åtgärder från mus Örns.

Luktämne-inducerade svar in från luktreceptorceller Nervceller användning av tekniken Sug Pipettera

Animals sample the odorous environment around them through the chemosensory systems located in the nasal cavity. Chemosensory signals affect complex ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Analyzing Responses of Mouse Olfactory Sensory Neurons Using the Air-phase Electroolfactogram Recording

Analysera svar av Mouse Olfactory sensoriska neuroner Använda Air-fas Electroolfactogram inspelning

Animals depend on olfaction for many critical behaviors, such as finding food sources, avoiding predators, and identifying conspecifics for mating and ...

Application of a NMDA Receptor Conductance in Rat Midbrain Dopaminergic Neurons Using the Dynamic Clamp Technique

Tillämpning av en NMDA-receptorn Konduktans av dopaminerg Rat mitthjärnan Nervceller med det dynamiska Clamp Teknik

Neuroscientists study the function of the brain by investigating how neurons in the brain communicate. Many investigators look at changes in the ...

Spinal Cord Electrophysiology II: Extracellular Suction Electrode Fabrication

Ryggmärgen Elektrofysiologi II: Extracellulär Sug elektrod Fabrication

Development of neural circuitries and locomotion can be studied using neonatal rodent spinal cord central pattern generator (CPG) behavior. We demonstrate ...

Isolating Nasal Olfactory Stem Cells from Rodents or Humans

Isolera Nasal Olfactory stamceller från gnagare eller människor

The olfactory mucosa, located in the nasal cavity, is in charge of detecting odours. It is also the only nervous tissue that is exposed to the external ...

Targeting Olfactory Bulb Neurons Using Combined In Vivo Electroporation and Gal4-Based Enhancer Trap Zebrafish Lines

Targeting Olfactory Bulb Neurons Using Combined In Vivo Electroporation and Gal4-Based Enhancer Trap Zebrafish Lines

Inriktning luktbulben nervceller som använder kombinerade In Vivo Elektroporation och Gal4-Based Enhancer Trap Zebrafish Lines

In vivo electroporation is a powerful method for delivering DNA expression plasmids, RNAi reagents, and morpholino anti-sense oligonucleotides to specific ...

Flash Photolysis of Caged Compounds in the Cilia of Olfactory Sensory  Neurons

Flash Fotolys av Caged föreningar i Cilia av Olfactory sensoriska neuroner

Photolysis of caged compounds allows the production of rapid and localized increases in the concentration of various physiologically active compounds1. ...

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

Selective Viral Transduction of Adult-born Olfactory Neurons for Chronic in vivo Optogenetic Stimulation

Selektiv Viral nervsystemet av vuxna födda Olfactory Neuroner för kronisk In vivo Optogenetic Stimulering

Local interneurons are continuously regenerated in the olfactory bulb of adult rodents1-3. In this process, called adult neurogenesis, neural stem cells ...

Imaging pHluorin-tagged Receptor Insertion to the Plasma Membrane in Primary Cultured Mouse Neurons

Imaging pHluorin-märkta receptor Insättning till plasmamembranet i primärt odlade mus Nervceller

A better understanding of the mechanisms governing receptor trafficking between the plasma membrane (PM) and intracellular compartments requires an ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Hela Mount immunomärkning av luktreceptor nervceller i<em&gt; Drosophila</em&gt; Antenn

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

Perforated Patch-clamp Recording of Mouse Olfactory Sensory Neurons in Intact Neuroepithelium: Functional Analysis of Neurons Expressing an Identified Odorant Receptor

Perforerade Patch-clamp inspelning av Mouse Olfactory sensoriska neuroner i Intakt neuroepithelium: Funktionell analys av nervceller som uttrycker en identifierad luktreceptor

Analyzing the physiological responses of olfactory sensory neurons (OSN) when stimulated with specific ligands is critical to understand the basis of ...