Name: using eggs from schistosoma mansoni as an in vivo model of helminth-induced lung inflammation
Uploaded: 2012-06-05T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Using Eggs from Schistosoma mansoni as an In vivo Model of Helminth-induced Lung Inflammation at JoVE.com

Detta arbete stöddes av National Institutes of Health (NIH) AI091759 och Crohns och kolit Foundation of America: s William och Shelby Modell Family Foundation Research Award (till MN). Schistosome-infekterade möss som tillhandahålls av NIAID Schistosome Resource Center (NIAID Kontrakt N01 A130026).

1. Purifying Schistosoma mansoni Ägg <ol><li> Infektera schweiziska Webster-möss med Schistosome cercariae, vilket är det infektiösa stadiet i Schistosoma livscykel 8. Alternativt kan få Schistosome-infekterade möss från NIAID Schistosomiasis Resource Center ( <a href="http://www.schisto-resource.org/" target="_blank">http://www.schisto-resource.org/~~V</a> ). Lämna möss 6-7 veckor efter infektion, då-punkt, ägg finns i levern och kan återvinnas som beskrivs nedan (se f...

<ol>
	<li>World Health Organization. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+and+control+of+schistosomiasis+and+soil-transmitted+helminthiasis:+report+of+a+WHO+expert+committee.">Prevention and control of schistosomiasis and soil-transmitted helminthiasis: report of a WHO expert committee.</a> WHO Technical Report Series 912. , (2002).</li><li>Pearce, E. J., MacDonald, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immunobiology+of+schistosomiasis.">The immunobiology of schistosomiasis.</a> Nat. Rev. Immunol. 2, 499-511 (2002).</li><li>Sandler, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+gene+expression+profiles+during+acute+pathogen-induced+pulmonary+inflammation+reveal+divergent+roles+for+Th1+and+th2+responses+in+tissue+repair.">Global gene expression profiles during acute pathogen-induced pulmonary inflammation reveal divergent roles for Th1 and th2 responses in tissue repair.</a> J. Immunol. 171, 3655-3667 (2003).</li><li>Perrigoue, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-31-IL-31R+interactions+negatively+regulate+type+2+inflammation+in+the+lung.">IL-31-IL-31R interactions negatively regulate type 2 inflammation in the lung.</a> J. Exp. Med. 204, 481-487 (2007).</li><li>Sandor, M., Weinstock, J. V., Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Granulomas+in+schistosome+and+mycobacterial+infections:+a+model+of+local+immune+responses.">Granulomas in schistosome and mycobacterial infections: a model of local immune responses.</a> Trends Immunol. 24, 44-52 (2003).</li><li>Nair, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alternatively+activated+macrophage-derived+RELM-{alpha}+is+a+negative+regulator+of+type+2+inflammation+in+the+lung.">Alternatively activated macrophage-derived RELM-{alpha} is a negative regulator of type 2 inflammation in the lung.</a> J. Exp. Med. 206, 937-952 (2009).</li><li>Dalton, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+the+isolation+of+schistosome+eggs+and+miracidia+free+of+contaminating+host+tissues.">A method for the isolation of schistosome eggs and miracidia free of contaminating host tissues.</a> Parasitology. 115, 29-32 (1997).</li><li>Lewis, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+laboratory+maintenance+of+Schistosoma+mansoni,+with+observations+on+three+schistosome/snail+host+combinations.">Large-scale laboratory maintenance of Schistosoma mansoni, with observations on three schistosome/snail host combinations.</a> J. Parasitol. 72, 813-829 (1986).</li><li>Tilney, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patterns+of+lymphatic+drainage+in+the+adult+laboratory+rat.">Patterns of lymphatic drainage in the adult laboratory rat.</a> J. Anat. 109 (Pt. 3), 369-383 (1971).</li><li>Lewis, F., Coligan, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Schistosomiasis.">Schistosomiasis.</a> Current protocols in immunology. Chapter 19, Unit 19 (2001).</li><li>Kaplan, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Th2+cells+are+required+for+the+Schistosoma+mansoni+egg-induced+granulomatous+response.">Th2 cells are required for the Schistosoma mansoni egg-induced granulomatous response.</a> J. Immunol. 160, 1850-1856 (1998).</li><li>Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrotic+disease+and+the+T(H)1/T(H)2+paradigm.">Fibrotic disease and the T(H)1/T(H)2 paradigm.</a> Nat. Rev. Immunol. 4, 583-594 (2004).</li><li>Cheever, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variation+of+hepatic+fibrosis+and+granuloma+size+among+mouse+strains+infected+with+Schistosoma+mansoni.">Variation of hepatic fibrosis and granuloma size among mouse strains infected with Schistosoma mansoni.</a> Am. J. Trop. Med. Hyg. 37, 85-97 (1987).</li></ol>

Här är en modell som använder Schistosoma mansoni ägg för att framkalla typ 2 lunginflammation beskrivits. Kännetecknen för denna modell inkluderar potent Th2 immunsvar, luftvägsinflammation och pulmonell granulombildning. Eftersom dessa parametrar är beroende av CD4 Th2-cellsvar 11, är detta en användbar modell för att undersöka effekterna av protein-specifika eller härkomstspecifik deletioner på Th2-cellsvar. Här avläsning skulle omfatta kvantifiering av antigen-specifika Th2 cytok...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagens </td><td> Storlek / beskrivning </td><td> Företaget </td><td> Katalog # </td></tr><tr><td> Kollagenas / dispas </td><td> 500 mg </td><td> Roche Applied Science </td><td> 11 097 113 001 </td></tr><tr><td> Diff Quik Hema 3 Stain </td><td> Packa </td><td> Fisher Scientific Co LLC </td><td> 122-911 </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Flytande </td><td> Gibco </td><td> 11.965 </td></tr><tr><td> Falcon 50 ml </td><td> Packa </td><td> Falcon </td><td> 352.070 </td></tr><tr><td> Intramedic PE slang </td><td> 0,58 mm </td><td> Becton Dickinson and Co </td><td> 427.410 </td></tr><tr><td> Isofluran </td><td> 250 ml </td><td> Abbot Animal Health </td><td> 52600405 </td></tr><tr><td> Ketamin </td><td> 100 mg / ml </td><td> Fort Dodge, djurhälsa </TD&gt; <td> N / A </td></tr><tr><td> Mannosreceptorn antikropp </td><td> Biotin </td><td> ABD Serotec </td><td> MCA2235B </td></tr><tr><td> Metalliskt Sil </td><td> Standardkök sil </td><td> Målet </td><td> Laurentiis </td></tr><tr><td> Paraformaldehyd </td><td> 16% </td><td> Electron Microsc. Sciences </td><td> 15.710 </td></tr><tr><td> Penicillin / streptomycin </td><td> 100x </td><td> Gibco </td><td> 15.070 </td></tr><tr><td> PercoU </td><td> 1 Liter </td><td> GE Healthcare Biosciences </td><td> 17 0891 01 </td></tr><tr><td> RELMα antikropp </td><td> 50 | ig </td><td> Peprotech </td><td> 500-P214 </td></tr><tr><td> Kirurgisk tråd </td><td> 2,0 USP 100 yds </td><td> Kirurgiska specialiteter Corp </td><td> SP118 </td></tr><tr><td> Sprutnål </td><td> 23g, 3/4 tum </td><td> BD Vacutainer Lab. Med. </td><td>305.143 </td></tr><tr><td> USA Standard Testing Sieve </td><td> 150 | im, 0,0059 &quot; </td><td> WS Tyler, Inc. </td><td> ASTME-11, Spec. Nr 100 </td></tr><tr><td> Xylazin </td><td> 20 mg / ml </td><td> Butler </td><td> N / A </td></tr></tbody></table>

using eggs from schistosoma mansoni as an in vivo model of helminth-induced lung inflammation

Schistosoma parasiter är blodmaskar som infekterar uppskattningsvis 200 miljoner människor världen över 1. Vid kronisk infektion av Schistosoma, den allvarliga sjukdomstillstånd, inklusive leverfibros och splenomegali, orsakas av immunsvaret mot parasiten ägg snarare än själva parasiten 2. Parasit ägg inducera en Th2-respons kännetecknas av produktion av IL-4, IL-5 och IL-13, den alternativa aktivering av makrofager och rekryteringen av eosinofiler. Här beskriver vi injektion av Schistosoma mansoni ägg som en modell för att undersöka parasit-specifika Th2 cytokin svar i lungan och dränerande lymfkörtlar, bildandet av pulmonella granulom som omger ägget och luftvägsinflammation. Efter intraperitoneal sensibilisering och intravenös utmaning, S. mansoni ägg transporteras till lungorna via lungartärerna där de fångade i lungparenkymmed granulom består av lymfocyter, eosinofiler och alternativt aktiverade makrofager 3-6. Associerad med granulombildning, inflammation i bronko-alveolära utrymmena, T-cellaktivering expansion av de dränerande lymfkörtlarna och CD4 kan observeras. Här har vi detalj-protokollet för att isolera Schistosoma mansoni ägg från infekterade lever (modifierad från 7), sensibiliserande och utmanande möss och utvinna de organ (bronko-alveolära lavage (BAL), lung-och dränerande lymfkörtlar) för analys. Vi inkluderar även representativa histologisk och data immunologiska och förslag för ytterligare immunologisk analys. Totalt sett ger denna metod en in vivo modell för att undersöka helmint immunologiskt svar i lungan, som är brett tillämpbar på studiet av Th2 inflammatoriska sjukdomar inklusive helmintinfektion fibrotiska sjukdomar, allergisk inflammation och astma. Fördelar med denna modell för att studera type 2 inflammation i lungan innefattar reproducerbarheten av en potent Th2 inflammatorisk respons i lungorna och dränerande lymfkörtlar, lättheten för bedömning av inflammation genom histologisk undersökning av de granulom omger ägget, och potentialen för långtidslagring av parasiten ägg.

Watch this Scientific Journal Video about Using Eggs from Schistosoma mansoni as an In vivo Model of Helminth-induced Lung Inflammation at JoVE.com

Using Eggs from Schistosoma mansoni as an In vivo Model of Helminth-induced Lung Inflammation

Schistosoma mansoni ägg är potenta stimulatorer av T-hjälpar typ 2 (Th2) immunsvar som är karakteristisk för parasitinfektion, astma och allergisk inflammation. Detta protokoll använder S. mansoni ägg injektion för att generera en CD4 Th2-cytokin-inducerad inflammatorisk respons i lungorna, som kännetecknas av lungan granulombildning runt äggets, eosinofili och makrofag alternativ aktivering.

Använda ägg från<em&gt; Schistosoma mansoni</em&gt; Som en<em&gt; In vivo</em&gt; Modell av inälvsmask-lunginflammation

Schistosoma parasites are blood flukes that infect an estimated 200 million people worldwide 1. In chronic infection with Schistosoma, the severe ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using Eggs from Schistosoma mansoni as an In vivo Model of Helminth-induced Lung Inflammation

Cercarial Transformation and in vitro Cultivation of Schistosoma mansoni Schistosomules

Cercarial Transformation and in vitro Cultivation of Schistosoma mansoni Schistosomules

Cercarial Transformation och In vitro Odling av Schistosoma mansoni Schistosomules

Schistosome parasites are the causative agents of schistosomiasis, a chronically debilitating disease that affects over 200 million people globally and ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

Introduktion Shear stress i studien av bakteriell vidhäftning

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Facilitating Drug Discovery: An Automated High-content Inflammation Assay in Zebrafish

Underlätta Drug Discovery: En automatiserad hög halt Inflammation analys i zebrafisk

Zebrafish larvae are particularly amenable to whole animal small molecule screens1,2 due to their small size and relative ease of manipulation and ...

In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation

In vivo Imaging Method to Distinguish Acute and Chronic Inflammation

In vivo Imaging för att skilja akut och kronisk inflammation

Inflammation is a fundamental aspect of many human diseases. In this video report, we demonstrate non-invasive bioluminescence imaging techniques that ...

Influenza Virus Propagation in Embryonated Chicken Eggs

Influensa viruspropagering i embryonerade hönsägg

Influenza infection is associated with about 36,000 deaths and more than 200,000 hospitalizations every year in the United States. The continuous ...

An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen

En optimerad metod för att isolera och utöka Invariant Natural Killer T-celler från musmjälte

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells ...

Precision-cut Mouse Lung Slices to Visualize Live Pulmonary Dendritic Cells

Precision-cut Mouse Lung skivor att visualisera Live Pulmonary dendritiska celler

Inhalation of allergens and pathogens elicits multiple changes in a variety of immune cell types in the lung. Flow cytometry is a powerful technique for ...

Optical Screening of Novel Bacteria-specific Probes on Ex Vivo Human Lung Tissue by Confocal Laser Endomicroscopy

Optical Screening of Novel Bacteria-specific Probes on Ex Vivo Human Lung Tissue by Confocal Laser Endomicroscopy

Optiska Screening av nya bakterier-specifika sonder på Ex Vivo mänsklig lungvävnad av Confocal Laser Endomicroscopy

Improving the speed and accuracy of bacterial detection is important for patient stratification and to ensure the appropriate use of antimicrobials. To ...

Assessment of the Cytotoxic and Immunomodulatory Effects of Substances in Human Precision-cut Lung Slices

Bedömning av den cytotoxiska och immunmodulerande effekter av ämnen i Human Precision-cut Lung skivor

Respiratory diseases in their broad diversity need appropriate model systems to understand the underlying mechanisms and enable development of new ...

Isolation and Characterization of Extracellular Vesicles from Adult Schistosoma japonicum

Isolation and Characterization of Extracellular Vesicles from Adult Schistosoma japonicum

Isolering och karakterisering av extracellulära blåsor från Adult Schistosoma japonicum

Extracellular vesicles (EVs) are membranous vesicles released by a variety of cells into the extracellular microenvironment. EVs represent a population of ...