Name: affinity precipitation of active rho-gefs using a gst-tagged mutant rho protein (gst-rhoa(g17a)) from epithelial cell lysates
Uploaded: 2012-03-31T13:00:00
Duration: 11 min 28 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Affinity Precipitation of Active Rho-GEFs Using a GST-tagged Mutant Rho Protein GST-RhoAG17A from Epithelial Cell Lysates at JoVE.com

Эта работа финансируется Канадским институтом медицинских исследований (CIHR) (СС-97 774) и естественным наукам и инженерным исследованиям Совета Канады (NSERC, грант NR: 480619). KS является получателем премии KRESCENT Новый следователь (совместная награда Почечный Фонд Канады, Канадского общества нефрологии и Канадский институт исследований в области здравоохранения) и раннего премии исследователь из Онтарио Министерство исследований и инноваций. FW поддерживается Шинг стипендию Ли Ка.

<ol>
	<li>Jaffe, A. B., Hall, A. R. h. o. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GTPases:+biochemistry+and+biology.">GTPases: biochemistry and biology.</a> Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 21, 247-269 (2005).</li><li>Rossman, K. L., Der, C. J., Sondek, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GEF+means+go:+turning+on+RHO+GTPases+with+guanine+nucleotide-exchange+factors.">GEF means go: turning on RHO GTPases with guanine nucleotide-exchange factors.</a> Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 6, 167-180 (2005).</li><li>Arthur, W. T., Ellerbroek, S. M., Der, C. J., Burridge, K., Wennerberg, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=XPLN,+a+guanine+nucleotide+exchange+factor+for+RhoA+and+RhoB,+but+not+RhoC.">XPLN, a guanine nucleotide exchange factor for RhoA and RhoB, but not RhoC.</a> J. Biol. Chem. 277, 42964-42972 (2002).</li><li>Garcia-Mata, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+activated+GAPs+and+GEFs+in+cell+lysates.">Analysis of activated GAPs and GEFs in cell lysates.</a> Methods Enzymol. 406, 425-437 (2006).</li><li>Kakiashvili, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GEF-H1+Mediates+Tumor+Necrosis+Factor-{alpha}-induced+Rho+Activation+and+Myosin+Phosphorylation:+role+in+the+regulation+of+tubular+paracellular+permeability.">GEF-H1 Mediates Tumor Necrosis Factor-{alpha}-induced Rho Activation and Myosin Phosphorylation: role in the regulation of tubular paracellular permeability.</a> J. Biol. Chem. 284, 11454-11466 (2009).</li><li>Waheed, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+signal+regulated+kinase+and+GEF-H1+mediate+depolarization-induced+Rho+activation+and+paracellular+permeability+increase.">Extracellular signal regulated kinase and GEF-H1 mediate depolarization-induced Rho activation and paracellular permeability increase.</a> Am. J. Physiol. Cell Physiol. , (2010).</li><li>Kakiashvili, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epidermal+growth+factor+receptor+mediates+tumor+necrosis+factor-alpha-induced+activation+of+the+ERK/GEF-H1/RhoA+pathway+in+tubular+epithelium.">The epidermal growth factor receptor mediates tumor necrosis factor-alpha-induced activation of the ERK/GEF-H1/RhoA pathway in tubular epithelium.</a> J. Biol. Chem. 286, 9268-9279 (2011).</li><li>Garcia-Mata, R., Burridge, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Catching+a+GEF+by+its+tail.">Catching a GEF by its tail.</a> Trends Cell Biol. 17, 36-43 (2007).</li><li>Dubash, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+small+GTPase+RhoA+localizes+to+the+nucleus+and+is+activated+by+Net1+and+DNA+damage+signals.">The small GTPase RhoA localizes to the nucleus and is activated by Net1 and DNA damage signals.</a> PLoS One. 6, e17380-e17380 (2011).</li><li>Guilluy, G., Dubash, A. D., Garc&#237;a-Mata, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+RhoA+and+Rho+GEF+activity+in+whole+cells+and+the+cell+nucleus.">Analysis of RhoA and Rho GEF activity in whole cells and the cell nucleus.</a> Nature Protocols. , (2011).</li><li>Guilluy, C., Swaminathan, V., Garcia-Mata, R., O'Brien, E. T., Superfine, R., Burridge, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Rho+GEFs+LARG+and+GEF-H1+regulate+the+mechanical+response+to+force+on+integrins.">The Rho GEFs LARG and GEF-H1 regulate the mechanical response to force on integrins.</a> Nature Cell Biology. 13, 722-727 (2011).</li><li>Dubash, A. D., Wennerberg, K., Garcia-Mata, R., Menold, M. M., Arthur, W. T., Burridge, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+role+for+Lsc/p115+RhoGEF+and+LARG+in+regulating+RhoA+activity+downstream+of+adhesion+to+fibronectin.">A novel role for Lsc/p115 RhoGEF and LARG in regulating RhoA activity downstream of adhesion to fibronectin.</a> J. Cell Sci. 120, 3989-3998 (2007).</li><li>Arthur, W. T., Ellerbroek, S. M., Der, C. J., Burridge, K., Wennerberg, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=XPLN,+a+guanine+nucleotide+exchange+factor+for+RhoA+and+RhoB,+but+not+RhoC.">XPLN, a guanine nucleotide exchange factor for RhoA and RhoB, but not RhoC.</a> J. Biol. Chem. 277, 42964-42972 (2002).</li></ol>

Авторы не имеют ничего раскрывать.

Метод, представленные здесь, только нерадиоактивных активации тест для GEFs, которые могут следовать активного пула GEFs в клетках. Анализ похож на осадки анализов для следующей активации малых ГТФаз а также GEFs против Rac и Cdc42. Эти тесты используются различные GST-меченных белков и имеют незначительные отличия от описанной здесь, однако основные шаги, то же самое. Таким образом, этот протокол можно легко адаптировать для других малых ГТФ и анализы ГЭФ активации. Представленный анализ ГЭФ был недавно модифицирован для приложений для ядерной фракции 9,10. С последующими изменениями, тестирование ГЭФ активации в других субклеточных отделения также может быть возможным. Мы используем представлен метод для изучения активации GEFs в эпителиальных клеточных линий 5,6,7. С некоторой оптимизации этого анализа должны быть достаточными для обнаружения GEFs любой клеточной линии. Когда adaptiнг к определенному типу клетки, найти оптимальное количество клеток, объем лизис буфера, а метод обнаружения для ГЭФ для тестирования (хороший антител для западных промокательной важно). Для первоначальной настройки анализа целесообразно использовать стимул, который, как известно, активировать ГЭФ интерес. При использовании неизвестные стимулы, всегда использовать положительный контроль чтобы убедиться, что тест работает. Этот анализ может быть использован для обнаружения активации известно GEFs западными блоттинга. Тем не менее, это также адекватный для выявления неизвестных GEFs. Для этого, захваченные GEFs от управления и стимулировать пробы должны быть проанализированы на Кумасси окрашенного геля. Группы, которые появляются только при вынужденном образцы могут содержать активированный GEFs и могут быть отправлены для идентификации масс-спектрометрии (например, 5). Наконец, предупреждение. Анализ основан на предположении, что посттрансляционной модификации оказание GEFs активных сохраняются после лизиса клеток. В самом деле, это, несомненно, является приблизительносебе в течение нескольких GEFs, и с момента его учреждения, этого анализа были использованы различные группы для выявления активации различных GEFs, в том числе ГЭФ-H1, p115RhoGEF и XPLN (например, 5,11,12,13). Сохранение в активное состояние, однако, не может произойти в случае всех GEFs и, следовательно, можно предположить, что этот анализ не будет работать для всех GEFs. Следует также отметить, что многие GEFs оказывать активность по отношению к более чем одной маленькой GTPases. Таким образом, когда конкретные ГЭФ изучается, рекомендуется дополнить этот анализ с ГЭФ осадков анализов для других малых ГТФаз, а также функциональных исследований по изучению RhoA, Rac1 и Cdc42. Критические шаги в протоколе: Колонии бактерий превращаются должны быть получены из свежего, должным образом подготовленные пластины для обеспечения адекватной выбор усилителей, хороший результат и выход. Преобразование условий для компетентных клеток, полученных из других источников, могут различаться и должны быть проведены консультации. </p&gt; Все шаги протокола белкового препарата (с шагом 2.3) и анализа (с шагом 3.2) следует проводить при температуре 4 ° C с охлаждением решений и центрифуг. Бактериальные лизис (шаг 2.5) должно быть тщательным и полным для получения однородной суспензии. Когда лизировать бактерии, вихревые и пипетировать лизат поочередно, сохраняя его на 4 ° C и обеспечивает ультразвука происходит на льду для предотвращения денатурации белка. Если вы используете другую модель sonicator, условия, возможно, должны быть скорректированы. Инкубация разрушать ультразвуком с бисером всегда должно быть сделано при 4 ° С на поворотное устройство, чтобы обеспечить достаточное обязательным, и следует проявлять осторожность, чтобы сохранить времени последовательно. GST-Ро мутантов несколько неустойчивой, выраженных в бактерии, поэтому лучше пользоваться готовыми бисером сразу или в течение нескольких дней. Осадков анализа (Часть 3) время и чувствительны к температуре,активное GEFs можно легко потерять из ячейки лизат, поэтому шаги должны быть выполнены как можно быстрее. Следующий раздел содержит некоторые неисправностей советы. Нет или очень низкое количество мутантных Rho белка в конечном шарик подготовки: Это может быть вызвано неэффективной индукции, недостаточно лизис бактерий, или потеря белка в процессе приготовления или хранения. Для устранения некоторых из этих возможностей, образцы бактерий могут быть проанализированы до и после индукции. Если есть плохой индукции белка повторить этот процесс с помощью колонию из свежих прожилками плита или повторно преобразованы компетентных клеток. Различные концентрации и индукции IPTG раз должны быть проверены. Если лизис недостаточно (например, белок остается в осадке, а супернатант) различные соли и моющих средств концентрация в буфере для лизиса может быть судим. Альтернативные раз ультразвука иНастройки должны быть рассмотрены и образцов до и после обработки ультразвуком можно проверить с помощью микроскопа, чтобы определить эффективность лизиса. Не осаждали ГЭФ, хотя GST-белок присутствует в бисер: Это может быть связано с техническими вопросами при анализе осадков, или реальное отсутствие активации изучаемого ГЭФ помощью раздражитель. Всегда используйте известный стимул в качестве положительного контроля, чтобы убедиться, что тест работает. Используйте подготовленную бисер в течение нескольких дней. Если осадков анализ фиксирует обнаружить количество ГЭФ учился в любых условиях, убедитесь, что ГЭФ является настоящим и хорошо прощупывается в супернатант после центрифугирования, который будет использоваться для анализа (шаг 3.3). Убедитесь, что все буферы и ингибиторы протеазы являются новыми, а также осуществлять все шаги на льду как можно быстрее. Увеличение количества входных белка (например, с помощью лизатов от 2 пластины / образец). Если анализ показывает, осадков базальной скачкоtation вашего ГЭФ, но разница видна между контролем и стимулировать образцов (рис. 4), начните диагностику с проверки того, что применяемые стимулы работает с использованием других известных эффектов (например, обнаружение активации других сигнальных путей). Рассмотрим изменения условий лечения и / или концентрации. Положитесь на литературные данные отчетности, как ваш стимул активирует Rho или другой сигнализации, чтобы предсказать, как будет время и концентрации. При оптимизации времени обработки, используйте короткие и длинные периоды времени, как ГЭФ активации может быть лучше обнаружить на момент времени до и обнаружить активацию Rho. Наконец, тот же раздражитель может привести к различной степени активации в связи с изменением в ячейке реакции вызваны пассаж, сотовые слияния и т.д.

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Компания </td><td> Номер по каталогу </td><td> Комментарии (опционально) </td></tr><tr><td> pGEX-RhoA (G17A) </td><td> Addgene </td><td> Будет доступно в ближайшее время </td><td> Создания в лаборатории д-р Кейт Burridge (Университет Северной Каролины) (ссылка 3) </td></tr><tr><td> DH5α </td><td> Invitrogen </td><td> 18258-012 </td><td> Магазин -80 ° C </td></tr><tr><td> SOC среднего </td><td> BioShop </td><td> SOC001.10 </td><td></td></tr><tr><td> LB </td><td> BioShop </td><td> LBL407.1 </td><td> Держите стерильный </td></tr><tr><td> Глицерин </td><td> BioShop </td><td> GLY002.1 </td><td></td></tr><tr><td> Ампициллин </td><td> BioShop </td><td> AMP201.25 </td><td> Хранить запасы при температуре -20 ° C </td></tr><tr><td> Агар </td><td> BioShop </td><td> AGR001.500 </td><td></td></tr><tr><td> IPTG (IsoBD-пропил-thiogalacto pyranoside) </td><td> Calbio биохимия </td><td> 420322 </td><td> Магазин маточного раствора при температуре -20 ° C </td></tr><tr><td> Глутатион сефарозы бисера </td><td> GE Healthcare </td><td> 17-0756-01 </td><td></td></tr><tr><td> PBS 10x </td><td> SIGMA </td><td> D1408 </td><td></td></tr><tr><td> Hepes </td><td> SIGMA </td><td> H4034 </td><td></td></tr><tr><td> NaCl </td><td> BioShop </td><td> SOD001.10 </td><td></td></tr><tr><td> MgCl 2 </td><td> SIGMA </td><td> M-9272 </td><td> Добавить только перед использованием </td></tr><tr><td> TX-100 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> X100 </td><td></td></tr><tr><td> DVB-T </td><td> OmniPur EMD </td><td> 3860 </td><td> Добавить только перед использованием </td></tr><tr><td> PMSF </td><td> SIGMA </td><td> P-7626 </td><td> Добавить только перед использованием </td></tr><tr><td> Ингибитор протеазы 50x </td><td> BD Baculo-Gold </td><td> 51-21426Z </td><td> Добавить только перед использованием </td></tr><tr&gt; <td> Полное Mini, EDTA без 10x </td><td> Roche </td><td> 11 836 170 001 </td><td> Добавить только перед использованием </td></tr><tr><td> Laemmli Пример буфера 2x </td><td> Bio-Rad </td><td> 161-0737 </td><td></td></tr><tr><td> β-меркаптоэтанол </td><td> SIGMA </td><td> M7154 </td><td> Добавить только перед использованием </td></tr><tr><td> Кумасси бриллиантовый синий </td><td> Bio-Rad </td><td> R-250 </td><td></td></tr><tr><td> Уксусная кислота </td><td> Каледон </td><td> 1000-1 </td><td></td></tr><tr><td> Метанол </td><td> Каледон </td><td> 6701-7 </td><td></td></tr><tr><td> Bio-Rad белка Пробирной </td><td> Bio-Rad </td><td> 500-0114 </td><td></td></tr><tr><td> BLUeye лестницы </td><td> FroggaBio </td><td> PM008-0500 </td><td></td></tr></tbody></table> Таблица 1. Реагенты используются. <table border="1"><tbody><tr><td> Наименование оборудования </td><td> Компания </td&gt; <td> Номер по каталогу </td><td> Комментарии (опционально) </td></tr><tr><td> RC-5B центрифуги </td><td> Sorvall </td><td> SS-34 Ротор </td><td> Использование при температуре 4 ° C </td></tr><tr><td> Центрифугировать </td><td> Sorvall-Thermo Scientific </td><td> ST-16R </td><td> Использование при температуре 4 ° C </td></tr><tr><td> Micro центрифуги </td><td> Эппендорф </td><td> 5417R </td><td> Использование при температуре 4 ° C </td></tr><tr><td> Бактериальные шейкер </td><td> INFORS HT Ecotron </td><td> AG CH-1403 Bottmingen </td><td> Использование при 37 ° C или 22 ° C </td></tr><tr><td> Sonicator </td><td> Брэнсон </td><td> Sonifier-450 </td><td> Использование при комнатной температуре </td></tr><tr><td> Поворотное устройство </td><td> Glas-Col </td><td> 099A CR4012 </td><td> Использование при температуре 4 ° C </td></tr></tbody></table> Таблица 2. Конкретные оборудование используется.

affinity precipitation of active rho-gefs using a gst-tagged mutant rho protein (gst-rhoa(g17a)) from epithelial cell lysates

Белки семейства Rho малого GTPases являются центральными регуляторами цитоскелета, и контролировать большое количество разнообразных клеточных процессов, в том числе миграции клеток, экспрессия генов, прогрессию клеточного цикла и клеточной адгезии 1. Ро белки молекулярных переключателей, которые принимают активное участие в GTP-связанными и неактивны в ВВП связанном состоянии. Их активация опосредуется семьи Гуанин нуклеотидов бирже фактор (ГЭФ) белков. Ро-GEFs составляют большую семью, с перекрытием особенности 2. Несмотря на значительный прогресс был достигнут в выявлении GEFs активируются определенные сигналы, есть еще много вопросов, остающихся в отношении конкретных путей регулирования этих белков. Число Ро-GEFs превышает 70, и каждая клетка выражает более одного ГЭФ белка. Кроме того, многие из этих белков не только активировать Rho, но и других членов семьи, что способствует дальнейшему сложности регуляторных сетей. Важно отметить, что исследованиеКак GEFs регулируются требует метод следовать активного пула отдельных GEFs в клетках активируются различные стимулы. Здесь мы предлагаем шаг за шагом протокола метод, используемый для определения и количественной оценки имеющихся активных Rho конкретных GEFs с использованием анализа близости осадков. Этот тест был разработан несколько лет назад в лаборатории Burridge 3,4, и мы использовали его в почках трубчатых клеточных линиях 5,6,7. Анализ использует &quot;нуклеотидных бесплатно&quot; мутант RhoA, с высоким сродством к активной GEFs. Мутация (G17A) оказывает белок не в состоянии связать ВВП или ГТФ, и это состояние имитирует промежуточное состояние, связанное с ГЭФ. GST с тегами версии этого мутантного белка выражается и очищается от E. палочки, связанных с глутатион сефарозе бисером и использовали для осаждения активного GEFs из лизатов необработанных и стимулированных клеток. Как и большинство GEFs активируется через посттрансляционной модификации или освобождения от тормозных креплений, их активное состояниесохраняется в клеточных лизатов, и они могут быть обнаружены с помощью этого анализа 8. Захваченные белки могут быть проверены на наличие известных GEFs путем выявления специфических антител с использованием западных промокательной или проанализированы масс-спектрометрии для идентификации неизвестных GEFs активируются определенные стимулы.

Watch this Scientific Journal Video about Affinity Precipitation of Active Rho-GEFs Using a GST-tagged Mutant Rho Protein GST-RhoAG17A from Epithelial Cell Lysates at JoVE.com

Affinity Precipitation of Active Rho-GEFs Using a GST-tagged Mutant Rho Protein GST-RhoAG17A from Epithelial Cell Lysates

Метод, представленные здесь описывается анализ следовать активации RhoA конкретных ВВП / GTP Факторы биржи (GEFs) в культуре клеток путем использования мутантов RhoA стоимость гибридного белка, который имеет высокое сродство к активированный GEFs. GEFs осаждаются из клеточных лизатов, обнаруженные западными блоттинга и количественно денситометрии.

Affinity осадков активного Rho-GEFs Использование GST с метками Мутант Rho белка (GST-RhoA (G17A)) из эпителиальных клеточные лизаты

Proteins of the Rho family of small GTPases are central regulators of the cytoskeleton, and control a large variety of cellular processes, including cell ...

Research

JoVE Journal

Biology

Affinity Precipitation of Active Rho-GEFs Using a GST-tagged Mutant Rho Protein (GST-RhoA(G17A)) from Epithelial Cell Lysates

Isolation of Labile Multi-protein Complexes by in vivo Controlled Cellular Cross-Linking and Immuno-magnetic Affinity Chromatography

Isolation of Labile Multi-protein Complexes by in vivo Controlled Cellular Cross-Linking and Immuno-magnetic Affinity Chromatography

Выделение лабильной Multi-белковые комплексы по В естественных условиях Контролируемые Сотовая сшивания и иммуно-магнитного аффинной хроматографии

The dynamic nature of cellular machineries is frequently built on transient and/or weak protein associations. These low affinity interactions preclude ...

Bimolecular Fluorescence Complementation (BiFC) Assay for Protein-Protein Interaction in Onion Cells Using the Helios Gene Gun

Bimolecular Fluorescence Complementation BiFC Assay for Protein-Protein Interaction in Onion Cells Using the Helios Gene Gun

Бимолекулярные флуоресценции комплементации (BiFC) Пробирной для белок-белковые взаимодействия в Лук ячеек с использованием генной пушки Helios

Investigation of gene function in diverse organisms relies on knowledge of how the gene products interact with each other in their normal cellular ...

Blue Native Polyacrylamide Gel Electrophoresis (BN-PAGE) for Analysis of Multiprotein Complexes from Cellular Lysates

Blue Native Polyacrylamide Gel Electrophoresis BN-PAGE for Analysis of Multiprotein Complexes from Cellular Lysates

Синий Родные электрофореза в полиакриламидном геле (BN-PAGE) для анализа Multiprotein Комплексы из ячеистого Лизаты

Multiprotein complexes (MPCs) play a crucial role in cell signalling, since most proteins can be found in functional or regulatory complexes with other ...

Lipid Vesicle-mediated Affinity Chromatography using Magnetic Activated Cell Sorting (LIMACS): a Novel Method to Analyze Protein-lipid Interaction

Lipid Vesicle-mediated Affinity Chromatography using Magnetic Activated Cell Sorting LIMACS: a Novel Method to Analyze Protein-lipid Interaction

Липидов везикул-опосредованной аффинной хроматографии с использованием магнитных Активированный сортировки клеток (LIMACS): новый метод для анализа Белково-липидные взаимодействия

The analysis of lipid protein interaction is difficult because lipids are embedded in cell membranes and therefore, inaccessible to most purification ...

Chromatographic Purification of Highly Active Yeast Ribosomes

Хроматографической очистки высокоактивной рибосомы дрожжей

Eukaryotic ribosomes are much more labile as compared to their eubacterial and archael counterparts, thus posing a significant challenge to researchers.  ...

Orthogonal Protein Purification Facilitated by a Small Bispecific Affinity Tag

Ортогональные очистки белков Ведущий: Малый Биспецифичные тегов Affinity

Due to the high costs associated with purification of recombinant proteins the protocols need to be rationalized. For high-throughput efforts there is a ...

Identification of Protein Interacting Partners Using Tandem Affinity Purification

Идентификация белка взаимодействие партнеров, используя тандем аффинной очистки

A critical and often limiting step in understanding the function of host and viral proteins is the identification of interacting cellular or viral protein ...

A Liquid Phase Affinity Capture Assay Using Magnetic Beads to Study Protein-Protein Interaction: The Poliovirus-Nanobody Example

Жидкая фаза Affinity Capture методом с использованием магнитных шариков по изучению белок-белковые взаимодействия: Полиовирус-нанотела Пример

In this article, a simple, quantitative, liquid phase affinity capture assay is presented. Provided that one protein can be tagged and another protein ...

A Protocol for Phage Display and Affinity Selection Using Recombinant Protein Baits

Протокол для фагов и Affinity выделение с помощью рекомбинантного белка Приманки

Using  recombinant phage as a scaffold to present various protein portions encoded by  a directionally cloned cDNA library to immobilized bait molecules ...

Transgenic Rodent Assay for Quantifying Male Germ Cell Mutant Frequency

Трансгенные грызунов Анализ на Количественная мужской половой клетки Частота мутантного

De novo mutations arise mostly in the male germline and may contribute to adverse health outcomes in subsequent generations. Traditional methods for ...