Name: oct4gip reporter assay to study genes that regulate mouse embryonic stem cell maintenance and self-renewal
Uploaded: 2012-05-30T13:00:00
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हम पढ़ने और पांडुलिपि संपादन ब्रैड Lackford के लिए धन्यवाद. इस शोध पर्यावरणीय स्वास्थ्य विज्ञान, स्वास्थ्य अंदर का अनुसंधान कार्यक्रम Z01ES102745 के राष्ट्रीय संस्थान (GH) के राष्ट्रीय संस्थान द्वारा समर्थित किया गया.

1. Oct4GiP माउस ES सेल रखरखाव Oct4GiP कोशिकाओं कृपया डा. ऑस्टिन स्मिथ द्वारा प्रदान की गई है. वे 129/Ola Oct4 - GFPiresPac 4,5 transgene ले चूहों से प्राप्त किए गए. वे जिलेटिन में लिपटे ऊतक संस्कृति प्लेटों में ESGRO पूर्ण प्लस clona...

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	<li>Keller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+stem+cell+differentiation:+emergence+of+a+new+era+in+biology+and+medicine.">Embryonic stem cell differentiation: emergence of a new era in biology and medicine.</a> Genes Dev. 19, 1129-1155 (2005).</li><li>Murry, C. E., Keller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differentiation+of+embryonic+stem+cells+to+clinically+relevant+populations:+lessons+from+embryonic+development.">Differentiation of embryonic stem cells to clinically relevant populations: lessons from embryonic development.</a> Cell. 132, 661-680 (2008).</li><li>Hu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genome-wide+RNAi+screen+identifies+a+new+transcriptional+module+required+for+self-renewal.">A genome-wide RNAi screen identifies a new transcriptional module required for self-renewal.</a> Genes Dev. 23, 837-848 (2009).</li><li>Ying, Q. L., Nichols, J., Evans, E. P., Smith, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changing+potency+by+spontaneous+fusion.">Changing potency by spontaneous fusion.</a> Nature. 416, 545-548 (2002).</li><li>Ying, Q. L., Smith, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defined+conditions+for+neural+commitment+and+differentiation.">Defined conditions for neural commitment and differentiation.</a> Methods Enzymol. 365, 327-341 (2003).</li><li>Nichols, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+pluripotent+stem+cells+in+the+mammalian+embryo+depends+on+the+POU+transcription+factor+Oct4.">Formation of pluripotent stem cells in the mammalian embryo depends on the POU transcription factor Oct4.</a> Cell. 95, 379-391 (1998).</li><li>Niwa, H., Miyazaki, J., Smith, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+expression+of+Oct-3/4+defines+differentiation,+dedifferentiation+or+self-renewal+of+ES+cells.">Quantitative expression of Oct-3/4 defines differentiation, dedifferentiation or self-renewal of ES cells.</a> Nat. Genet. 24, 372-376 (2000).</li><li>Ding, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+genome-scale+RNAi+screen+for+Oct4+modulators+defines+a+role+of+the+Paf1+complex+for+embryonic+stem+cell+identity.">A genome-scale RNAi screen for Oct4 modulators defines a role of the Paf1 complex for embryonic stem cell identity.</a> Cell Stem Cell. 4, 403-415 (2009).</li><li>Chambers, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+expression+cloning+of+Nanog,+a+pluripotency+sustaining+factor+in+embryonic+stem+cells.">Functional expression cloning of Nanog, a pluripotency sustaining factor in embryonic stem cells.</a> Cell. 113, 643-655 (2003).</li><li>Masui, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pluripotency+governed+by+Sox2+via+regulation+of+Oct3/4+expression+in+mouse+embryonic+stem+cells.">Pluripotency governed by Sox2 via regulation of Oct3/4 expression in mouse embryonic stem cells.</a> Nat. Cell Biol. 9, 625-635 (2007).</li><li>Mitsui, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+homeoprotein+Nanog+is+required+for+maintenance+of+pluripotency+in+mouse+epiblast+and+ES+cells.">The homeoprotein Nanog is required for maintenance of pluripotency in mouse epiblast and ES cells.</a> Cell. 113, 631-642 (2003).</li><li>Fazzio, T. G., Huff, J. T., Panning, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+RNAi+screen+of+chromatin+proteins+identifies+Tip60-p400+as+a+regulator+of+embryonic+stem+cell+identity.">An RNAi screen of chromatin proteins identifies Tip60-p400 as a regulator of embryonic stem cell identity.</a> Cell. 134, 162-174 (2008).</li><li>Pease, S., Braghetta, P., Gearing, D., Grail, D., Williams, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+embryonic+stem+(ES)+cells+in+media+supplemented+with+recombinant+leukemia+inhibitory+factor.">Isolation of embryonic stem (ES) cells in media supplemented with recombinant leukemia inhibitory factor.</a> 141, 344-352 (1990).</li><li>Young, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+the+embryonic+stem+cell+state.">Control of the embryonic stem cell state.</a> Cell. 144, 940-954 (2011).</li><li>Chambers, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanog+safeguards+pluripotency+and+mediates+germline+development.">Nanog safeguards pluripotency and mediates germline development.</a> Nature. 450, 1230-1234 (2007).</li><li>Maherali, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directly+reprogrammed+fibroblasts+show+global+epigenetic+remodeling+and+widespread+tissue+contribution.">Directly reprogrammed fibroblasts show global epigenetic remodeling and widespread tissue contribution.</a> Cell Stem Cell. 1, 55-70 (2007).</li><li>Rodda, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+regulation+of+nanog+by+OCT4+and+SOX2.">Transcriptional regulation of nanog by OCT4 and SOX2.</a> J. Biol. Chem. 280, 24731-24737 (2005).</li><li>Schaniel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delivery+of+short+hairpin+RNAs--triggers+of+gene+silencing--into+mouse+embryonic+stem+cells.">Delivery of short hairpin RNAs--triggers of gene silencing--into mouse embryonic stem cells.</a> Nat. Methods. 3, 397-400 (2006).</li><li>Toyooka, Y., Shimosato, D., Murakami, K., Takahashi, K., Niwa, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+subpopulations+in+undifferentiated+ES+cell+culture.">Identification and characterization of subpopulations in undifferentiated ES cell culture.</a> Development. 135, 909-918 (2008).</li></ol>

Oct4GiP संवाददाता परख हम ऊपर वर्णन मात्रात्मक आत्म नवीकरण बनाम भेदभाव की हद उपाय कर सकते हैं. आकृति विज्ञान के आधार पर 12 और प्रसार / व्यवहार्यता - आधारित assays के रूप में अन्य उपलब्ध तरीकों की तुलना में, यह उ?...

<table border="1"><tbody><tr><td> अभिकर्मक का नाम </td><td> कंपनी </td><td> सूचीपत्र संख्या </td></tr><tr><td> ESGRO पूर्ण प्लस clonal ग्रेड मध्यम </td><td> Millipore </td><td> SF001-500P </td></tr><tr><td> DMEM (उच्च 1X ग्लूकोज) </td><td> Invitrogen </td><td> +११,९६५ </td></tr><tr><td> 0.25% trypsin - EDTA </td><td> Invitrogen </td><td> 25,200 </td></tr><tr><td> 2000 lipofectamine </td><td> Invitrogen </td><td> 1001817 </td></tr><tr><td> OPTI-सदस्य (सीरम मध्यम को कम) </td><td> Invitrogen </td><td> 31,985 </td></tr><tr><td> ESGRO mLIF (7 units/1ml 10) </td><td> Millipore </td><td> DAM1776540 </td></tr><tr><td> सदस्य NEAA (गैर आवश्यक अमीनो एसिड) </td><td> Invitrogen </td><td> +११,१४० </td></tr><tr><td> ES सेल के लिए 100x nucleosides </td><td> Millipore </td><td> 10,620-1 </td&gt; </tr><tr><td> 2 mercaptoethanol </td><td> सिग्मा </td><td> M7522-100ml </td></tr><tr><td> ES - योग्य भ्रूण गोजातीय सीरम </td><td> Invitrogen </td><td> 10,437 </td></tr><tr><td> Nanog siRNA को </td><td> Invitrogen </td><td> MSS231181 </td></tr><tr><td> Oct4 siRNA को </td><td> Dharmacon </td><td> डी - 046,256 - 02 </td></tr><tr><td> Sox2 siRNA को </td><td> Dharmacon </td><td> एम +०५८४८९-01 </td></tr></tbody></table> नियंत्रण siRNA को siRNA जुगनू luciferase (5&#39;-CGTACGCGGAATACTTCGA) के Dharamcon द्वारा संश्लेषित लक्ष्यीकरण द्वैध.

oct4gip reporter assay to study genes that regulate mouse embryonic stem cell maintenance and self-renewal

Pluripotency और आत्म नवीकरण भ्रूण स्टेम कोशिकाओं के दो परिभाषित विशेषताओं (ES कोशिकाओं) कर रहे हैं. अंतर्निहित आणविक तंत्र को समझना बहुत विकास जीव विज्ञान के अध्ययन, रोग मॉडलिंग, दवाओं की खोज, और पुनर्योजी चिकित्सा 1,2 में समीक्षा के लिए ES कोशिकाओं के उपयोग की सुविधा होगी. और ES सेल के रखरखाव और आत्म नवीकरण के उपन्यास नियामकों की पहचान और लक्षण वर्णन में तेजी लाने के लिए, हम एक प्रतिदीप्ति संवाददाता आधारित के मात्रात्मक माउस ES Oct4GiP कोशिकाओं 3 का उपयोग कोशिकाओं में आत्म नवीकरण स्थिति को मापने परख विकसित किया है. Oct4GiP कोशिकाओं Oct4 जीन प्रमोटर 4,5 क्षेत्र के नियंत्रण के तहत हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन (GFP) व्यक्त करते हैं. Oct4 ES सेल आत्म नवीकरण के लिए आवश्यक है, और अत्यधिक ES कोशिकाओं में व्यक्त और 6,7 भेदभाव के दौरान जल्दी से नीचे विनियमित. एक परिणाम के रूप में, GFP और रिपोर्टर कोशिकाओं में अभिव्यक्ति प्रतिदीप्ति ईमानदारी से संबद्धES सेल 5 पहचान, और प्रतिदीप्ति सक्रिय सेल छँटाई (FACS) के साथ विश्लेषण करने के लिए निकट एकल कक्ष 3,8 स्तर पर कोशिकाओं आत्म नवीकरण की स्थिति पर नजर रखने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. आरएनएआई के साथ युग्मित, Oct4GiP संवाददाता परख करने के लिए जल्दी पहचान और ES सेल के रखरखाव और 3,8 आत्म नवीकरण के नियामकों का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. आत्म नवीकरण परख करने की क्रिया के लिए अन्य तरीकों की तुलना में, यह अधिक सुविधाजनक, संवेदनशील, मात्रात्मक, और कम लागत की है. यह 96 में बाहर ले सकते हैं - या के रूप में उच्च throughput स्क्रीन या आनुवंशिक epistasis विश्लेषण के बड़े पैमाने पर अध्ययन के लिए प्लेट 384 अच्छी तरह से. अंत में, अन्य वंश विशेष संवाददाता ES सेल लाइनों का उपयोग करके, परख हम यहाँ वर्णन भी ES सेल भेदभाव के दौरान भाग्य विनिर्देश का अध्ययन करने के लिए संशोधित किया जा सकता है.

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Oct4GiP Reporter Assay to Study Genes that Regulate Mouse Embryonic Stem Cell Maintenance and Self-renewal

हम एक प्रतिदीप्ति परख रिपोर्टर को जल्दी पहचान और जीन है कि माउस भ्रूणीय स्टेम सेल के रखरखाव और आत्म नवीकरण को विनियमित विशेषताएँ वर्णन है.

Oct4GiP रिपोर्टर परख अध्ययन जीन है कि माउस भ्रूणीय स्टेम सेल रखरखाव और स्व - नवीकरण विनियमन

Pluripotency and self-renewal are two defining characteristics of embryonic stem cells (ES cells). Understanding the underlying molecular mechanism will ...

Research

JoVE Journal

Biology

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

Murine भ्रूण स्टेम कोशिकाओं से hematopoietic स्टेम सेल की व्युत्पत्ति

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं के Immunosurgery द्वारा व्युत्पत्ति

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

In vitro and in vivo Bioluminescence Reporter Gene Imaging of Human Embryonic Stem Cells

इन विट्रो में और vivo में मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं के bioluminescence रिपोर्टर जीन इमेजिंग में

The discovery of human embryonic stem cells (hESCs) has dramatically increased the tools available to medical scientists interested in regenerative ...

Culture and Maintenance of Human Embryonic Stem Cells  

संस्कृति और मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं के रखरखाव

Human embryonic stem (hES) cells must be monitored and cared for in order to maintain healthy, undifferentiated cultures. At minimum, the cultures must be ...

The use of SC1 (Pluripotin) to Support mESC Self-renewal in the Absence of LIF

The use of SC1 Pluripotin to Support mESC Self-renewal in the Absence of LIF

SC1 (Pluripotin) का उपयोग LIF की अनुपस्थिति में स्वयं नवीकरण mESC समर्थन

Mouse embryonic stem (ES) cells are conventionally cultured with Leukemia Inhibitory Factor (LIF) to maintain self-renewal.1 However, LIF is expensive and ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

अलगाव और माउस भ्रूणीय कीटाणु कक्ष की व्युत्पत्ति

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...

Whole-mount Immunohistochemical Analysis for Embryonic Limb Skin Vasculature: a Model System to Study Vascular Branching Morphogenesis in Embryo

पूरे माउंट भ्रूणीय अंग त्वचा vasculature के लिए immunohistochemical विश्लेषण: एक मॉडल प्रणाली के अध्ययन भ्रूण में संवहनी शाखाओं में बंटी morphogenesis

Whole-mount immunohistochemical analysis for imaging the entire vasculature is pivotal for understanding the cellular mechanisms of branching ...

Modified Mouse Embryonic Stem Cell based Assay for Quantifying  Cardiogenic Induction Efficiency

संशोधित हृदयजनित प्रेरण क्षमता बढ़ाता के लिए माउस भ्रूणीय स्टेम सेल आधारित परख

Differentiation of pluripotent stem cells is tightly controlled by temporal and spatial regulation of multiple key signaling pathways.  One of the hurdles ...

Chromatin Immunoprecipitation Assay for Tissue-specific Genes using Early-stage Mouse Embryos

ऊतक विशिष्ट प्रारंभिक चरण माउस भ्रूण का उपयोग जीन के लिए chromatin immunoprecipitation परख

Chromatin immunoprecipitation (ChIP) is a powerful tool to identify protein:chromatin interactions that occur in the context of living cells 1-3. This ...

Generation of Mice Derived from Induced Pluripotent Stem Cells

प्रेरित pluripotent स्टेम सेल से व्युत्पन्न चूहों की पीढ़ी

The production of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from somatic cells provides a means to create valuable tools for basic research and may also ...