Name: the &alpha;-test: rapid cell-free cd4 enumeration using whole saliva
Uploaded: 2012-05-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Î±-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva at JoVE.com

Het onderzoek werd ondersteund door de Harry Winston Research Foundation.

1. Bereid verse Werken Solutions <ol><li> TBS: 0,05 M Tris gebufferde zoutoplossing, pH 7,8 (TBS). Bereid 60 ml TBS / microplaat. </li><li> PPE: Varkens pancreas elastase, type 1 (PPE) wordt geleverd als een suspensie. Goed schudden en verdunnen PPE in TBS tot ongeveer 0,01 U / ml. Bereid 6 ml werkoplossing / microplaat). </li><li> SA 3 NA: succinyl-Ala-L-L-Ala-L-Ala-p-nitroanilide (SA 3 NA). Bereid 0,1 M voorraad SA 3 NA oplossing in ...

<ol>
	<li>Friedlander, Y., Kark, J. D., Eisenberg, S., Stein, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calculation+of+LDL-cholesterol+from+total+cholesterol,+triglyceride+and+HDL-cholesterol:+a+comparison+of+methods+in+the+Jerusalem+Lipid+Research+Clinic+Prevalence+Study.">Calculation of LDL-cholesterol from total cholesterol, triglyceride and HDL-cholesterol: a comparison of methods in the Jerusalem Lipid Research Clinic Prevalence Study.</a> Isr. J. Med. Sci. 18, 1242-1252 (1982).</li><li>Lapidot, T., Petit, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+understanding+of+stem+cell+mobilization:+The+roles+of+chemokines,+proteolytic+enzymes,+adhesion+molecules,+cytokines,+and+stromal+cells.">Current understanding of stem cell mobilization: The roles of chemokines, proteolytic enzymes, adhesion molecules, cytokines, and stromal cells.</a> Exp. Hematol. 30, 973-981 (2002).</li><li>Bristow, C. L., Alfano, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#945;1Antitrypsin+therapy+increases+CD4++lymphocytes+to+normal+values+in+HIV-1+patients.">&#945;1Antitrypsin therapy increases CD4+ lymphocytes to normal values in HIV-1 patients.</a> Soluble factors mediating innate immune responses to HIV infection. , (2010).</li><li>Bristow, C. L., Patel, H., Arnold, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self+antigen+prognostic+for+human+immunodeficiency+virus+disease+progression.">Self antigen prognostic for human immunodeficiency virus disease progression.</a> Clin. Diagn. Lab. Immunol. 8, 937-942 (2001).</li><li>Bristow, C. L., Babayeva, M. A., LaBrunda, M., Mullen, M. P., Winston, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#945;1Proteinase+Inhibitor+regulates+CD4++lymphocyte+levels+and+is+rate+limiting+in+HIV-1+disease.">&#945;1Proteinase Inhibitor regulates CD4+ lymphocyte levels and is rate limiting in HIV-1 disease.</a> PLoS One. , (2011).</li><li>de Almeida, P. D. V., Gregio, A. M. T., Machado, M. A. N., de Lima, A. A. S., Azevedo, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Saliva+Composition+and+Functions:+A+Comprehensive+Review.">Saliva Composition and Functions: A Comprehensive Review.</a> J. Contemp. Dent. Pract. 9, 72-80 (2008).</li><li>Edgar, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Saliva:+its+secretion,+composition+and+funcitons.">Saliva: its secretion, composition and funcitons.</a> Br. Dent. J. , 172-305 (1992).</li><li>Bristow, C. L., Meo, F. d. i., Arnold, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+activity+of+&#945;1proteinase+inhibitor+and+++2macroglobulin+in+human+serum:+Application+to+insulin-dependent+diabetes+mellitus.">Specific activity of &#945;1proteinase inhibitor and 2macroglobulin in human serum: Application to insulin-dependent diabetes mellitus.</a> Clin. Immunol. Immunopathol. 89, 247-259 (1998).</li><li>Pederson, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salivary+levels+of+&#945;2-macroglobulin,+&#945;1-antitrypsin,+C-reactive+protein,+cathepsin+G+and+elastase+in+humans+with+or+without+destructive+periodontal+disease.">Salivary levels of &#945;2-macroglobulin, &#945;1-antitrypsin, C-reactive protein, cathepsin G and elastase in humans with or without destructive periodontal disease.</a> Arch. Oral Biol. 40, 1151-1155 (1995).</li><li>Shak, S., Capon, D. J., Hellmiss, R., Marsters, S. A., Baker, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recombinant+human+DNase+I+reduces+the+viscosity+of+cystic+fibrosis+sputum.">Recombinant human DNase I reduces the viscosity of cystic fibrosis sputum.</a> PNAS. 87, 9188-9192 (1990).</li><li>LeVeque, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multicenter,+randomized,+double-blind,+placebo-controlled,+dose-+titration+study+of+oral+pilocarpine+for+treatment+of+radiation-induced+xerostomia+in+head+and+neck+cancer+patients.">A multicenter, randomized, double-blind, placebo-controlled, dose- titration study of oral pilocarpine for treatment of radiation-induced xerostomia in head and neck cancer patients.</a> J. Clin. Oncol. 11, 1124-1131 (1993).</li><li>Stevens, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+new+CD4+enumeration+technologies+for+resource-constrained+countries.">Evaluating new CD4 enumeration technologies for resource-constrained countries.</a> Nat. Rev. Microbiol. 6, S29-S38 (2008).</li><li>WHO. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> 2010 ART guidelines for adults and adolescents - evidence map. , (2010).</li></ol>

Onverdund serum bevat mediaan 36 uM α 1 PI en 3,6 uM α 2 macroglobuline (α 2 M) een 10-voudig verschil 8. Beide eiwitten concurreren voor binding aan PPE. Deze twee karakteristieken, concentratie en PPE affiniteit zijn gebruikt om een methode die kan specifiek gemeten α 1 PI in normale serum in de aanwezigheid van concurrerende α 2 M 8 ontwikkelen. Deze methode kan detecteren slechts 50 nM μ een PI 0,3% serum. Bij een serum ver...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het serum </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td></tr><tr><td> Sialogogue, 0,05 M citroenzuur </td><td> Sugarfree Candies Eda&#39;s, 4900 achter N.20th Street, Philadelphia, PA 19144 </td><td> Sugar-Free zuurtjes </td></tr><tr><td> Varkens pancreas elastase, type 1 (EC 3.4.21.36) </td><td> Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63103 </td><td> E1250 </td></tr><tr><td> Succinyl-Ala-L-L-Ala-L-Ala-p-nitroanilide </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S4760 </td></tr><tr><td> Coomassie Brilliant Blue R-250 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> B7920 </td></tr><tr><td> Weefselkweek behandeld, 96 well microtiterplaten </td><td> Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ 07417-1886 </td><td> 35-3072 </td></tr><tr><td> Microplaat lezer met filters 405 nm en 595 nm </td><td> MTX Lab Systems, 8456 Tyco Road, Building D, Wenen, Virginia 22182 </td><td> Dynex P97277 </td></tr></tbody></table>

the &alpha;-test: rapid cell-free cd4 enumeration using whole saliva

Er is dringend behoefte aan betaalbare CD4-telling aan HIV-ziekte te controleren. CD4-telling buiten bereik is in gebieden met beperkte middelen de regio&#39;s als gevolg van de tijd en temperatuur beperkingen, technische verfijning, en de kosten van reagentia, in het bijzonder monoklonale antilichamen tegen CD4 op bloedcellen, de enige op dit moment aanvaardbare methode te meten. Een veelgebruikt kostenbesparende en tijdbesparende laboratorium strategie is om te berekenen in plaats van maatregel bepaalde bloedwaarden. Bijvoorbeeld, LDL berekend met de gemeten concentraties van totaal cholesterol, HDL en triglyceriden 1. Zo, de identificatie van celvrij correlaten die direct reguleren van het aantal CD4 + T-cellen kan een nauwkeurige methode voor de berekening van CD4 bieden telt als gevolg van de fysiologische relevantie van de correlaten. Het aantal van stamcellen die bloed in en zijn bestemd om circulerende CD4 + T-cellen bepaald door de chemokine CXCL12 eennd zijn receptor CXCR4 als gevolg van hun invloed op de motoriek 2. Het proces van stamcellen beweging in bloed wordt bovendien geregeld celoppervlak menselijk leukocyt elastase (HLE CS) en HLE CS reactieve actieve α een proteinase inhibitor (α 1 PI, α 1-antitrypsine, SerpinA1) 3. In de HIV-1-en vaatziekten, is α 1 PI geïnactiveerd als gevolg van ziekte-processen 4. In de vroege asymptomatische categorieën HIV-1 ziekte, werd actieve α 1 PI bevonden dan normaal in 100% van de onbehandelde met HIV-1 (mediane = 12 pM en normale te bereiken gedurende de symptomatische type 4, 5. Deze patroon is toegeschreven aan het immuunsysteem inactivering niet voldoende synthese proteolytische inactivering of zuurstof. Waargenomen werd dat in HIV-1 patiënten met&gt; 220 CD4-cellen / ul, CD4 gecorreleerd met serumconcentraties actieve α 1 PI (r 2 = 0,93, p &amp;lt; 0,0001, n = 26) en niet-actieve α 1 PI (r 2 = 0,91, p &lt;0,0001, n = 26) 5. Toediening van α 1 PI aan HIV-1 geïnfecteerde en niet-geïnfecteerde patiënten resulteerde in een dramatische toename van CD4-tellingen suggereren α 1 PI neemt deel in het reguleren van het aantal CD4 + T-cellen in het bloed 3. Met stimulatie, hele speeksel bevat voldoende sereuze exsudaat (plasma met eiwitmateriaal dat door middel van de bloedvatwanden gaat over in speeksel) om het meten van de actieve α 1 PI en de correlatie van deze meting is het bewijs dat het een accurate methode voor de berekening van CD4-tellingen. In het kort, sialogogues zoals kauwgom of citroenzuur stimuleren de afscheiding van serum in hele mond speeksel. Na stimuleren serum exudatie, wordt de activiteit van serum α 1 PI in speeksel gemeten door zijn vermogen om elastase activiteit remmen. Varkens pancreas elastase (PPE)een beschikbaar goedkope bron van elastase. PPE bindt aan een PI α die een-op-een complex PPE voorkomt splitsen zijn specifieke substraten, waarvan de colorimetrische peptide, succinyl-Ala-L-L-Ala-L-Ala-p-nitroanilide (SA 3 NA). Incuberen speeksel met een verzadigende concentratie PPE gedurende 10 min bij kamertemperatuur kan de binding van PPE alle actieve α 1 PI in speeksel. De resulterende remming van PPE door actieve α 1 PI kan worden gemeten door de PPE substraat SA 3 NA. (Figuur 1). Hoewel CD4 gemeten bloedvolume (CD4-cellen / pl), wordt de concentratie van α 1 PI in speeksel betrekking tot de concentratie van serum in speeksel, niet het volume van speeksel sinds deel aanzienlijk kan variëren overdag persoon tot persoon 6. Echter vrijwel alle eiwit in speeksel door serum inhoud en het eiwitgehalte van speeksel measurable 7. Zo wordt actief α 1 PI in het speeksel berekend als een percentage van het speeksel eiwitgehalte en wordt aangeduid als de α 1 PI Index. De resultaten die hierin aan te tonen dat de α 1 PI Index een accurate en nauwkeurige fysiologische methode voor de berekening van CD4-tellingen biedt.

Watch this Scientific Journal Video about The Î±-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva at JoVE.com

The &#945;-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

Een opsomming CD4 methode de α-test wordt beschreven waarbij gebruik geheel speeksel snelle en accurate CD4-tellingen. De α-test kost centen en elimineert de behoefte aan technische opleidingen, dure reagentia zoals monoklonale antilichamen, instrumentatie, koeling, het vervoer van monsters, maar ook het verzamelen en behandelen van bloed.

De α-test: Rapid Celvrije CD4 Enumeration met hele Speeksel

There is an urgent need for affordable CD4 enumeration to monitor HIV disease. CD4 enumeration is out of reach in resource-limited regions due to the time ...

Research

JoVE Journal

Medicine

The &alpha;-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&#946; using a Whole Blood Stimulation Assay

Nauwkeurige en eenvoudige meting van de pro-inflammatoire cytokine IL-1β met behulp van een volbloed stimulatie Assay

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood

Snelle Point-of-Care test van Enoxaparine anticoagulans werkzaamheid in volbloed

There is the need for a clinical assay to determine the extent to which a patient's blood is effectively anticoagulated by the ...

Sampling Human Indigenous Saliva Peptidome Using a Lollipop-Like Ultrafiltration Probe: Simplify and Enhance Peptide Detection for Clinical Mass Spectrometry

Bemonstering Human Inheemse Speeksel peptidoom Met behulp van een Lollipop-Like Ultrafiltratie Probe: vereenvoudigen en te verbeteren Peptide Detection voor Klinische massaspectrometrie

Although human saliva proteome and peptidome have been revealed 1-2 they were majorly identified from tryptic digests of saliva proteins. Identification ...

Collection and Extraction of Saliva DNA for Next Generation Sequencing

En extractie van speeksel DNA voor Next Generation Sequencing

The preferred source of DNA in human genetics research is blood, or cell lines derived from blood, as these sources yield large quantities of high quality ...

Rapid Fractionation and Isolation of Whole Blood Components in Samples Obtained from a Community-based Setting

Snelle Fractionering en isolatie van volbloed componenten in monsters verkregen van een communautair gevestigde instelling

Collection and processing of whole blood samples in a non-clinical setting offers a unique opportunity to evaluate community-dwelling individuals both ...

Assessment of the Anticoagulant and Anti-inflammatory Properties of Endothelial Cells Using 3D Cell Culture and Non-anticoagulated Whole Blood

Beoordeling van de anticoagulatie en anti-inflammatoire eigenschappen van endotheliale cellen met behulp van 3D-celkweek en niet-vertonen volbloed

In vivo, endothelial cells are crucial for the natural anticoagulation of circulating blood. Consequently, endothelial cell activation leads to blood ...

Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method

Schatting van het Nephron aantal in hele nieren met behulp van de zure methode

Nephron endowment refers to the total number of nephrons an individual is born with, as nephrogenesis in humans is completed by 36 weeks of gestation and ...

Rapid Evaluation of Toxicity of Chemical Compounds Using Zebrafish Embryos

Snelle evaluatie van de toxiciteit van chemische verbindingen met behulp van zebravis embryo's

The zebrafish is a widely used vertebrate model organism for the disease and phenotype-based drug discovery. The zebrafish generates many offspring, has ...

Rapid Viscoelastic Characterization of Airway Mucus Using a Benchtop Rheometer

Snelle visco-elastische karakterisering van luchtwegslijm met behulp van een benchtop-reometer

In muco-obstructive lung diseases (e.g., asthma, chronic obstructive pulmonary disease, cystic fibrosis) and other respiratory conditions (e.g., ...

Whole-Kidney Three-Dimensional Staining with CUBIC

Whole-Kidney Driedimensionale Kleuring met CUBIC

Although conventional pathology provided numerous information about kidney microstructure, it was difficult to know the precise structure of blood ...