Name: the &alpha;-test: rapid cell-free cd4 enumeration using whole saliva
Uploaded: 2012-05-16T13:00:00
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La ricerca è stata sostenuta dal Harry Winston Research Foundation.

1. Preparare freschi soluzioni di lavoro <ol><li> TBS: 0,05 M Tris Buffered Saline, pH 7.8 (TBS). Preparare 60 ml TBS / micropiastra. </li><li> PPE: elastasi pancreatica suina, di tipo 1 (PPE) viene fornito come sospensione. Agitare bene e diluire DPI in TBS a circa 0,01 U / ml. Preparare 6 ml soluzione di lavoro / micropiastra). </li><li> SA 3 NA: succinil-L-Ala-L-Ala-L-Ala-p-nitroanilide (SA 3 NA). Preparare 0,1 M magazzino SA 3 solu...

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	<li>Friedlander, Y., Kark, J. D., Eisenberg, S., Stein, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calculation+of+LDL-cholesterol+from+total+cholesterol,+triglyceride+and+HDL-cholesterol:+a+comparison+of+methods+in+the+Jerusalem+Lipid+Research+Clinic+Prevalence+Study.">Calculation of LDL-cholesterol from total cholesterol, triglyceride and HDL-cholesterol: a comparison of methods in the Jerusalem Lipid Research Clinic Prevalence Study.</a> Isr. J. Med. Sci. 18, 1242-1252 (1982).</li><li>Lapidot, T., Petit, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+understanding+of+stem+cell+mobilization:+The+roles+of+chemokines,+proteolytic+enzymes,+adhesion+molecules,+cytokines,+and+stromal+cells.">Current understanding of stem cell mobilization: The roles of chemokines, proteolytic enzymes, adhesion molecules, cytokines, and stromal cells.</a> Exp. Hematol. 30, 973-981 (2002).</li><li>Bristow, C. L., Alfano, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#945;1Antitrypsin+therapy+increases+CD4++lymphocytes+to+normal+values+in+HIV-1+patients.">&#945;1Antitrypsin therapy increases CD4+ lymphocytes to normal values in HIV-1 patients.</a> Soluble factors mediating innate immune responses to HIV infection. , (2010).</li><li>Bristow, C. L., Patel, H., Arnold, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self+antigen+prognostic+for+human+immunodeficiency+virus+disease+progression.">Self antigen prognostic for human immunodeficiency virus disease progression.</a> Clin. Diagn. Lab. Immunol. 8, 937-942 (2001).</li><li>Bristow, C. L., Babayeva, M. A., LaBrunda, M., Mullen, M. P., Winston, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#945;1Proteinase+Inhibitor+regulates+CD4++lymphocyte+levels+and+is+rate+limiting+in+HIV-1+disease.">&#945;1Proteinase Inhibitor regulates CD4+ lymphocyte levels and is rate limiting in HIV-1 disease.</a> PLoS One. , (2011).</li><li>de Almeida, P. D. V., Gregio, A. M. T., Machado, M. A. N., de Lima, A. A. S., Azevedo, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Saliva+Composition+and+Functions:+A+Comprehensive+Review.">Saliva Composition and Functions: A Comprehensive Review.</a> J. Contemp. Dent. Pract. 9, 72-80 (2008).</li><li>Edgar, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Saliva:+its+secretion,+composition+and+funcitons.">Saliva: its secretion, composition and funcitons.</a> Br. Dent. J. , 172-305 (1992).</li><li>Bristow, C. L., Meo, F. d. i., Arnold, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+activity+of+&#945;1proteinase+inhibitor+and+++2macroglobulin+in+human+serum:+Application+to+insulin-dependent+diabetes+mellitus.">Specific activity of &#945;1proteinase inhibitor and 2macroglobulin in human serum: Application to insulin-dependent diabetes mellitus.</a> Clin. Immunol. Immunopathol. 89, 247-259 (1998).</li><li>Pederson, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salivary+levels+of+&#945;2-macroglobulin,+&#945;1-antitrypsin,+C-reactive+protein,+cathepsin+G+and+elastase+in+humans+with+or+without+destructive+periodontal+disease.">Salivary levels of &#945;2-macroglobulin, &#945;1-antitrypsin, C-reactive protein, cathepsin G and elastase in humans with or without destructive periodontal disease.</a> Arch. Oral Biol. 40, 1151-1155 (1995).</li><li>Shak, S., Capon, D. J., Hellmiss, R., Marsters, S. A., Baker, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recombinant+human+DNase+I+reduces+the+viscosity+of+cystic+fibrosis+sputum.">Recombinant human DNase I reduces the viscosity of cystic fibrosis sputum.</a> PNAS. 87, 9188-9192 (1990).</li><li>LeVeque, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multicenter,+randomized,+double-blind,+placebo-controlled,+dose-+titration+study+of+oral+pilocarpine+for+treatment+of+radiation-induced+xerostomia+in+head+and+neck+cancer+patients.">A multicenter, randomized, double-blind, placebo-controlled, dose- titration study of oral pilocarpine for treatment of radiation-induced xerostomia in head and neck cancer patients.</a> J. Clin. Oncol. 11, 1124-1131 (1993).</li><li>Stevens, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+new+CD4+enumeration+technologies+for+resource-constrained+countries.">Evaluating new CD4 enumeration technologies for resource-constrained countries.</a> Nat. Rev. Microbiol. 6, S29-S38 (2008).</li><li>WHO. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> 2010 ART guidelines for adults and adolescents - evidence map. , (2010).</li></ol>

Non diluito siero contiene mediana 36 uM α 1 PI e 3,6 uM α 2 macroglobulina (α 2 M) una differenza di 10 volte 8. Entrambe le proteine ​​competono per il legame ai DPI. Queste due caratteristiche, concentrazione e PPE affinità, sono stati sfruttati per sviluppare un metodo che sia in grado di misurare specificamente α 1 PI nel siero normale in presenza di competere α 2 M 8. Questo metodo in grado di rilevare un minimo di 50 μ nM <sub...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reattivo </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td></tr><tr><td> Sialogogue, 0,05 M di acido citrico </td><td> Eda di Caramelle Sugarfree, 4900 posteriore N.20th Street, Philadelphia, PA 19144 </td><td> Sugar-gratuiti gocce di limone </td></tr><tr><td> Suini elastasi pancreatica, di tipo 1 (EC 3.4.21.36) </td><td> Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63103 </td><td> E1250 </td></tr><tr><td> Succinil-L-Ala-L-Ala-L-Ala-p-nitroanilide </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S4760 </td></tr><tr><td> Coomassie Brilliant Blue R-250 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> B7920 </td></tr><tr><td> Di coltura di tessuti trattati con micropiastre, 96 e </td><td> Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ 07417-1886 </td><td> 35-3072 </td></tr><tr><td> Lettore per micropiastre con filtri per 405 nm e 595 nm </td><td> MTX Systems Lab, 8456 Tyco Road, Building D, Vienna, Virginia 22182 </td><td> Dynex P97277 </td></tr></tbody></table>

the &alpha;-test: rapid cell-free cd4 enumeration using whole saliva

Vi è un urgente bisogno di conteggio CD4 a prezzi accessibili per monitorare la malattia da HIV. Conteggio CD4 è fuori portata nelle regioni a causa del tempo e le limitazioni di temperatura, sofisticazione tecnica, e il costo dei reagenti risorse limitate, in particolare per misurare gli anticorpi monoclonali CD4 sulle cellule del sangue, l&#39;unico metodo attualmente accettabile. Un laboratorio comunemente utilizzati risparmio di costi e risparmio di tempo strategia è quella di calcolare, piuttosto che i valori ematici certa misura. Per esempio, livelli di LDL sono calcolati utilizzando i livelli misurati di colesterolo totale, HDL, e trigliceridi 1. Pertanto, l&#39;identificazione di cellule libere correlati che regolano direttamente il numero di cellule T CD4 + potrebbe fornire un metodo preciso per calcolare CD4 per l&#39;importanza fisiologica dei correlati. Il numero di cellule staminali che entrano sangue e sono destinate a diventare circolanti cellule CD4 + T è determinata dalla chemiochina uno CXCL12nd suo recettore CXCR4 per la loro influenza sulla locomozione 2. Il processo di locomozione di cellule staminali nel sangue viene ulteriormente regolata dalla cellula umana superficie dei leucociti elastasi (HLE CS) e la CS-reattivo HLE attivo α 1 inibitore della proteinasi (α 1 PI, α 1 antitripsina, SerpinA1) 3. In malattia da HIV-1, α 1 PI è inattivato a causa di processi patologici 4. Nei primi categorie asintomatici di HIV-1 malattia, attiva α 1 PI è risultata inferiore normale in 100% di non trattati pazienti HIV-1 (mediana = 12 pM, e per ottenere livelli normali durante le categorie sintomatici 4, 5. Questo modello è stata attribuita a inattivazione immune, non alla sintesi insufficiente, inattivazione proteolitica, o ossigenazione. Abbiamo osservato che in HIV-1 soggetti con&gt; 220 cellule CD4 / microlitro, CD4 sono stati correlati con i livelli sierici di accesso α 1 PI (r 2 = 0.93, p &amp;lt; 0.0001, n = 26) e gli inattivi α 1 PI (r 2 = 0.91, p &lt;0.0001, n = 26) 5. La somministrazione di α 1 PI per HIV-1 i soggetti infetti e non infetti portato a un drastico incremento nella conta dei CD4 suggeriscono α 1 PI partecipa alla regolazione del numero di cellule T CD4 + nel sangue 3. Con la stimolazione, la saliva contiene tutto sufficiente essudato sieroso (plasma contenente materiale proteico che passa attraverso le pareti dei vasi sanguigni nella saliva) per consentire la misurazione delle attività α 1 PI e la correlazione di questa misura è la prova che si tratta di un metodo preciso per calcolare il numero di CD4. Brevemente, sialogogues come gomma da masticare o acido citrico stimolare l&#39;essudazione di siero in saliva intera bocca. Dopo stimolando essudazione siero, l&#39;attività di siero α 1 PI in saliva è misurata dalla sua capacità di inibire l&#39;attività elastasi. Suina elastasi pancreatica (PPE)è facilmente disponibile una fonte economica di elastasi. PPE lega α 1 PI formando uno-a-uno complesso che impedisce PPE di scindere i suoi substrati specifici, uno dei quali è il peptide colorimetriche, succinil-L-Ala-L-Ala-L-Ala-p-nitroanilide (SA 3 NA). Incubazione saliva con una concentrazione di saturazione di PPE per 10 min a temperatura ambiente consente il legame di PPE a tutti attivo α 1 PI nella saliva. L&#39;inibizione di PPE risultante dalla attivo α 1 PI può essere misurata aggiungendo il substrato PPE SA 3 NA. (Figura 1). Sebbene CD4 sono misurate in termini di volume di sangue (cellule CD4 / pl), la concentrazione di α 1 PI nella saliva è correlata alla concentrazione di siero in saliva, non al volume di saliva dal volume può variare notevolmente durante il giorno e persona a persona 6. Tuttavia, quasi tutte le proteine ​​nella saliva è dovuto al contenuto di siero, e il contenuto di proteine ​​della saliva è measurable 7. Così, attivo α 1 PI in saliva viene calcolato come rapporto al contenuto proteico e saliva viene chiamata α 1 Index PI. I risultati qui presentati dimostrano che la α 1 Index PI fornisce un metodo accurato e preciso fisiologico per il calcolo CD4.

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The ÃƒÅ½Ã‚Â±-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

Un metodo enumerazione CD4, la α-test, viene descritto che utilizza saliva intera per fornire rapidi e precisi conta di CD4. Le α-test centesimi i costi ed elimina la necessità di una formazione tecnica, reagenti costosi come gli anticorpi monoclonali, strumentazione, refrigerazione, trasporto dei campioni, nonché di raccolta e trattamento del sangue.

La α-test: Rapid cell-free CD4 Enumeration Uso Saliva Whole

There is an urgent need for affordable CD4 enumeration to monitor HIV disease. CD4 enumeration is out of reach in resource-limited regions due to the time ...

Research

JoVE Journal

Medicine

The &alpha;-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1ÃƒÅ½Ã‚Â² using a Whole Blood Stimulation Assay

Misurazione accurata e semplice della citochina pro-infiammatoria IL-1β utilizzando un intero saggio stimolazione del sangue

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

Ricerca

Medicina

Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood

Rapid Point-of-Care test di efficacia anticoagulante Enoxaparina nel sangue intero

There is the need for a clinical assay to determine the extent to which a patient's blood is effectively anticoagulated by the ...

Sampling Human Indigenous Saliva Peptidome Using a Lollipop-Like Ultrafiltration Probe: Simplify and Enhance Peptide Detection for Clinical Mass Spectrometry

Campionamento umana peptidoma Indigenous Saliva Utilizzando un Lollipop-Like Probe ultrafiltrazione: Semplificare e migliorare la rilevazione Peptide per spettrometria di massa Clinica

Although human saliva proteome and peptidome have been revealed 1-2 they were majorly identified from tryptic digests of saliva proteins. Identification ...

Collecting Saliva and Measuring Salivary Cortisol and Alpha-amylase in Frail Community Residing Older Adults via Family Caregivers

Salivary measures have emerged in bio-behavioral research  that are easy-to-collect, minimally invasive, and relatively inexpensive  biologic markers of ...

Collection and Extraction of Saliva DNA for Next Generation Sequencing

Raccolta ed estrazione di Saliva DNA per il sequenziamento di nuova generazione

The preferred source of DNA in human genetics research is blood, or cell lines derived from blood, as these sources yield large quantities of high quality ...

Rapid Fractionation and Isolation of Whole Blood Components in Samples Obtained from a Community-based Setting

Frazionamento rapida e isolamento dei componenti sangue intero in campioni ottenuti da una impostazione basata su Comunità

Collection and processing of whole blood samples in a non-clinical setting offers a unique opportunity to evaluate community-dwelling individuals both ...

An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

Un metodo migliore per Rapid intubazione della trachea nei topi

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

Assessment of the Anticoagulant and Anti-inflammatory Properties of Endothelial Cells Using 3D Cell Culture and Non-anticoagulated Whole Blood

Valutazione delle proprietà anticoagulanti e anti-infiammatori delle cellule endoteliali mediante coltura cellulare 3D e Non intero anticoagulato

In vivo, endothelial cells are crucial for the natural anticoagulation of circulating blood. Consequently, endothelial cell activation leads to blood ...

Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method

Stima del numero di Nephron in rene intero utilizzando il metodo di macerazione acida

Nephron endowment refers to the total number of nephrons an individual is born with, as nephrogenesis in humans is completed by 36 weeks of gestation and ...

Rapid Evaluation of Toxicity of Chemical Compounds Using Zebrafish Embryos

Rapida valutazione della tossicità dei composti chimici utilizzando gli embrioni di pesce zebra

The zebrafish is a widely used vertebrate model organism for the disease and phenotype-based drug discovery. The zebrafish generates many offspring, has ...