Name: the &alpha;-test: rapid cell-free cd4 enumeration using whole saliva
Uploaded: 2012-05-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The ÃŽÂ±-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva at JoVE.com

Forskning som stöds av Harry Winston Research Foundation.

1. Förbered Färska Fungerande lösningar <ol><li> TBS: 0,05 M Tris-buffrad saltlösning, pH 7,8 (TBS). Framställ 60 ml TBS / mikroplatta. </li><li> PPE: Porcint pankreatiskt elastas, typ 1 (PPE) är anordnad som en suspension. Skaka väl och späd PPE i TBS till cirka 0,01 U / ml. Framställ 6 ml arbetslösning / mikroplatta). </li><li> SA 3 NA: succinyl-L-Ala-L-Ala-L-Ala-p-nitroanilid (SA 3 NA). Framställa 0,1 M stamlösning SA 3 ...

<ol>
	<li>Friedlander, Y., Kark, J. D., Eisenberg, S., Stein, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calculation+of+LDL-cholesterol+from+total+cholesterol,+triglyceride+and+HDL-cholesterol:+a+comparison+of+methods+in+the+Jerusalem+Lipid+Research+Clinic+Prevalence+Study.">Calculation of LDL-cholesterol from total cholesterol, triglyceride and HDL-cholesterol: a comparison of methods in the Jerusalem Lipid Research Clinic Prevalence Study.</a> Isr. J. Med. Sci. 18, 1242-1252 (1982).</li><li>Lapidot, T., Petit, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+understanding+of+stem+cell+mobilization:+The+roles+of+chemokines,+proteolytic+enzymes,+adhesion+molecules,+cytokines,+and+stromal+cells.">Current understanding of stem cell mobilization: The roles of chemokines, proteolytic enzymes, adhesion molecules, cytokines, and stromal cells.</a> Exp. Hematol. 30, 973-981 (2002).</li><li>Bristow, C. L., Alfano, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#945;1Antitrypsin+therapy+increases+CD4++lymphocytes+to+normal+values+in+HIV-1+patients.">&#945;1Antitrypsin therapy increases CD4+ lymphocytes to normal values in HIV-1 patients.</a> Soluble factors mediating innate immune responses to HIV infection. , (2010).</li><li>Bristow, C. L., Patel, H., Arnold, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self+antigen+prognostic+for+human+immunodeficiency+virus+disease+progression.">Self antigen prognostic for human immunodeficiency virus disease progression.</a> Clin. Diagn. Lab. Immunol. 8, 937-942 (2001).</li><li>Bristow, C. L., Babayeva, M. A., LaBrunda, M., Mullen, M. P., Winston, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#945;1Proteinase+Inhibitor+regulates+CD4++lymphocyte+levels+and+is+rate+limiting+in+HIV-1+disease.">&#945;1Proteinase Inhibitor regulates CD4+ lymphocyte levels and is rate limiting in HIV-1 disease.</a> PLoS One. , (2011).</li><li>de Almeida, P. D. V., Gregio, A. M. T., Machado, M. A. N., de Lima, A. A. S., Azevedo, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Saliva+Composition+and+Functions:+A+Comprehensive+Review.">Saliva Composition and Functions: A Comprehensive Review.</a> J. Contemp. Dent. Pract. 9, 72-80 (2008).</li><li>Edgar, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Saliva:+its+secretion,+composition+and+funcitons.">Saliva: its secretion, composition and funcitons.</a> Br. Dent. J. , 172-305 (1992).</li><li>Bristow, C. L., Meo, F. d. i., Arnold, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+activity+of+&#945;1proteinase+inhibitor+and+++2macroglobulin+in+human+serum:+Application+to+insulin-dependent+diabetes+mellitus.">Specific activity of &#945;1proteinase inhibitor and 2macroglobulin in human serum: Application to insulin-dependent diabetes mellitus.</a> Clin. Immunol. Immunopathol. 89, 247-259 (1998).</li><li>Pederson, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salivary+levels+of+&#945;2-macroglobulin,+&#945;1-antitrypsin,+C-reactive+protein,+cathepsin+G+and+elastase+in+humans+with+or+without+destructive+periodontal+disease.">Salivary levels of &#945;2-macroglobulin, &#945;1-antitrypsin, C-reactive protein, cathepsin G and elastase in humans with or without destructive periodontal disease.</a> Arch. Oral Biol. 40, 1151-1155 (1995).</li><li>Shak, S., Capon, D. J., Hellmiss, R., Marsters, S. A., Baker, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recombinant+human+DNase+I+reduces+the+viscosity+of+cystic+fibrosis+sputum.">Recombinant human DNase I reduces the viscosity of cystic fibrosis sputum.</a> PNAS. 87, 9188-9192 (1990).</li><li>LeVeque, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multicenter,+randomized,+double-blind,+placebo-controlled,+dose-+titration+study+of+oral+pilocarpine+for+treatment+of+radiation-induced+xerostomia+in+head+and+neck+cancer+patients.">A multicenter, randomized, double-blind, placebo-controlled, dose- titration study of oral pilocarpine for treatment of radiation-induced xerostomia in head and neck cancer patients.</a> J. Clin. Oncol. 11, 1124-1131 (1993).</li><li>Stevens, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+new+CD4+enumeration+technologies+for+resource-constrained+countries.">Evaluating new CD4 enumeration technologies for resource-constrained countries.</a> Nat. Rev. Microbiol. 6, S29-S38 (2008).</li><li>WHO. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> 2010 ART guidelines for adults and adolescents - evidence map. , (2010).</li></ol>

Outspätt serum innehåller median 36 pM α 1 PI och 3,6 | iM α 2 makroglobulin (α 2 M) en 10-faldig skillnad 8. Båda proteinerna att konkurrera för bindning till PPE. Dessa två egenskaper, koncentration och PPE affinitet, har utnyttjats för att utveckla en metod som är kapabel att specifikt mäta α 1 PI i normalt serum i närvaro av konkurrerande α 2 M 8. Denna metod kan detektera så lite som 50 nM μ 1 PI 0,3% serum. Vid ...

<table border="1"><tbody><tr><td> Namnet på reagens </td><td> Företaget </td><td> Katalognummer </td></tr><tr><td> Sialogog, 0,05 M citronsyra </td><td> EDA: s Sockerfri godis, 4900 Bakre N.20th Street, Philadelphia, PA 19.144 </td><td> Socker-Free Lemon droppar </td></tr><tr><td> Svinpankreaselastas, typ 1 (EG 3.4.21.36) </td><td> Sigma-Aldrich, St Louis, MO 63.103 </td><td> E1250 </td></tr><tr><td> Succinyl-L-Ala-L-Ala-L-Ala-p-nitroanilid </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S4760 </td></tr><tr><td> Coomassie Brilliant Blue R-250 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> B7920 </td></tr><tr><td> Vävnadskultur-behandlade, 96 och mikroplattor </td><td> Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ 07417-1886 </td><td> 35-3072 </td></tr><tr><td> Mikroplattläsare med filter för 405 nm och 595 nm </td><td> MTX Lab Systems, 8456 Tyco Road, Building D, Wien, Virginia 22.182 </td><td> Dynex P97277 </td></tr></tbody></table>

the &alpha;-test: rapid cell-free cd4 enumeration using whole saliva

Det finns ett akut behov av prisvärda CD4 räkning för att övervaka HIV-sjukdom. CD4 uppräkning är utom räckhåll i resurssvaga begränsade regioner på grund av den tid och restriktioner temperatur, avancerade teknik, och kostnader för reagenser, särskilt monoklonala antikroppar för att mäta CD4 på blodkropparna, den enda för närvarande acceptabel metod. Ett vanligt använt kostnadsbesparande och tidsbesparande laboratoriet strategi är att beräkna, snarare än mäta vissa blodvärden. Till exempel är LDL-nivåer beräknas med användning av de uppmätta nivåerna av totalt kolesterol, HDL och triglycerider 1. Sålunda räknar identifiering av cellfria korrelerar att direkt reglera antalet av CD4 + T-celler skulle kunna tillhandahålla en noggrann metod för beräkning av CD4 på grund av den fysiologiska relevansen av de korrelerar. Antalet stamceller som anger blod och är avsedda att bli cirkulerande CD4 +-T-celler bestäms av kemokin CXCL12 ennd dess receptor CXCR4 på grund av deras inverkan på rörelse 2. Förfarandet enligt stamceller förflyttning in i blod är dessutom regleras genom cellytan humant leukocytelastas (HLE CS) och HLE CS-reaktiv aktiv α 1-proteinasinhibitor (α 1 PI, α 1-antitrypsin, SerpinA1) 3. Hos HIV-1 sjukdom, α 1 PI inaktiveras på grund av sjukdomsprocesser 4. I början asymtomatiska kategorier av HIV-1 sjukdom, var aktiva α 1 PI visade sig vara under det normala i 100% av obehandlade HIV-1-patienter (median = 12 M, och för att uppnå normala nivåer under den symptomatiska kategorierna 4, 5. Här Mönstret har tillskrivits immunförsvaret inaktivering, inte tillräckligt syntes, proteolytisk inaktivering eller syresättning. Vi observerade att i HIV-1 patienter med&gt; 220 CD4-celler / l, var CD4 korrelerade med serumnivåer av aktiv α 1 PI (r 2 = 0,93, p &amp;lt; 0,0001, n = 26) och inaktiva α 1 PI (r 2 = 0,91, p &lt;0,0001, n = 26) 5. Administration av α 1 PI till HIV-1 infekterade och oinfekterade personer resulterade i dramatiska ökningar i CD4 tyder α 1 PI deltar i regleringen av antalet CD4 + T-celler i blodet 3. Med stimulering, innehåller helt saliv räcker serös exsudat (plasma innehåller proteinhaltigt material som passerar genom blodkärlens väggar i saliven) för att möjliggöra mätning av aktiv α 1 PI och sambandet mellan denna mätning är ett bevis att det är en exakt metod för att beräkna antal CD4-celler. Kortfattat sialogogues såsom tuggummi eller citronsyra stimulera utsöndring av serum i hela munnen saliv. Efter stimulering serum exsudation, är aktiviteten av serum α 1 PI i saliv mätt genom dess förmåga att inhibera elastas-aktivitet. Porcint pankreatiskt elastas (PPE)är en lätt tillgänglig billig källa av elastas. PPE binder till α 1 PI bildar en en-till-ett komplex som förhindrar PPE från klyva dess specifika substrat, av vilka en är den kolorimetriska peptid, succinyl-L-Ala-L-Ala-L-Ala-p-nitroanilid (SA 3 NA). Inkubera saliv med en mättande koncentration av PPE under 10 min vid rumstemperatur tillåter bindning av PPE till alla aktiva α 1 PI i saliv. Den resulterande hämning av personlig skyddsutrustning av aktiv α 1 PI kan mätas genom att tillsätta PPE underlaget SA 3 NA. (Figur 1). Även om CD4-antal mäts i termer av blodvolymen (CD4 celler / fil), är koncentrationen av α 1 PI i saliv relaterat till koncentrationen av serum i saliv, för att inte volym saliv, eftersom volymen kan variera avsevärt under dag och person till person 6. Emellertid är praktiskt taget allt protein i saliv grund serumhalt, och proteinhalten i saliv är MEAmätbara 7. Således är aktiv α 1 PI i saliv beräknas som förhållandet mellan till saliv proteininnehåll och benämns α 1 PI index. Resultat som presenteras här visar att α 1 PI Index ger en noggrann och exakt fysiologiska metod för beräkning av CD4-tal.

Watch this Scientific Journal Video about The ÃŽÂ±-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva at JoVE.com

The ÃƒÅ½Ã‚Â±-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

En CD4 uppräkning metod, α-test, beskrivs som använder hela saliv för att ge snabba och korrekta CD4-tal. De α-test kostar småpengar och eliminerar behovet av tekniska utbildning, dyra reagens såsom monoklonala antikroppar, instrumentering, kyl, transport av prover, samt insamling och hantering av blod.

Den α-test: Snabb Cell-free CD4 Enumeration Använda Hela Saliva

There is an urgent need for affordable CD4 enumeration to monitor HIV disease. CD4 enumeration is out of reach in resource-limited regions due to the time ...

Research

JoVE Journal

Medicine

The &alpha;-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1ÃƒÅ½Ã‚Â² using a Whole Blood Stimulation Assay

Noggrann och enkel mätning av pro-inflammatoriska cytokin IL-1β med hjälp av en hel analys Blood stimulering

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood

Snabb Point-of-Care analys av enoxaparin antikoagulantia Effekt i helblod

There is the need for a clinical assay to determine the extent to which a patient's blood is effectively anticoagulated by the ...

Sampling Human Indigenous Saliva Peptidome Using a Lollipop-Like Ultrafiltration Probe: Simplify and Enhance Peptide Detection for Clinical Mass Spectrometry

Provtagning Human Indigenous Saliv Peptidome Med en Lollipop-Like Ultrafiltrering Probe: förenkla och förbättra peptid Detection för klinisk Mass Spectrometry

Although human saliva proteome and peptidome have been revealed 1-2 they were majorly identified from tryptic digests of saliva proteins. Identification ...

Collecting Saliva and Measuring Salivary Cortisol and Alpha-amylase in Frail Community Residing Older Adults via Family Caregivers

Salivary measures have emerged in bio-behavioral research  that are easy-to-collect, minimally invasive, and relatively inexpensive  biologic markers of ...

Collection and Extraction of Saliva DNA for Next Generation Sequencing

Insamling och Utvinning av saliv-DNA för nästa generations sekvense

The preferred source of DNA in human genetics research is blood, or cell lines derived from blood, as these sources yield large quantities of high quality ...

Rapid Fractionation and Isolation of Whole Blood Components in Samples Obtained from a Community-based Setting

Snabb fraktionering och isolering av helblod Components i prover från en gemenskapsbaserad inställning

Collection and processing of whole blood samples in a non-clinical setting offers a unique opportunity to evaluate community-dwelling individuals both ...

An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

En förbättrad metod för Rapid Intubation av luftstrupen hos möss

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

Assessment of the Anticoagulant and Anti-inflammatory Properties of Endothelial Cells Using 3D Cell Culture and Non-anticoagulated Whole Blood

Bedömning av Endothelial celler med hjälp av 3D cellkultur och icke-Antikoagulerat helblod blodförtunnande och antiinflammatoriska egenskaper

In vivo, endothelial cells are crucial for the natural anticoagulation of circulating blood. Consequently, endothelial cell activation leads to blood ...

Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method

Uppskattning av Nephron antal i hela njuren med hjälp av Acid maceration metod

Nephron endowment refers to the total number of nephrons an individual is born with, as nephrogenesis in humans is completed by 36 weeks of gestation and ...

Rapid Evaluation of Toxicity of Chemical Compounds Using Zebrafish Embryos

Snabb utvärdering av toxiciteten hos kemiska föreningar med hjälp av Zebrafish embryon

The zebrafish is a widely used vertebrate model organism for the disease and phenotype-based drug discovery. The zebrafish generates many offspring, has ...