Name: the &alpha;-test: rapid cell-free cd4 enumeration using whole saliva
Uploaded: 2012-05-16T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Î±-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva at JoVE.com

Araştırma Harry Winston Araştırma Vakfı tarafından desteklenmiştir.

1. Taze Çalışma Çözümler hazırlayın <ol><li> TBS: 0.05 M Tris Salin, pH 7.8 (TBS) Tamponlu. 60 ml TBS / mikroplak hazırlayın. </li><li> KKE: Domuz pankreatik elastaz, tip 1 (PPE) bir süspansiyon olarak sağlanmıştır. Iyice çalkalayın ve yaklaşık 0.01 U / ml TBS KKE sulandırın. 6 ml) solüsyonu / mikroplak çalışma hazırlayın. </li><li> SA 3 NA: Sukkinil-L-Ala-Ala-L-L-Ala-p-nitroanilid (SA 3 NA). Dimetil sülfoksit (DMSO) 0...

<ol>
	<li>Friedlander, Y., Kark, J. D., Eisenberg, S., Stein, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calculation+of+LDL-cholesterol+from+total+cholesterol,+triglyceride+and+HDL-cholesterol:+a+comparison+of+methods+in+the+Jerusalem+Lipid+Research+Clinic+Prevalence+Study.">Calculation of LDL-cholesterol from total cholesterol, triglyceride and HDL-cholesterol: a comparison of methods in the Jerusalem Lipid Research Clinic Prevalence Study.</a> Isr. J. Med. Sci. 18, 1242-1252 (1982).</li><li>Lapidot, T., Petit, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+understanding+of+stem+cell+mobilization:+The+roles+of+chemokines,+proteolytic+enzymes,+adhesion+molecules,+cytokines,+and+stromal+cells.">Current understanding of stem cell mobilization: The roles of chemokines, proteolytic enzymes, adhesion molecules, cytokines, and stromal cells.</a> Exp. Hematol. 30, 973-981 (2002).</li><li>Bristow, C. L., Alfano, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#945;1Antitrypsin+therapy+increases+CD4++lymphocytes+to+normal+values+in+HIV-1+patients.">&#945;1Antitrypsin therapy increases CD4+ lymphocytes to normal values in HIV-1 patients.</a> Soluble factors mediating innate immune responses to HIV infection. , (2010).</li><li>Bristow, C. L., Patel, H., Arnold, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self+antigen+prognostic+for+human+immunodeficiency+virus+disease+progression.">Self antigen prognostic for human immunodeficiency virus disease progression.</a> Clin. Diagn. Lab. Immunol. 8, 937-942 (2001).</li><li>Bristow, C. L., Babayeva, M. A., LaBrunda, M., Mullen, M. P., Winston, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&#945;1Proteinase+Inhibitor+regulates+CD4++lymphocyte+levels+and+is+rate+limiting+in+HIV-1+disease.">&#945;1Proteinase Inhibitor regulates CD4+ lymphocyte levels and is rate limiting in HIV-1 disease.</a> PLoS One. , (2011).</li><li>de Almeida, P. D. V., Gregio, A. M. T., Machado, M. A. N., de Lima, A. A. S., Azevedo, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Saliva+Composition+and+Functions:+A+Comprehensive+Review.">Saliva Composition and Functions: A Comprehensive Review.</a> J. Contemp. Dent. Pract. 9, 72-80 (2008).</li><li>Edgar, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Saliva:+its+secretion,+composition+and+funcitons.">Saliva: its secretion, composition and funcitons.</a> Br. Dent. J. , 172-305 (1992).</li><li>Bristow, C. L., Meo, F. d. i., Arnold, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specific+activity+of+&#945;1proteinase+inhibitor+and+++2macroglobulin+in+human+serum:+Application+to+insulin-dependent+diabetes+mellitus.">Specific activity of &#945;1proteinase inhibitor and 2macroglobulin in human serum: Application to insulin-dependent diabetes mellitus.</a> Clin. Immunol. Immunopathol. 89, 247-259 (1998).</li><li>Pederson, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salivary+levels+of+&#945;2-macroglobulin,+&#945;1-antitrypsin,+C-reactive+protein,+cathepsin+G+and+elastase+in+humans+with+or+without+destructive+periodontal+disease.">Salivary levels of &#945;2-macroglobulin, &#945;1-antitrypsin, C-reactive protein, cathepsin G and elastase in humans with or without destructive periodontal disease.</a> Arch. Oral Biol. 40, 1151-1155 (1995).</li><li>Shak, S., Capon, D. J., Hellmiss, R., Marsters, S. A., Baker, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recombinant+human+DNase+I+reduces+the+viscosity+of+cystic+fibrosis+sputum.">Recombinant human DNase I reduces the viscosity of cystic fibrosis sputum.</a> PNAS. 87, 9188-9192 (1990).</li><li>LeVeque, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multicenter,+randomized,+double-blind,+placebo-controlled,+dose-+titration+study+of+oral+pilocarpine+for+treatment+of+radiation-induced+xerostomia+in+head+and+neck+cancer+patients.">A multicenter, randomized, double-blind, placebo-controlled, dose- titration study of oral pilocarpine for treatment of radiation-induced xerostomia in head and neck cancer patients.</a> J. Clin. Oncol. 11, 1124-1131 (1993).</li><li>Stevens, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+new+CD4+enumeration+technologies+for+resource-constrained+countries.">Evaluating new CD4 enumeration technologies for resource-constrained countries.</a> Nat. Rev. Microbiol. 6, S29-S38 (2008).</li><li>WHO. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> 2010 ART guidelines for adults and adolescents - evidence map. , (2010).</li></ol>

Seyreltilmemiş Serum median 36 mM içeren α 1 PI ve 3.6 mM α 2 makroglobulin (α 2 M) 10 kat farkı 8. Her iki protein KKD bağlanmak için yarışırlar. Bu iki özellik, konsantrasyon ve PPE yakınlığı, özellikle α 2 M 8 rakip varlığında, normal serum α 1 PI ölçebilen bir yöntem geliştirmek için istismar edilmiştir. Bu yöntem,% 0.3 serum az 50 nM μ 1 PI algılayabilir. % 2,5 serum dilüsyonunda, KKD&#39;ler içi...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> Sialogogue, 0.05M sitrik asit </td><td> Eda en tatlandırılmamış Şekerleri, 4900 Arka N.20th Street, Philadelphia, PA 19144 </td><td> Şeker-Free limon damlatarak </td></tr><tr><td> Domuz pankreatik elastaz, tip 1 (AK 3.4.21.36) </td><td> Sigma-Aldrich, St. Louis, MO 63.103 </td><td> E1250 </td></tr><tr><td> Sukkinil-L-Ala-Ala-L-L-Ala-p-nitroanilid </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S4760 </td></tr><tr><td> Coomassie Brillant Blue R-250 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> B7920 </td></tr><tr><td> Doku kültürü ile tedavi edilen, 96 mikroplaklar </td><td> Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ 07417-1886 </td><td> 35-3072 </td></tr><tr><td> 405 nm ve 595 nm filtreleri ile Mikroplaka Okuyucu </td><td> MTX Lab Sistemleri, 8456 Tyco Road, Building D, Viyana, Virginia 22.182 </td><td> Dynex P97277 </td></tr></tbody></table>

the &alpha;-test: rapid cell-free cd4 enumeration using whole saliva

HIV hastalığı izlemek için uygun fiyatlı CD4 sayımı için acil bir ihtiyaç vardır. CD4 sayımı kan hücreleri, sadece şu anda kabul edilebilir bir yöntem üzerinde CD4 ölçmek için özellikle monoklonal antikorlar zaman ve sıcaklık sınırlamaları, teknik gelişmişliği ve reaktiflerin maliyeti nedeniyle kaynak sınırlı bölgelerde, ulaşamayacağı. Yaygın olarak kullanılan bir maliyet tasarrufu ve zaman tasarrufu sağlayan laboratuvar stratejisi yerine tedbir bazı kan değerlerinin daha hesaplamaktır. Örneğin, LDL düzeyleri total kolesterol, HDL, trigliseritler ve 1 ölçülen seviyeleri kullanılarak hesaplanır. Bu nedenle, doğrudan CD4 + T hücre sayısı CD4 hesaplanması için doğru bir yöntem sağlayabilir regüle hücre içermeyen ögelerinden tanımlama ögelerinden fizyolojik ilgisi nedeniyle sayılır. Kan girin ve CD4 + T hücreleri dolaşımdaki olmaya yazgılı olan kök hücrelerin sayısı bir kemokin CXCL12 tarafından belirlenirnd reseptörü lokomosyon 2 üzerindeki etkisi nedeniyle CXCR4. Kana kök hücre hareketin süreci ayrıca hücre yüzeyinde insan lökosit elastaz (HLE CS) ve HLE CS-reaktif aktif α 1 proteinaz inhibitörü (α 1 PI, α 1 antitripsin, SerpinA1) 3 ile düzenlenir. HIV-1 hastalığı, α 1 PI hastalığı süreçler 4 gerçekleşmemesinden dolayı inaktive edilir. HIV-1 hastalığının erken asemptomatik kategoride, aktif α 1 PI arıtılmamış, HIV-1 hasta (medyan = 12 uM ve semptomatik kategoriye 4, 5 sırasında normal düzeyinin elde edilmesi için% 100 olarak normalin altında olduğu bulunmuştur. Bu desen değil yetersiz sentezi, proteolitik inaktivasyon veya oksijenasyonu, bağışıklık inaktivasyon atfedilmiştir. Biz&gt; 220 CD4 hücre / ul HIV-1 kişilerde, CD4 sayısı (r 2 aktif α 1 PI serum düzeyleri ile ilişkili olduğu görüldü = 0.93, p &amp;lt; 0.0001, n = 26) ve inaktif α 1 PI (r 2 = 0.91, p &lt;0.0001, n = 26) 5. HIV-1 enfekte olan ve olmayan konulara α 1 PI İdaresi α 1 PI CD4 sayısının düzenleyen katılır + T hücreleri kan 3 düşündüren CD4 sayısı dramatik artış ile sonuçlanmıştır. Stimülasyon ile, tüm tükürük aktif α 1 PI ve bu ölçüm korelasyon ölçümü bunu CD4 sayıları hesaplamak doğru bir yöntem olduğunu kanıtlayan izin vermek için yeterli seröz eksuda (plazma tükürük içine kan damarı duvarlarının geçer proteinli madde içeren) içerir. Kısaca, bu sakız veya sitrik asit gibi sialogogues tüm ağız tükürük içine serum eksudasyon uyarır. Serum eksudasyon uyararak sonra, tükürük serum α 1 PI aktivitesi elastaz aktivitesini inhibe etme kapasitesi ile ölçülür. Domuz pankreatik elastaz (KKE)elastaz bir hazır ucuz bir kaynağıdır. PPE kendine özgü substratlar, kolorimetrik peptid bir tanesi, sukinil-L-Ala-Ala-L-L-Ala-p-nitroanilid (SA yarma gelen PPE önleyen bir bire-bir kompleks oluşturarak α 1 PI bağlanır 3 NA). Oda sıcaklığında 10 dakika boyunca PPE bir satüre konsantrasyonu ile kuluçkaya tükürük tükürük tüm aktif α 1 PI için KKD&#39;nin bağlayıcı sağlar. Aktif α 1 PI KKD&#39;nin edilen inhibisyon PPE substrat SA 3 NA. (Şekil 1) eklenmesi ile ölçülebilir. CD4 sayımları kan hacmi (CD4 hücre / ul) cinsinden ölçülür rağmen, tükürük α 1 Pİ konsantrasyonu hacmi gün ve kişi süresince önemli ölçüde değişebilir değil tükürük hacmi beri, tükrük serum konsantrasyonu ile ilgilidir 6 kişi için. Ancak, tükürük neredeyse tüm protein serum içeriği nedeniyle ve tükürük protein içeriği mea olduğunu7 surable. Böylece, tükürük aktif α 1 PI tükürük protein içeriği bir oranı olarak hesaplanır ve α 1 PI Endeksi denir. Sonuçlar burada α 1 PI Endeksi CD4 sayıları hesaplamak için doğru ve kesin fizyolojik bir yöntem sağladığını göstermiştir sundu.

Watch this Scientific Journal Video about The Î±-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva at JoVE.com

The &#945;-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

A CD4 numaralandırma yöntemi, α-testi, hızlı ve doğru CD4 sayımları sağlamak üzere tam tükürük kullanan tarif edilmektedir. Α-test maliyetleri pennies ve bu monoklonal antikorlar, enstrümantasyon, soğutma, numunelerin taşınması gibi toplama ve kan işleme gibi teknik eğitim, pahalı reaktifler için gereksinimini ortadan kaldırır.

Α-testi: Tüm Tükürük Kullanarak Hızlı Hücre içermeyen CD4 sayımı

There is an urgent need for affordable CD4 enumeration to monitor HIV disease. CD4 enumeration is out of reach in resource-limited regions due to the time ...

Research

JoVE Journal

Medicine

The &alpha;-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&beta; using a Whole Blood Stimulation Assay

Accurate and Simple Measurement of the Pro-inflammatory Cytokine IL-1&#946; using a Whole Blood Stimulation Assay

Tam Kan Stimülasyon Testi kullanarak Pro-inflamatuar sitokin IL-1β Doğru ve Basit Ölçme

Inflammatory processes resulting from the secretion of soluble mediators by immune cells, lead to various manifestations in skin, joints and other tissues ...

Tıp

Rapid Point-of-Care Assay of Enoxaparin Anticoagulant Efficacy in Whole Blood

Tüm Kan enoksaparin Antikoagülan Etkinliğinin Rapid Point-of-Care Assay

There is the need for a clinical assay to determine the extent to which a patient's blood is effectively anticoagulated by the ...

Sampling Human Indigenous Saliva Peptidome Using a Lollipop-Like Ultrafiltration Probe: Simplify and Enhance Peptide Detection for Clinical Mass Spectrometry

Bir Lollipop-Like Ultrafiltrasyon Probe Kullanımı İnsan Yerli Tükürük Peptidome Örnekleme: Klinik Kütle Spektrometresi için Peptid Algılama basitleştirin ve geliştirin

Although human saliva proteome and peptidome have been revealed 1-2 they were majorly identified from tryptic digests of saliva proteins. Identification ...

Collection and Extraction of Saliva DNA for Next Generation Sequencing

Yeni Nesil dizinleri için Toplama ve Tükrük DNA çıkarımı

The preferred source of DNA in human genetics research is blood, or cell lines derived from blood, as these sources yield large quantities of high quality ...

Rapid Fractionation and Isolation of Whole Blood Components in Samples Obtained from a Community-based Setting

Topluluk tabanlı Ayar Elde Edilen Örneklerin hızlı Fraksiyonlama ve Tam Kan Bileşenlerinin İzolasyonu

Collection and processing of whole blood samples in a non-clinical setting offers a unique opportunity to evaluate community-dwelling individuals both ...

Assessment of the Anticoagulant and Anti-inflammatory Properties of Endothelial Cells Using 3D Cell Culture and Non-anticoagulated Whole Blood

Endotel hücreleri kullanarak 3D hücre kültürü ve sigara anticoagulated tam kan antikoagülan ve anti-enflamatuar özellikleri değerlendirilmesi

In vivo, endothelial cells are crucial for the natural anticoagulation of circulating blood. Consequently, endothelial cell activation leads to blood ...

Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method

Asit maserasyon yöntemini kullanarak tüm böbrek netron numarasının tahmini

Nephron endowment refers to the total number of nephrons an individual is born with, as nephrogenesis in humans is completed by 36 weeks of gestation and ...

Rapid Evaluation of Toxicity of Chemical Compounds Using Zebrafish Embryos

Zebrabalığı Embriyoları Kullanılarak Kimyasal Bileşiklerin Toksisitesinin Hızlı Değerlendirilmesi

The zebrafish is a widely used vertebrate model organism for the disease and phenotype-based drug discovery. The zebrafish generates many offspring, has ...

Rapid Viscoelastic Characterization of Airway Mucus Using a Benchtop Rheometer

Masaüstü Reometre Kullanarak Hava Yolu Mukusunun Hızlı Viskoelastik Karakterizasyonu

In muco-obstructive lung diseases (e.g., asthma, chronic obstructive pulmonary disease, cystic fibrosis) and other respiratory conditions (e.g., ...

Whole-Kidney Three-Dimensional Staining with CUBIC

KÜBİK ile Tüm Böbrek Üç Boyutlu Boyama

Although conventional pathology provided numerous information about kidney microstructure, it was difficult to know the precise structure of blood ...