Name: in ovo electroporation in chick midbrain for studying gene function in dopaminergic neuron development
Uploaded: 2012-08-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In ovo Electroporation in Chick Midbrain for Studying Gene Function in Dopaminergic Neuron Development at JoVE.com

نشكر الدكتور ماتسودا Takahiko لتوفير pCAG-mCherry بناء. معتمد من قبل YCM مهنة جائزة من مؤسسة التنمية Schweppe ومنحة من مؤسسة وايتهول.

1. تزويد التحضير (وليس في الفيديو) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يعد التخفيف من جديد 1X الستربتوميسين / البنسلين (القلم / بكتيريا) في برنامج تلفزيوني 1X. ما لا يزيد عن 50 مل هو ضروري. تصفية مع فلتر ميكرون حقنة 0.22. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد البنى حقن...

<ol>
	<li>Wightman, R. M., Robinson, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+changes+in+mesolimbic+dopamine+and+their+association+with+'reward'.">Transient changes in mesolimbic dopamine and their association with 'reward'.</a> J. Neurochem. 82, 721-735 (2002).</li><li>Kelley, A. E., Berridge, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neuroscience+of+natural+rewards:+relevance+to+addictive+drugs.">The neuroscience of natural rewards: relevance to addictive drugs.</a> J. Neurosci. 22, 3306-3311 (2002).</li><li>Moore, D. J., West, A. B., Dawson, V. L., Dawson, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+pathophysiology+of+Parkinson's+disease.">Molecular pathophysiology of Parkinson's disease.</a> Annu. Rev. Neurosci. 28, 57-87 (2005).</li><li>Dailly, E., Chenu, F., Renard, C. E., Bourin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine,+depression+and+antidepressants.">Dopamine, depression and antidepressants.</a> Fundam. Clin. Pharmacol. 18, 601-607 (2004).</li><li>Sesack, S. R., Carr, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+prefrontal+cortex+inputs+to+dopamine+cells:+implications+for+schizophrenia.">Selective prefrontal cortex inputs to dopamine cells: implications for schizophrenia.</a> Physiol. Behav. 77, 513-517 (2002).</li><li>Ang, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+control+of+midbrain+dopaminergic+neuron+development.">Transcriptional control of midbrain dopaminergic neuron development.</a> Development. 133, 3499-3506 (2006).</li><li>Andersson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+intrinsic+determinants+of+midbrain+dopamine+neurons.">Identification of intrinsic determinants of midbrain dopamine neurons.</a> Cell. 124, 393-405 (2006).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Series+of+Normal+Stages+in+the+Development+of+the+Chick+Embryo.">A Series of Normal Stages in the Development of the Chick Embryo.</a> J. Morphol. 88, 49 (1951).</li><li>Bellairs, R., Osmond, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The atlas of chick development. , (2005).</li><li>Itasaki, N., Bel-Vialar, S., Krumlauf, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term='Shocking'+developments+in+chick+embryology:+electroporation+and+in+ovo+gene+expression.">'Shocking' developments in chick embryology: electroporation and in ovo gene expression.</a> Nat. Cell Biol. 1, 203-207 (1999).</li><li>Momose, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+targeting+of+gene+expression+in+chick+embryos+by+microelectroporation.">Efficient targeting of gene expression in chick embryos by microelectroporation.</a> Dev. Growth Differ. 41, 335-344 (1999).</li><li>Muramatsu, T., Mizutani, Y., Ohmori, Y., Okumura, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+three+nonviral+transfection+methods+for+foreign+gene+expression+in+early+chicken+embryos+in+ovo.">Comparison of three nonviral transfection methods for foreign gene expression in early chicken embryos in ovo.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 230, 376-380 (1997).</li><li>Nishi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-efficiency+in+vivo+gene+transfer+using+intraarterial+plasmid+DNA+injection+following+in+vivo+electroporation.">High-efficiency in vivo gene transfer using intraarterial plasmid DNA injection following in vivo electroporation.</a> Cancer Res. 56, 1050-1055 (1996).</li><li>Matsuda, T., Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporation+and+RNA+interference+in+the+rodent+retina+in+vivo+and+in+vitro.">Electroporation and RNA interference in the rodent retina in vivo and in vitro.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101, 16-22 (2004).</li><li>Blank, M. C., Chizhikov, V., Millen, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Ovo+Electroporations+of+HH+Stage+10+Chicken+Embryos.">In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos.</a> J. Vis. Exp. (9), e408 (2007).</li><li>Chesnutt, C., Niswander, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmid-based+short-hairpin+RNA+interference+in+the+chicken+embryo.">Plasmid-based short-hairpin RNA interference in the chicken embryo.</a> Genesis. 39, 73-78 (2004).</li></ol>

وفي electroporation البيضة من المخ الأوسط كتكوت الجنينية تقدم منخفضة التكلفة وبديل سريع لجيل من الحيوانات المعدلة وراثيا أو خروج المغلوب لإجراء الدراسة المجراة من وظائف الجينات في تنمية الخلايا العصبية الدوبامين الدماغ المتوسط. باستخدام القصير 2 مم أقطاب ال...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> بيض الدجاج المخصب </td><td> نهر تشارلز مختبرات </td><td></td><td></td></tr><tr><td> البيض الحاضنة </td><td> GQF التصنيع </td><td> 1502 رياضي </td><td></td></tr><tr><td> BTX Electroporator </td><td> BTX هارفارد جهاز </td><td> ECM830 </td><td></td></tr><tr><td> الأقطاب الكهربائية </td><td> BTX هارفارد جهاز </td><td> 45-0162 على شكل حرف L genetrodes </td><td> للاستخدام مع ECM830 electroporator </td></tr><tr><td> البلاتين إيريديوم الأسلاك </td><td> ألفا Aesar </td><td> # 10056 </td><td> قطرها 0.5 مم لجعل 2 أقطاب طويل مم </td></tr><tr><td> أنبوب زجاجي الشعرية </td><td> العالم آلات دقيقة </td><td> TW100F-4 </td><td></td></tr><tr><td> Microloader ماصة معلومات سرية </td><td> إيبندورف </td><td> 5242 956.003 </td><td></td></tr><tr><td> الهند الحبر </td><td> المواد الغذائية </td><td></td><td> تصفية 20٪ قبل الاستخدام </td></tr><tr><td> Microinjector </td><td> باركر أتمتة، باركر Hannifin التعاون </td><td> Picospritzer الثالث </td><td></td></tr><tr><td> فلوري تشريح المجهر </td><td> لايكا </td><td> MZ16F </td><td></td></tr><tr><td> Micropipette مجتذب </td><td> سوتر الصك </td><td> D-97 </td><td></td></tr></tbody></table>

in ovo electroporation in chick midbrain for studying gene function in dopaminergic neuron development

الدوبامين الخلايا العصبية الموجودة في الدماغ المتوسط ​​سيطرة حركة بطني، والسلوك العاطفي، وآليات المكافأة 1-3. متورط في اختلال وظيفي من بطني الدماغ المتوسط ​​الدوبامين الخلايا العصبية في مرض باركنسون، والفصام، والاكتئاب، والخرف 1-5. وبالتالي، يمكن أن يدرس تنظيم تمايز الخلايا العصبية الدوبامين المخ الأوسط، ليس فقط توفير نظرة متبصرة في آليات تنظيم وتطوير الدماغ المتوسط ​​العصبية مواصفات مصير السلف، ولكنها تساعد أيضا وضع استراتيجيات علاجية جديدة لعلاج مجموعة متنوعة من الاضطرابات العصبية البشرية. الخلايا العصبية الدوبامين العصبية تفرق من الأسلاف المبطنة لمنطقة البطين من الدماغ المتوسط ​​بطني الجنينية. ويتم التحكم في تنمية الأسلاف العصبية من خلال برامج التعبير الجيني 6،7. هنا ننقل تقنيات استخدام electroporation في التعبير عن الجينات على وجه التحديد في الدماغ المتوسط ​​من مرحلة هامبورغ (سمو) هاميلتون 11 (عشرةirteen somites، 42 ساعة) افراخ الدجاج 8،9. التنمية الخارجية من افراخ الدجاج يسمح التلاعب التجريبية مريحة في المراحل الجنينية محددة، مع تحديد الآثار في نقطة زمنية التنموية في وقت لاحق 10-13. كتكوت الأنابيب العصبية الجنينية في وقت سابق من صاحب السمو مرحلة 13 (19 somites، 48 ساعة) وتتكون من الأسلاف العصبية multipotent التي هي قادرة على التمييز إلى أنواع الخلايا المتميزة في الجهاز العصبي. الموجه pCAG، الذي يحتوي على كل مروج CMV وفرخ β-الأكتين محسن، ويسمح للتعبير قوي من العلم أو غيرها من البنى حاتمة الموسومة في أنابيب الفرخ العصبية الجنينية 14. في هذا التقرير، فإننا نؤكد تدابير خاصة لتحقيق المقيدة إقليميا التعبير الجيني في الخلايا العصبية الجنينية الأسلاف الدماغ المتوسط ​​الدوبامين، بما في ذلك كيفية حقن الحمض النووي يبني على وجه التحديد في منطقة المخ الأوسط الجنينية وكيفية تحديد electroporation مع أقطاب كهربائية صغيرة مصنوعة خصيصا. تحليل جالدماغ المتوسط ​​المتخلف في مراحل لاحقة توفر ممتازة في نظام الجسم الحي للناقلات البلازميد التي تتوسط فيها مكسب وظيفة، من والخسارة من وظيفة دراسات التنمية الدماغ المتوسط. قد تعديل نظام تجريبي تمديد الفحص إلى أجزاء أخرى من الجهاز العصبي لأداء مصير تحليل الخرائط وعن التحقيق في تنظيم التعبير الجيني.

Watch this Scientific Journal Video about In ovo Electroporation in Chick Midbrain for Studying Gene Function in Dopaminergic Neuron Development at JoVE.com

In ovo Electroporation in Chick Midbrain for Studying Gene Function in Dopaminergic Neuron Development

لتقييم وظيفة وتنظيم الجينات خلال تطوير الخلايا العصبية الدوبامين المخ الأوسط، ونحن تصف الأسلوب الذي ينطوي<em&gt; في البيضة</em&gt; electroporation من بنيات البلازميد إلى الجنينية الأسلاف فرخ الدماغ المتوسط ​​بطني الخلايا العصبية الدوبامين. ويمكن استخدام هذه التقنية لتحقيق كفاءة التعبير عن الجينات ذات أهمية لدراسة الجوانب المختلفة للتنمية الدماغ المتوسط ​​وتمايز الخلايا العصبية الدوبامين.

في Electroporation البيضة في الدماغ المتوسط ​​الفرخ لدراسة وظيفة الجينات في الخلية العصبية الدوبامين التنمية

Dopaminergic neurons located in the ventral midbrain control movement, emotional behavior, and reward mechanisms1-3. The dysfunction of ventral midbrain ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In ovo Electroporation in Chick Midbrain for Studying Gene Function in Dopaminergic Neuron Development

In utero Electroporation followed by Primary Neuronal Culture for Studying Gene Function in Subset of Cortical Neurons

In utero Electroporation followed by Primary Neuronal Culture for Studying Gene Function in Subset of Cortical Neurons

في الرحم بعد Electroporation للثقافة متعلق بالخلايا العصبية الأولية لدراسة وظائف الجينات في مجموعة فرعية من العصبونات القشرية

In vitro study of primary neuronal cultures allows for quantitative analyses of neurite outgrowth. In order to study how genetic alterations affect ...

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

ترنسفكأيشن من خلايا الشبكية بواسطة الماوس العقدة في الجسم الحي Electroporation

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

فأر في الرحم Electroporation : الشواهد ترنسفكأيشن جين Spatiotemporal

In order to understand the function of genes expressed in specific region of the developing brain, including signaling molecules and axon guidance ...

Organotypic Slice Cultures of Embryonic Ventral Midbrain: A System to Study Dopaminergic Neuronal Development in vitro

Organotypic Slice Cultures of Embryonic Ventral Midbrain: A System to Study Dopaminergic Neuronal Development in vitro

الثقافات شريحة عضوي النمط من المخ الأوسط بطني الجنينية : نظام لدراسة التنمية متعلق بالخلايا العصبية الدوبامينية في المختبر</em

The  mouse is an excellent model organism to study mammalian brain development due  to the abundance of molecular and genetic data. However, the ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

تسجيلات الكهربية المزدوجة للSynaptically-استجابات Astroglial والخلايا العصبية في الحصين شرائح الحاد

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

In ovo Expression of MicroRNA in Ventral Chick Midbrain

In ovo Expression of MicroRNA in Ventral Chick Midbrain

في التعبير البيضة من الرنا الميكروي في بطني الدماغ المتوسط ​​الفرخ

Non-coding RNAs are additional players in regulating gene expression. Targeted in ovo electroporation of specific areas provides a unique tool for spatial ...

Directed Dopaminergic Neuron Differentiation from Human Pluripotent Stem Cells

توجه الدوبامين العصبية التمايز من الخلايا الجذعية المحفزة الإنسان

Dopaminergic (DA) neurons in the substantia nigra pars compacta  (also known as A9 DA neurons) are the specific cell type that is lost in ...

In Vivo Calcium Imaging of Lateral-line Hair Cells in Larval Zebrafish

في تصوير الكالسيوم فيفو خلايا الشعر الخط الجانبي في الزرد اليرقات

Sensory hair cells are mechanoreceptors found in the inner ear that are required for hearing and balance. Hair cells are activated in response to sensory ...

Studying Brain Function in Children Using Magnetoencephalography

دراسة وظيفة المخ في الأطفال باستخدام ماجنيتونسيفالوجرافي

Magnetoencephalography (MEG) is a non-invasive neuroimaging technique which directly measures magnetic fields produced by the electrical activity of the ...

3D Kinematic Analysis for the Functional Evaluation in the Rat Model of Sciatic Nerve Crush Injury

3D تحليل الحركية للتقييم الوظيفي في نموذج الفئران من عرق النسا الأعصاب سحق الإصابة

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of ...

في Electroporation البيضة في الدماغ المتوسط ​​الفرخ لدراسة وظيفة الجينات في الخلية العصبية الدوبامين التنمية

في Electroporation البيضة في الدماغ المتوسط الفرخ لدراسة وظيفة الجينات في الخلية العصبية الدوبامين التنمية