Name: in ovo electroporation in chick midbrain for studying gene function in dopaminergic neuron development
Uploaded: 2012-08-03T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In ovo Electroporation in Chick Midbrain for Studying Gene Function in Dopaminergic Neuron Development at JoVE.com

Мы благодарим доктора Такахико Мацуда для обеспечения pCAG-mCherry построить. YCM поддерживается премии развития карьеры от Швеппе фонда и грант от фонда Whitehall.

1. Поставка Подготовка (не видео) <ol><li> Подготовить новую 1X разведения пенициллина / стрептомицина (Pen / Strep) в 1X PBS. Не более 50 мл необходимо. Фильтр с 0,22 мкм фильтр шприца. </li><li> Подготовка инъекций конструкции путем объединения желаемого плазмиды конструкций. Ставим все конструкции в pCAG-Fla...

<ol>
	<li>Wightman, R. M., Robinson, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transient+changes+in+mesolimbic+dopamine+and+their+association+with+'reward'.">Transient changes in mesolimbic dopamine and their association with 'reward'.</a> J. Neurochem. 82, 721-735 (2002).</li><li>Kelley, A. E., Berridge, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neuroscience+of+natural+rewards:+relevance+to+addictive+drugs.">The neuroscience of natural rewards: relevance to addictive drugs.</a> J. Neurosci. 22, 3306-3311 (2002).</li><li>Moore, D. J., West, A. B., Dawson, V. L., Dawson, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+pathophysiology+of+Parkinson's+disease.">Molecular pathophysiology of Parkinson's disease.</a> Annu. Rev. Neurosci. 28, 57-87 (2005).</li><li>Dailly, E., Chenu, F., Renard, C. E., Bourin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopamine,+depression+and+antidepressants.">Dopamine, depression and antidepressants.</a> Fundam. Clin. Pharmacol. 18, 601-607 (2004).</li><li>Sesack, S. R., Carr, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+prefrontal+cortex+inputs+to+dopamine+cells:+implications+for+schizophrenia.">Selective prefrontal cortex inputs to dopamine cells: implications for schizophrenia.</a> Physiol. Behav. 77, 513-517 (2002).</li><li>Ang, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+control+of+midbrain+dopaminergic+neuron+development.">Transcriptional control of midbrain dopaminergic neuron development.</a> Development. 133, 3499-3506 (2006).</li><li>Andersson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+intrinsic+determinants+of+midbrain+dopamine+neurons.">Identification of intrinsic determinants of midbrain dopamine neurons.</a> Cell. 124, 393-405 (2006).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Series+of+Normal+Stages+in+the+Development+of+the+Chick+Embryo.">A Series of Normal Stages in the Development of the Chick Embryo.</a> J. Morphol. 88, 49 (1951).</li><li>Bellairs, R., Osmond, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The atlas of chick development. , (2005).</li><li>Itasaki, N., Bel-Vialar, S., Krumlauf, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term='Shocking'+developments+in+chick+embryology:+electroporation+and+in+ovo+gene+expression.">'Shocking' developments in chick embryology: electroporation and in ovo gene expression.</a> Nat. Cell Biol. 1, 203-207 (1999).</li><li>Momose, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+targeting+of+gene+expression+in+chick+embryos+by+microelectroporation.">Efficient targeting of gene expression in chick embryos by microelectroporation.</a> Dev. Growth Differ. 41, 335-344 (1999).</li><li>Muramatsu, T., Mizutani, Y., Ohmori, Y., Okumura, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+three+nonviral+transfection+methods+for+foreign+gene+expression+in+early+chicken+embryos+in+ovo.">Comparison of three nonviral transfection methods for foreign gene expression in early chicken embryos in ovo.</a> Biochem. Biophys. Res. Commun. 230, 376-380 (1997).</li><li>Nishi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-efficiency+in+vivo+gene+transfer+using+intraarterial+plasmid+DNA+injection+following+in+vivo+electroporation.">High-efficiency in vivo gene transfer using intraarterial plasmid DNA injection following in vivo electroporation.</a> Cancer Res. 56, 1050-1055 (1996).</li><li>Matsuda, T., Cepko, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electroporation+and+RNA+interference+in+the+rodent+retina+in+vivo+and+in+vitro.">Electroporation and RNA interference in the rodent retina in vivo and in vitro.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101, 16-22 (2004).</li><li>Blank, M. C., Chizhikov, V., Millen, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+Ovo+Electroporations+of+HH+Stage+10+Chicken+Embryos.">In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos.</a> J. Vis. Exp. (9), e408 (2007).</li><li>Chesnutt, C., Niswander, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasmid-based+short-hairpin+RNA+interference+in+the+chicken+embryo.">Plasmid-based short-hairpin RNA interference in the chicken embryo.</a> Genesis. 39, 73-78 (2004).</li></ol>

В ово электропорации эмбриональных мозга куриных предлагает недорогой и быстрой альтернативой поколение трансгенных животных или нокаут выполнять в естественных условиях изучения функций генов в мозге развития дофаминергических нейронов. Используя короткие длиной 2 мм L-ф...

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Компания </td><td> Номер по каталогу </td><td> Комментарии </td></tr><tr><td> Оплодотворенные яйца куриные </td><td> Charles River лаборатории </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Яйцо инкубатор </td><td> Производство GQF </td><td> Спортсмен 1502 </td><td></td></tr><tr><td> BTX электропоратора </td><td> BTX Гарвардского аппарата </td><td> ECM830 </td><td></td></tr><tr><td> Электроды </td><td> BTX Гарвардского аппарата </td><td> 45-0162 Г-образный genetrodes </td><td> Для использования с ECM830 электропоратора </td></tr><tr><td> Платиновой проволоки, иридий </td><td> Alfa Aesar </td><td> # 10056 </td><td> Диаметром 0,5 мм Для приготовления 2 мм в длину электродов </td></tr><tr><td> Стеклянный капилляр </td><td> Инструмент Всемирной Precision </td><td> TW100F-4 </td><td></td></tr><tr><td> Microloader пипетки </td><td> Эппендорф </td><td> 5242 956.003 </td><td></td></tr><tr><td> Тушь </td><td> Скобы </td><td></td><td> Фильтр 20% до использования </td></tr><tr><td> Microinjector </td><td> Паркер автоматизации, Parker Hannifin сотрудничества </td><td> Picospritzer III </td><td></td></tr><tr><td> Флуоресцентный микроскоп вскрытия </td><td> Leica </td><td> MZ16F </td><td></td></tr><tr><td> Микропипетки съемник </td><td> Саттер инструмент </td><td> D-97 </td><td></td></tr></tbody></table>

in ovo electroporation in chick midbrain for studying gene function in dopaminergic neuron development

Дофаминергических нейронов расположены в брюшной управления движением мозга, эмоциональное поведение и механизмы вознаграждения 1-3. Дисфункция мозга вентральной дофаминергических нейронов вовлечено в болезнь Паркинсона, шизофрения, депрессия и слабоумие 1-5. Таким образом, изучение регуляции дифференциации мозга дофаминергических нейронов не только обеспечивают важное понимание механизмов, регулирующих развитие мозга и нервной спецификации судьба предшественников, но и помочь в разработке новых терапевтических стратегий в лечении различных неврологических заболеваний человека. Дофаминергических нейронов отличить от нейронных предшественников, выстилающих желудочковой зоны эмбрионального вентрального среднего мозга. Развитие нейронных предшественников контролируется экспрессия генов программы 6,7. Здесь мы сообщаем о методах использования электропорации выразить генов, в среднем мозге Гамбургера Гамильтон (HH) этап 11 (йirteen сомитов, 42 часов) куриных эмбрионов 8,9. Внешний развитие куриных эмбрионов позволяет удобно экспериментальных манипуляций в определенных эмбриональной стадии, последствия определяются на более позднем времени развития пунктов 10-13. Чик эмбриональной нервной трубы раньше, чем HH стадии 13 (девятнадцать сомитов, 48 часов) состоит из мультипотентных нейронных предшественников, которые способны дифференцироваться в различные типы клеток нервной системы. Вектор pCAG, который содержит промотор CMV и куриных β-актина усилитель, позволяющий для надежной выражение флаг или другой эпитоп с метками конструкций в эмбриональных куриных нейронных трубы 14. В этом докладе, мы подчеркиваем, специальные меры для обеспечения региональной ограниченной экспрессии генов в эмбриональных дофаминергических мозга предшественников нейронов, в том числе, как вводить ДНК создает в частности в области эмбрионального мозга и как определить электропорации с небольшой заказ электроды. Анализируя сзахолустный мозга на более поздних стадиях обеспечивает превосходную в естественных условиях система плазмиды вектор-опосредованного усиления из-функции и потерей функции исследования мозга развития. Модификация экспериментальная система может продлить анализа в других частях нервной системы, для проведения анализа и отображение судьбы для изучения регуляции экспрессии генов.

Watch this Scientific Journal Video about In ovo Electroporation in Chick Midbrain for Studying Gene Function in Dopaminergic Neuron Development at JoVE.com

In ovo Electroporation in Chick Midbrain for Studying Gene Function in Dopaminergic Neuron Development

Для оценки функции и регуляции генов во время развития мозга дофаминергических нейронов, мы опишем метод, который включает в себя<em&gt; В ово</em&gt; Электропорации плазмидной конструкции ДНК в эмбриональных куриных вентральной предшественников мозга дофаминергических нейронов. Этот метод может быть использован для достижения эффективной экспрессии генов, представляющих интерес для изучения различных аспектов развития мозга и дофаминергической дифференциации нейронов.

В ово Электропорация в Chick мозга для изучения функции генов в развитии дофаминергической Нейрон

Dopaminergic neurons located in the ventral midbrain control movement, emotional behavior, and reward mechanisms1-3. The dysfunction of ventral midbrain ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

In ovo Electroporation in Chick Midbrain for Studying Gene Function in Dopaminergic Neuron Development

In utero Electroporation followed by Primary Neuronal Culture for Studying Gene Function in Subset of Cortical Neurons

In utero Electroporation followed by Primary Neuronal Culture for Studying Gene Function in Subset of Cortical Neurons

Внутриутробное Электропорация последующей первичной нейронов культуры для изучения функции генов в Подмножество корковых нейронов

In vitro study of primary neuronal cultures allows for quantitative analyses of neurite outgrowth. In order to study how genetic alterations affect ...

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

Трансфекция Мышь ганглиозных клеток сетчатки при В естественных условиях Электропорация

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

Mouse in Utero Electroporation: Controlled Spatiotemporal Gene Transfection

Мышь В утробе матери Электропорация: Пространственно-временные Контролируемые трансфекции генов

In order to understand the function of genes expressed in specific region of the developing brain, including signaling molecules and axon guidance ...

Organotypic Slice Cultures of Embryonic Ventral Midbrain: A System to Study Dopaminergic Neuronal Development in vitro

Organotypic Slice Cultures of Embryonic Ventral Midbrain: A System to Study Dopaminergic Neuronal Development in vitro

Органотипической культур Кусочек Эмбриональные Брюшной мозга: системы по изучению дофаминергической нейронов развития В пробирке</em

The  mouse is an excellent model organism to study mammalian brain development due  to the abundance of molecular and genetic data. However, the ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

Двойной Электрофизиологические Записи синаптически-вызванных астроглиального и нейрональных ответов, при остром срезов гиппокампа

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

In ovo Expression of MicroRNA in Ventral Chick Midbrain

In ovo Expression of MicroRNA in Ventral Chick Midbrain

В ово выражения микроРНК в Брюшной Chick мозга

Non-coding RNAs are additional players in regulating gene expression. Targeted in ovo electroporation of specific areas provides a unique tool for spatial ...

Directed Dopaminergic Neuron Differentiation from Human Pluripotent Stem Cells

Режиссер дофаминергических Neuron Дифференциация от человека плюрипотентных стволовых клеток

Dopaminergic (DA) neurons in the substantia nigra pars compacta  (also known as A9 DA neurons) are the specific cell type that is lost in ...

In Vivo Calcium Imaging of Lateral-line Hair Cells in Larval Zebrafish

В естественных условиях кальция изображений боковой линии клетки волос в личиночной данио рерио

Sensory hair cells are mechanoreceptors found in the inner ear that are required for hearing and balance. Hair cells are activated in response to sensory ...

Studying Brain Function in Children Using Magnetoencephalography

Изучение функций мозга у детей с помощью Магнитоэнцефалография

Magnetoencephalography (MEG) is a non-invasive neuroimaging technique which directly measures magnetic fields produced by the electrical activity of the ...

3D Kinematic Analysis for the Functional Evaluation in the Rat Model of Sciatic Nerve Crush Injury

3D кинематический анализ для функциональной оценки в Крыса Модель Сиатический нерв Давка травмы

Compared to the Sciatic Functional Index (SFI), kinematic analysis is a more reliable and sensitive method for performing functional evaluations of ...