Name: preparing t cell growth factor from rat splenocytes
Uploaded: 2007-10-31T22:24:33
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparing T Cell Growth Factor from Rat Splenocytes at JoVE.com

<ol><li> Neem Lewis rat milt (ratten tussen de 160-200g zijn het beste). Dilacerate op ijs in een petrischaaltje met PBS + antibiotica (PBS-PS) met behulp van een cel zeef. In een 50 ml buis. Vullen met PBS-PS. </li><li> Spin gedurende 10 min bij 4 ° C om pellet de cellen. </li><li> Was de cellen twee keer. </li><li> Resuspendeer de pellet in NH 4 Cl 0,15 M (5 ml per milt). Meng voorzichtig en continu met een pipet gedurende 3 minuten op ijs om de erytrocyten lyseren. Vul de buis met medium. </li><li> Spin gedurende...

<ol>
	<li>Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -. M., Gola, M., Sabatier, J. -. M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+blocking+of+voltage-gated+K++channels+treats+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+and+inhibits+T-cell+activation.">Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation.</a> J. Immunol. 166, 936-944 (2001).</li><li>Beeton, C., Wulff, H., Barbaria, J., Clot-Faybesse, O., Pennington, M., Bernard, D., Cahalan, M. D., Chandy, K. G., Beraud, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+blockade+of+T+lymphocyte+K++channels+ameliorates+experimental+autoimmune+encephalomyelitis,+a+model+for+multiple+sclerosis.">Selective blockade of T lymphocyte K+ channels ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis, a model for multiple sclerosis.</a> Proc. Natl. Acad. 98, 13942-13947 (2001).</li><li>Mor, F., Cohen, I. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Propagation+of+Lewis+rat+encephalitogenic+T+cell+lines:+T-cell-growth-factor+is+superior+to+recombinant+IL-2.">Propagation of Lewis rat encephalitogenic T cell lines: T-cell-growth-factor is superior to recombinant IL-2.</a> J. Neuroimmunol. 123, 76-82 (2002).</li></ol>

We bereiden TCGF van Lewis rat splenocyten, omdat we regelmatig naïeve ratten euthanaseren van deze stam tot de oogst serum en thymi om Lewis rat T-cel-lijnen te stimuleren in vitro. Dit TCGF kan gebruikt worden om de groei en overleving van T-cel-lijnen van de andere ratten stammen te bevorderen. TCGF kunnen ook worden bereid uit andere stammen van ratten.

Ter voorbereiding compleet kweekmedium het volgende toe te voegen aan een 500 ml fles van RPMI 1640 en steriel-filter: 10% FCS, 1 fles van PSG, 5 ml RPMI vitaminen; 5 ml natriumpyruvaat; 5 ml niet-essentiële aminozuren; 50 uM beta-mercapto-ethanol, 2 ug / ml Concanavaline A.

preparing t cell growth factor from rat splenocytes

Onderhoud van antigeen-specifieke T-cellijnen of klonen in cultuur vereist rondes van antigeen-geïnduceerde activatie van elkaar gescheiden door fasen van celexpansie 1,2. Toevoeging van interleukine 2 tot en met de cultuur media tijdens de expansiefase nodig is om celdood te voorkomen en voldoende is om op korte termijn T-cel-lijnen te handhaven, maar is aangetoond dat Th1-polarisatie 3 te verhogen. Vervanging van interleukine-2 door T-cel groeifactor (TCGF), die een mix van cytokines bevat, is effectiever dan interleukine 2 het behoud op lange termijn T-cellijnen in vitro 3. Bovendien kan TCGF gemakkelijk worden bereid in grote hoeveelheden in het laboratorium en is veel goedkoper dan recombinant interleukine 2. Hier laten we zien hoe TCGF te bereiden van de rat splenocyten kweeksupernatanten. Voor deze procedure, oogsten we de milt van naïeve Lewis-ratten gedood voor de thymus en bloedafname. Wij bereiden single-cell schorsingen van de milt, Lyze de rode bloedcellen door osmotische schok, en zaad van de splenocyten in kweekmedium. De cellen worden gestimuleerd met Concanavaline A, een mitogeen dat niet-selectief activeert alle rat T-lymfocyten, het induceren van de productie van cytokines. De cultuur supernantant is 48 uur later verzameld andexcess Concanavaline A is gebonden aan alfa-methyl-mannoside om te voorkomen dat het activeren van T-cellijnen die TCGF zal worden toegevoegd. De TCGF wordt dan steriel gefiltreerd, gealiquoteerd, en opgeslagen bij -20 ° C.

Watch this Scientific Journal Video about Preparing T Cell Growth Factor from Rat Splenocytes at JoVE.com

Preparing T Cell Growth Factor from Rat Splenocytes

We beschrijven de voorbereiding van de T-cel groeifactor gebruikt voor de in vitro expansie van antigeen-specifieke T-lymfocyt rat lijnen.

Voorbereiden van T-cel groeifactor van Rat Splenocyten

Maintenance of antigen-specific T cell lines or clones in culture requires rounds of antigen-induced activation separated by phases of cell expansion 1,2. ...

Research

JoVE Journal

Biology

Growth Factor-Coated Bead Placement on Dorsal Forebrain Explants

Growth Factor-Coated Bead Plaatsing op Dorsale voorhersenen Explantaten

Preparing E18 Cortical Rat Neurons for Compartmentalization in a Microfluidic Device

Voorbereiden E18 Corticale Rat Neuronen voor Compartimentering in een microfluïdische apparaat

In this video, we demonstrate the preparation of E18 cortical rat neurons. E18 cortical rat neurons are obtained from E18 fetal rat cortex previously ...

Placing Growth Factor-Coated Beads on Early Stage Chicken Embryos

Het plaatsen van Growth Factor-Coated Kralen op Early Stage kippenembryo&#39;s

The neural tube expresses many proteins in specific spatiotemporal patterns during development.   These proteins have been shown to be critical for cell ...

Neuronal Cell Cultures from Aplysia for High-Resolution Imaging of Growth Cones

Neuronale celkweken van Aplysia voor High-Resolution Imaging van Groei Cones

Neuronal growth cones are the highly motile structures at the tip of axons that can detect guidance cues in the environment and transduce this information ...

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia (SCG)

Protocol for Culturing Sympathetic Neurons from Rat Superior Cervical Ganglia SCG

Protocol voor het kweken van sympathische neuronen van Rat Superior Baarmoederhalskanker ganglia (SCG)

The superior cervical ganglia (SCG) in rats are small, glossy, almond-shaped structures that contain sympathetic neurons.  These neurons provide ...

Video Bioinformatics Analysis of Human Embryonic Stem Cell Colony Growth

Video Bioinformatica Analyse van menselijke embryonale stamcellen Colony Growth

Because video data are complex and are comprised of many images, mining information from video material is difficult to do without the aid of computer ...

Live Imaging of Cell Extrusion from the Epidermis of Developing Zebrafish

Live-Imaging van de Cel Extrusie van de opperhuid van de ontwikkelingslanden zebravis

Homeostatic maintenance of epithelial tissues requires the continual removal of damaged cells without disrupting barrier function.  Our studies have found ...

Modified Yeast-Two-Hybrid System to Identify Proteins Interacting with the Growth Factor Progranulin

Gemodificeerde gist-twee-hybride systeem aan eiwitten Interactie met de groeifactor progranuline identificeren

Progranulin (PGRN), also known as granulin epithelin precursor (GEP), is a 593-amino-acid autocrine growth factor. PGRN is known to play a critical role ...

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

Preparing Individual Drosophila Egg Chambers for Live Imaging

Voorbereiden Individuele Drosophila Egg Chambers voor Live Imaging

Live cell imaging is an important technique applied to a number of Drosophila tissues used as models to investigate topics such as axis specification, ...

Kinematic Analysis of Cell Division and Expansion: Quantifying the Cellular Basis of Growth and Sampling Developmental Zones in Zea mays Leaves

Kinematic Analysis of Cell Division and Expansion: Quantifying the Cellular Basis of Growth and Sampling Developmental Zones in Zea mays Leaves

Kinematische analyse van de celdeling en Expansion: Het kwantificeren van de cellulaire basis van groei en Sampling Developmental Zones in<em&gt; Zea Mays</em&gt; Leaves

Growth analyses are often used in plant science to investigate contrasting genotypes and the effect of environmental conditions. The cellular aspect of ...