Name: transplantation of pancreatic islets into the kidney capsule of diabetic mice
Uploaded: 2007-10-31T23:37:26
Description: Watch this Scientific Journal Video about Transplantation of Pancreatic Islets Into the Kidney Capsule of Diabetic Mice at JoVE.com

<p> UCSF Diabetes Center. NIH UCSF DERC Núcleo Islet. JDRF. LifeScan Inc. Johnson &amp; Johnson Company. </p>

<p class="jove_title"> Preparação de Ilhotas para Transplante (Tx) </p><ol><li> Em microscópio invertido, mão pick-ilhotas usando um Pipetman P200 e ponta da pipeta em linha reta do ilhotas cultivadas em uma placa de 100mm. </li><li> Contagem de 100 ilhotas de cada vez e transferir para cada tubo de microcentrífuga (~ 500 ilhotas tubo / / mouse). </li><li> Permitir ilhotas para resolver a parte inferior dos tubos de microcentrífuga. </li><li> Desenhe uma das ilhotas pellet em um Pipetman P200 (fixado em 130ul) usando uma ponta da pipeta e...

<ol>
	<li>Tang, Q., Henriksen, K. J., Bi, M., Finger, E. B., Szot, G., Ye, J., Masteller, E. L., McDevitt, H., Bonyhadi, M., Bluestone, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro-expanded+antigen-specific+regulatory+T+cells+suppress+autoimmune+diabetes.">In vitro-expanded antigen-specific regulatory T cells suppress autoimmune diabetes.</a> <em style='font-style: italic'>J Exp Med</em>. <b>199</b>, 1455-1465 (2004).</li><li>Rulifson, I. C., Szot, G. L., Palmer, E., Bluestone, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inability+to+induce+tolerance+through+direct+antigen+presentation.">Inability to induce tolerance through direct antigen presentation.</a> <em style='font-style: italic'>Am J Transplant</em>. <b>2</b>, 510-519 (2002).</li><li>Lenschow, D. J., Zeng, Y., Hathcock, K. S., Zuckerman, L. A., Freeman, G., Thistlethwaite, J. R., Gray, G. S., Hodes, R. J., Bluestone, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+transplant+rejection+following+treatment+with+anti-B7-2+and+anti-B7-1+antibodies.+Transplantation.">Inhibition of transplant rejection following treatment with anti-B7-2 and anti-B7-1 antibodies. Transplantation.</a> <em style='font-style: italic'>Transplantation</em>. <b>60</b>, 1171-1178 (1995).</li><li>Lenschow, D. J., Zeng, Y., Thistlethwaite, J. R., Montag, A., Brady, W., Gibson, M. G., Linsley, P. S., Bluestone, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+survival+of+xenogeneic+pancreatic+islet+grafts+induced+by+CTLA4lg.">Long-term survival of xenogeneic pancreatic islet grafts induced by CTLA4lg.</a> <em style='font-style: italic'>Science</em>. <b>257</b>, 789-792 (1992).</li></ol>

<p> Este protocolo fornece uma opção prática e eficiente para fornecer precisão e facilidade ilhotas ou células sob a cápsula renal de ratos diabéticos ou normal. A técnica de concentração e as ilhotas de granulação ou células ao tubo de final (PE50) utilizado para o transplante de células sob a cápsula renal oferece um método fácil e eficaz de transplante de células, reduzindo qualquer estresse para as células ou para o mouse. </p>

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Surgical gloves</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>11-394-95(sz)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Surgical scrub sponges</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Moore medical</td>
<td>42940AK</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltex</td>
<td>6-114 and 6-26</td>
<td>2 with teeth, 2 straight</td>
</tr>
<tr>
<td>Dissecting scissors n=2</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltex</td>
<td>5-290</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Oster razor (sz. 40 blade)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>01-305-10B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>4x4 Sterile gauze pads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Moore Medical</td>
<td>08252AK</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Povidone Iodine pads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Moore Medical</td>
<td>08486AK</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alcohol pads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>14-819-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Heating pad</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Moore Medical</td>
<td>42508AK</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>23G or 25G needles</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>1" long</td>
</tr>
<tr>
<td>Cidex solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Moore Medical</td>
<td>07535AK</td>
<td>for cleaning/santizing instruments</td>
</tr>
<tr>
<td>PE50 polyethylene tubing</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>427411</td>
<td>PE50, 0.965mm O.D. x 0.58mm I.D.</td>
</tr>
<tr>
<td>Cidex + 28 day soln</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Moore</td>
<td>35625AK</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silicone tubing</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Spectrum Chromat.</td>
<td>123732</td>
<td>5/32&#x201D;OD x 1/32&#x201D; ID</td>
</tr>
<tr>
<td>Instrument sterilizing container</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Moore Medical</td>
<td>39074AK</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Straight Pipet Tips</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>TipOne</td>
<td>1111-0810</td>
<td>sterile</td>
</tr>
<tr>
<td>Glass syringe w/screw-drive</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hamilton</td>
<td>1001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cauterizing tool</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS230</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Needle Holder</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Moore Medical</td>
<td>41-067</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>5-0 silk</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Look</td>
<td>754B</td>
<td>for suture (6-C) </td>
</tr>
<tr>
<td>Cotton tipped swab</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Moore Medical</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>9mm autoclip stapler</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>7630</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>9mm staples</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>7631</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>9mm staple remover</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>7637</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>
		

transplantation of pancreatic islets into the kidney capsule of diabetic mice

<p class="jove_content"> Nosso protocolo foi desenvolvido para fornecer precisão e facilidade ilhotas ou células sob a cápsula renal de ratos diabéticos ou normal. Descobrimos que era mais fácil concentrar as ilhotas ou células em pelotas na tubulação de entrega final (PE50) utilizado para o transplante de células sob a cápsula renal. Esta técnica fornece a velocidade e facilidade, reduzindo qualquer estresse para as células ou para o mouse. </p><p class="jove_content"> Loading: Settled, escolhidos a dedo, ou células ilhotas peletizadas são cuidadosamente aspirado fora da parte inferior de um tubo de microcentrífuga de 1,5 mL usando um pipetteman p200 e uma reta, de parede fina ponta da pipeta. Um comprimento de tubos PE50 está ligado à ponta da pipeta usando um tubo de pequeno adaptador silicone. Células estão autorizados a resolver, na ponta, e depois são transferidos para o tubo PE50 lentamente por marcar o pipetteman. Uma vez que as células estão perto do fim do tubo PE50, uma torção é feita eo adaptador de tubo de silicone é colocado sobre o kink. A tubulação PE50 é transferido para a 15 mL uma pipeta de corte cônico contendo 5 mL, e os tubos PE50 é gravado sobre o lado da pipeta de 5 mL para evitar curling durante a centrifugação. Células podem chegar a 1.000 rpm e parou. </p><p class="jove_content"> Transplante: ratos são anestesiados destinatário, raspada e limpa. Uma pequena incisão é feita no flanco esquerdo do mouse e do rim está exposto. O rim, tecido adiposo, tecido e são mantidas úmidas com uma compressa de soro fisiológico. A extremidade distal do PE50 é anexado a uma seringa Hamilton movimentação do parafuso, contendo uma ponta de pipeta, usando o tubo adaptador silicone. Um nick pequeno é feito no lado do flanco direito do rim, não muito grande nem muito profundo. O fim chanfrada do tubo PE50, mais próximo das células, é cuidadosamente colocada sob a cápsula, a tubulação é movido suavemente para dar espaço ao mesmo tempo limpando soro fisiológico; uma cápsula seca pode rasgar facilmente. Uma pequena bolha de ar é fornecido sob a cápsula por lentamente marcação da unidade de rosca seringa. Ilhotas são entregues em seguida, lentamente por trás da bolha de ar. Homeostase renal uma vez que as ilhotas foram entregues é mantido e os knick é cauterizado com fogo baixo. O rim é colocado de volta na cavidade e do peritônio e da pele são suturados e grampeados. Ratos são imediatamente tratados com Flunixina quadrados e buprenorfina e colocado em uma jaula em uma almofada de aquecimento. </p>

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Transplantation of Pancreatic Islets Into the Kidney Capsule of Diabetic Mice

<p class="jove_content">Nosso protocolo foi desenvolvido para fornecer precisão e facilidade ilhotas ou células sob a cápsula renal de camundongos. Células estão concentradas em pelotas na tubulação final utilizada para o transplante de células sob a cápsula renal. A facilidade desta técnica reduz o estresse nas células e mouse.</p>

Transplante de ilhotas pancreáticas para a cápsula renal de ratos diabéticos

Our protocol was developed to cleanly and easily deliver islets or cells under the kidney capsule of diabetic or normal mice.  We found that it was easier ...

Research

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Biology

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