Name: transplantation of pancreatic islets into the kidney capsule of diabetic mice
Uploaded: 2007-10-31T23:37:26
Description: Watch this Scientific Journal Video about Transplantation of Pancreatic Islets Into the Kidney Capsule of Diabetic Mice at JoVE.com

<p> UCSF Diabetes Center. NIH UCSF DERC Islet Core. JDRF. LifeScan Inc. Johnson &amp; Johnson-företag. </p>

<p class="jove_title"> Beredning av Islets för transplantation (Tx) </p><ol><li> Enligt ett inverterat mikroskop, handplocka holmar med en P200 pipetman och rak pipettspetsen från odlade holmar i en 100 mm platta. </li><li> Räkna holmar 100 åt gången och överföring till varje mikrocentrifugrör (~ 500 holmar / rör / mus). </li><li> Låt holmar att bosätta sig på botten av mikrocentrifugrör. </li><li> Rita en holme pelleten i ett P200 pipetman (inställd på 130ul) med en rak tunnväggigt pipettspetsen. </li><li> Placera en adapter si...

<ol>
	<li>Tang, Q., Henriksen, K. J., Bi, M., Finger, E. B., Szot, G., Ye, J., Masteller, E. L., McDevitt, H., Bonyhadi, M., Bluestone, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro-expanded+antigen-specific+regulatory+T+cells+suppress+autoimmune+diabetes.">In vitro-expanded antigen-specific regulatory T cells suppress autoimmune diabetes.</a> <em style='font-style: italic'>J Exp Med</em>. <b>199</b>, 1455-1465 (2004).</li><li>Rulifson, I. C., Szot, G. L., Palmer, E., Bluestone, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inability+to+induce+tolerance+through+direct+antigen+presentation.">Inability to induce tolerance through direct antigen presentation.</a> <em style='font-style: italic'>Am J Transplant</em>. <b>2</b>, 510-519 (2002).</li><li>Lenschow, D. J., Zeng, Y., Hathcock, K. S., Zuckerman, L. A., Freeman, G., Thistlethwaite, J. R., Gray, G. S., Hodes, R. J., Bluestone, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+transplant+rejection+following+treatment+with+anti-B7-2+and+anti-B7-1+antibodies.+Transplantation.">Inhibition of transplant rejection following treatment with anti-B7-2 and anti-B7-1 antibodies. Transplantation.</a> <em style='font-style: italic'>Transplantation</em>. <b>60</b>, 1171-1178 (1995).</li><li>Lenschow, D. J., Zeng, Y., Thistlethwaite, J. R., Montag, A., Brady, W., Gibson, M. G., Linsley, P. S., Bluestone, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-term+survival+of+xenogeneic+pancreatic+islet+grafts+induced+by+CTLA4lg.">Long-term survival of xenogeneic pancreatic islet grafts induced by CTLA4lg.</a> <em style='font-style: italic'>Science</em>. <b>257</b>, 789-792 (1992).</li></ol>

<p> Detta protokoll ger ett praktiskt och effektivt alternativ för snyggt och enkelt leverera holmar eller celler i njuren kapsel diabetiker eller normala möss. Tekniken att koncentrera och pelletering av insulinproducerande celler eller i den slutliga leveransen slangen (PE50) används för att transplantera celler i njurarna kapsel erbjuder en enkel och effektiv metod att transplantera celler samtidigt som all onödig stress på cellerna eller till musen. </p>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Surgical gloves</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>11-394-95(sz)</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Surgical scrub sponges</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Moore medical</td>
<td>42940AK</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltex</td>
<td>6-114 and 6-26</td>
<td>2 with teeth, 2 straight</td>
</tr>
<tr>
<td>Dissecting scissors n=2</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Miltex</td>
<td>5-290</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Oster razor (sz. 40 blade)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>01-305-10B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>4x4 Sterile gauze pads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Moore Medical</td>
<td>08252AK</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Povidone Iodine pads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Moore Medical</td>
<td>08486AK</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Alcohol pads</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>14-819-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Heating pad</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Moore Medical</td>
<td>42508AK</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>23G or 25G needles</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>1" long</td>
</tr>
<tr>
<td>Cidex solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Moore Medical</td>
<td>07535AK</td>
<td>for cleaning/santizing instruments</td>
</tr>
<tr>
<td>PE50 polyethylene tubing</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>427411</td>
<td>PE50, 0.965mm O.D. x 0.58mm I.D.</td>
</tr>
<tr>
<td>Cidex + 28 day soln</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Moore</td>
<td>35625AK</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silicone tubing</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Spectrum Chromat.</td>
<td>123732</td>
<td>5/32&#x201D;OD x 1/32&#x201D; ID</td>
</tr>
<tr>
<td>Instrument sterilizing container</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Moore Medical</td>
<td>39074AK</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Straight Pipet Tips</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>TipOne</td>
<td>1111-0810</td>
<td>sterile</td>
</tr>
<tr>
<td>Glass syringe w/screw-drive</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Hamilton</td>
<td>1001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cauterizing tool</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Roboz</td>
<td>RS230</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Needle Holder</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Moore Medical</td>
<td>41-067</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>5-0 silk</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Look</td>
<td>754B</td>
<td>for suture (6-C) </td>
</tr>
<tr>
<td>Cotton tipped swab</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Moore Medical</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>9mm autoclip stapler</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>7630</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>9mm staples</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>7631</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>9mm staple remover</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD</td>
<td>7637</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>
		

transplantation of pancreatic islets into the kidney capsule of diabetic mice

<p class="jove_content"> Vår protokoll har utvecklats för att rent och enkelt leverera holmar eller celler i njuren kapsel diabetiker eller normala möss. Vi fann att det var lättare att koncentrera insulinproducerande celler eller till pellets i den slutliga leveransen slangen (PE50) används för att transplantera celler i njuren kapsel. Denna teknik ger både snabbt och enkelt samtidigt som all onödig stress på cellerna eller till musen. </p><p class="jove_content"> Laddar: Fast, plockade handen, holmar eller pelleterat celler noggrant aspirerade från botten av en 1,5 ml mikrocentrifugrör med en P200 pipetteman och en rak, tunnväggigt pipettspetsen. En längd på PE50 slangen är fäst vid pipettspetsen med en liten slang silikon adapter. Celler har rätt att bosätta sig i spetsen, och sedan överförs till PE50 slangen genom att långsamt slå pipetteman. När cellerna är nära slutet av PE50 rör, är en knut göras och silikon adaptern slangen placeras över knut. Den PE50 slangen förs över till en 15 ml E innehåller ett snitt 5 ml pipett och PE50 slangen är tejpade över den sida av 5 ml pipett för att förhindra curling under centrifugering. Celler är tillåtna för att nå 1000 rpm och stannade. </p><p class="jove_content"> Transplantation: Mottagarens möss är sövda, rakade, och rengöras. Ett litet snitt görs på den vänstra flanken av musen och njurarna är utsatt. Njuren, fett och vävnad hålls fuktig med fysiologisk koksaltlösning provstickan. Den distala änden av PE50 är ansluten till en Hamilton skruv köra sprutan, som innehåller en pipettspets, med hjälp av slangen silikon adaptern. En liten nick görs på den högra flanken sida av njuren, inte för stora eller för djupt. Den avfasade änden av PE50 rör, närmast celler, noggrant placeras under kapseln är slangen flyttas runt försiktigt för att ge plats medan badda koksaltlösning, en torr kapsel kan riva lätt. En liten luftbubbla levereras under kapseln genom att långsamt slå kör sprutan skruven. Holmar är sedan långsamt levereras bakom luftbubbla. När holmar har levererats njure homeostas upprätthålls och Knick är flamberats med låg temperatur. Njuren placeras tillbaka in i hålrummet och bukhinna och hud är sys och häftas. Möss är omedelbart behandlas med Flunixin och Buprenorfin kvm och placeras i en bur på en värmedyna. </p>

Watch this Scientific Journal Video about Transplantation of Pancreatic Islets Into the Kidney Capsule of Diabetic Mice at JoVE.com

Transplantation of Pancreatic Islets Into the Kidney Capsule of Diabetic Mice

<p class="jove_content">Vår protokoll har utvecklats för att rent och enkelt leverera holmar eller celler i njuren kapsel möss. Celler är koncentrerade till pellets i den slutliga slangar som används för omplantering cellerna i njuren kapsel. Enkelheten i denna teknik minskar stressen till cellerna och musen.</p>

Transplantation av pankreasöarna in i njuren Capsule av diabetiska möss

Our protocol was developed to cleanly and easily deliver islets or cells under the kidney capsule of diabetic or normal mice.  We found that it was easier ...

Research

JoVE Journal

Biology

Transplantation of Whole Kidney Marrow in Adult Zebrafish

Transplantation av hela Njure Marrow i vuxen Zebrafish

Hematopoietic stem cells (HSC) are a rare population of pluripotent cells that maintain all the differentiated blood lineages throughout the life of an ...

Heterotopic Heart Transplantation in Mice

Heterotopisk Hjärttransplantation hos möss

The mouse heterotopic heart transplantation has been used widely since it was introduced by Drs. Corry and Russell in 1973. It is particularly valuable ...

Small Bowel Transplantation In Mice

Tunntarmen Transplantation hos möss

Since 1990, the development of tacrolimus-based immunosuppression and improved surgical techniques, the increased array of potent immunosuppressive ...

Murine Renal Transplantation Procedure

Murina njurtransplantation Förfarande

Renal orthotopic transplantation in mice is a technically challenging procedure. Although the first kidney transplants in mice were performed by Russell ...

Human Pancreatic Islet Isolation: Part II: Purification and Culture of Human Islets

Mänskliga Pancreatic Islet Isolering: Del II: Rening och kultur för mänskliga Islets

Management of Type 1 diabetes is burdensome, both to the individual and society, costing over 100 billion dollars annually. Despite the widespread use of ...

<em>In situ</em> Quantification of Pancreatic Beta-cell Mass in Mice

In situ Quantification of Pancreatic Beta-cell Mass in Mice

<em>In situ</em> Kvantifiering av bukspottkörteln-cellmassan hos möss

Tracing changes of specific cell populations in health and disease is an important goal of biomedical research. The process of monitoring pancreatic ...

Computer-assisted Large-scale Visualization and Quantification of Pancreatic Islet Mass, Size Distribution and Architecture

Datorstödd Storskaliga Visualisering och kvantifiering av bukspottkörtel Islet Mass, storleksfördelning och Arkitektur

The pancreatic islet is a unique micro-organ composed of several hormone secreting endocrine cells such as beta-cells (insulin), alpha-cells (glucagon), ...

Transplantation of Cells Directly into the Kidney of Adult Zebrafish

Transplantation av celler direkt in i njuren för vuxna Zebrafish

Regenerative medicine based on the transplantation of stem or progenitor cells into damaged tissues has the potential to treat a wide range of chronic ...

Dissection of the Adult Zebrafish Kidney

Dissekering av vuxna Zebrafish Kidney

Researchers working in the burgeoning field of adult stem cell biology seek to understand the signals that regulate the behavior and function of stem ...

Germ Cell Transplantation and Testis Tissue Xenografting in Mice

Könscell Transplantation och testiklar Tissue Xenografting hos möss

Germ cell transplantation was developed by Dr. Ralph Brinster and colleagues at the University of Pennsylvania in 19941,2. These ground-breaking studies ...