Name: gene transfer into older chicken embryos by ex ovo electroporation
Uploaded: 2012-07-27T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation at JoVE.com

وأيد هذا العمل عن طريق منحة من مؤسسة البحوث الألمانية (DFG؛ LU1455/1-1).

1. سابق الثقافة OVO <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضعت جديدة البويضات المخصبة على الجانب الطويل في حاضنة القسري مشروع-(BSS160، Ehret، ألمانيا) على 37،5 درجة مئوية مع رطوبة 60٪ للحضانة. لا ينبغي أن البيض المخزنة في 12 درجة مئوية لمدة أطول من أسبوع واح?...

<ol>
	<li>Momose, T., Tonegawa, A., Takeuchi, J., Ogawa, H., Umesono, K., Yasuda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+targeting+of+gene+expression+in+chick+embryos+by+microelectroporation.">Efficient targeting of gene expression in chick embryos by microelectroporation.</a> Dev. Growth Differ. 41, 335-344 (1999).</li><li>Luo, J., Ju, M. J., Lin, J., Yan, X., Markus, A., Mix, E., Rolfs, A., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadherin-20+expression+by+motor+neurons+is+regulated+by+Sonic+hedgehog+during+spinal+cord+development.">Cadherin-20 expression by motor neurons is regulated by Sonic hedgehog during spinal cord development.</a> NeuroReport. 20, 365-370 (2009).</li><li>Luo, J., Ju, M. J., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regionalized+cadherin-7+expression+by+radial+glia+is+regulated+by+Shh+and+Pax7+during+chicken+spinal+cord+development.">Regionalized cadherin-7 expression by radial glia is regulated by Shh and Pax7 during chicken spinal cord development.</a> Neuroscience. 142, 1133-1143 (2006).</li><li>Nakamura, H., Katahira, T., Sato, T., Watanabe, Y., Funahashi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gain-+and+loss-of-function+in+chick+embryos+by+electroporation.">Gain- and loss-of-function in chick embryos by electroporation.</a> Mech. Dev. 121, 1137-1143 (2004).</li><li>Dai, F., Yusuf, F., Farjah, G. H., Brand-Saberi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAi-induced+targeted+silencing+of+developmental+control+genes+during+chicken+embryogenesis.">RNAi-induced targeted silencing of developmental control genes during chicken embryogenesis.</a> Dev. Biol. 258, 80-90 (2005).</li><li>Rao, M., Baraban, J. H., Rajaii, F., Sockanathan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+comparative+study+of+RNAi+methodologies+by+in+ovo+electroporation+in+the+chick+embryo.">In vivo comparative study of RNAi methodologies by in ovo electroporation in the chick embryo.</a> Dev. Dyn. 231, 592-600 (2004).</li><li>Kos, R., Tucker, R. P., Hall, R., Duong, T. D., Erickson, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+introducing+morpholinos+into+the+chicken+embryo.">Methods for introducing morpholinos into the chicken embryo.</a> Dev. Dyn. 226, 470-477 (2003).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> J. Morphol. 88, 49-92 (1951).</li><li>Auerbach, R., Kubai, L., Knighton, D., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+procedure+for+the+long-term+cultivation+of+chicken+embryos.">A simple procedure for the long-term cultivation of chicken embryos.</a> Dev. Biol. 10, 391-394 (1974).</li><li>Luo, J., Treubert-Zimmermann, U., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadherins+guide+migrating+Purkinje+cells+to+specific+parasagittal+domains+during+cerebellar+development.">Cadherins guide migrating Purkinje cells to specific parasagittal domains during cerebellar development.</a> Mol. Cell. Neurosci. 25, 138-152 (2004).</li><li>Luo, J., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+ovo+electroporation+for+gene+transfer+into+older+chicken+embryos.">Ex ovo electroporation for gene transfer into older chicken embryos.</a> Dev. Dyn. 233, 1470-1477 (2005).</li><li>Treubert-Zimmermann, U., Heyers, D., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+axons+to+specific+fiber+tracts+in+vivo+by+altering+cadherin+expression.">Targeting axons to specific fiber tracts in vivo by altering cadherin expression.</a> J. Neurosci. 22, 7617-7626 (2002).</li></ol>

هذا البروتوكول يوفر دليلا لنقل الجينات إلى أجنة أقدم الدجاج (على سبيل المثال، في السقف البصري في E6) بواسطة electroporation OVO السابقين. وتمتد هذه الطريقة على استخدام electroporation إلى أجنة الدجاج وكبار السن ويمكن تطبيقها بسهولة على العديد من المختبرات لدراسة وظيفة الجينات <em...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td></tr><tr><td> Electroporator </td><td> نيبا جين، اليابان </td><td> CUY21-تحرير </td></tr><tr><td> الأقطاب الكهربائية </td><td> نيبا جين، اليابان </td><td> CUY661-3x7 </td></tr><tr><td> البيض الحاضنة </td><td> Ehret، ألمانيا </td><td> BSS160 </td></tr><tr><td> جنين حاضنة </td><td> BINDER GmbH، ألمانيا </td><td></td></tr><tr><td> فلوري المجهر </td><td> Keyence، شركة محدودة دويتشلاند </td><td> BZ-8000 </td></tr><tr><td> طبق بتري </td><td> غرينر بيو واحد GmbH، ألمانيا </td><td></td></tr><tr><td> Microelectrode مجتذب </td><td> عالم أدوات دقيقة، ألمانيا </td><td> PUL-100 </td></tr></tbody></table>

gene transfer into older chicken embryos by ex ovo electroporation

الجنين الدجاج ويوفر نظام نموذجا ممتازا لدراسة وظيفة الجين والتنظيم أثناء التطور الجنيني. في electroporation OVO هو وسيلة قوية لالافراط في التعبير عن الجينات الخارجية أو أسفل تنظيم الجينات الذاتية في الجسم الحي في أجنة الدجاج 1. ويمكن هياكل مختلفة مثل جينات الحمض النووي الترميز البلازميدات 2-4، صغيرة تدخل الحمض النووي الريبي (سيرنا) البلازميدات 5، صغيرة الاصطناعية RNA oligos 6، و [أليغنوكليوتيد] morpholino العقاقير 7 transfected بسهولة في أجنة الدجاج بواسطة electroporation. ومع ذلك، يقتصر تطبيق في electroporation البيضة إلى الأجنة في مراحل الحضانة في وقت مبكر (الذين تقل أعمارهم عن مرحلة HH20 - وفقا لهامبورغ وهاملتون) 8، وهناك بعض المساوئ لتطبيقه في الأجنة في مراحل لاحقة (أقدم من مرحلة HH22 - ما يقرب من 3.5 أيام التنمية). على سبيل المثال، الغشاء المحي في مراحل لاحقة هو أوسوحليف تمسك الغشاء يجب وفتح نافذة في وعاء يسبب تمزق في الأوعية، مما أدى إلى وفاة الأجنة، وتغطي أقدم الأجنة بواسطة السفن المحي والسقاء، حيث أنه من الصعب الوصول إليها والتلاعب في الأجنة، أقدم أجنة تحرك بقوة ويصعب السيطرة على التوجه من خلال نافذة صغيرة نسبيا في وعاء. في هذا البروتوكول نظهر سابق الأسلوب electroporation OVO لنقل الجينات في أجنة الدجاج في المراحل المتأخرة (أقدم من مرحلة HH22). لelectroporation OVO السابقين، تستزرع الأجنة في أطباق بتري (9) وتنتشر على نطاق واسع المحي والأوعية السقاء. في ظل هذه الظروف، يتم الوصول إليها بسهولة الأجنة أقدم الدجاج والتلاعب بها. ولذلك، هذا الأسلوب يتغلب على عيوب في electroporation OVO تطبيقها على الأجنة أقدم الدجاج. باستخدام هذه الطريقة، يمكن البلازميدات transfected بسهولة إلى أجزاء مختلفةمن أجنة الدجاج أقدم 10-12.

Watch this Scientific Journal Video about Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation at JoVE.com

Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation

وصفت وهناك طريقة لنقل الجينات إلى أجنة الدجاج في مراحل الحضانة في وقت لاحق (أقدم من هامبورغ وهاملتون مرحلة (سمو) 22). هذا الأسلوب يتغلب على عيوب<em&gt; في البيضة</emتطبق&gt; electroporation إلى أجنة الدجاج وأقدم هو تقنية مفيدة لدراسة وظيفة الجين والتنظيم في مراحل أقدم التنموية.

نقل الجينات في أجنة الدجاج أقدم من قبل<em&gt; OVO السابقين</em&gt; Electroporation

The chicken embryo provides an  excellent model system for studying gene function and regulation during  embryonic development. In ovo electroporation is ...

Research

JoVE Journal

Biology

Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation

Nuclear Transfer into Mouse Oocytes

نقل النووي في البويضات ماوس

Nuclear transfer into an unfertilized oocyte can restore developmental potential to a differentiated cell. This demonstrates that the processes underlying ...

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E15 Mouse Embryos

في الرحم وحقن داخل البطيني Electroporation من أجنة الفئران E15

In-utero in-vivo injection and electroporation of the embryonic mouse neocortex provides a powerful tool for the manipulation of individual progenitors ...

Placing Growth Factor-Coated Beads on Early Stage Chicken Embryos

وضع عامل النمو المغلفه الخرز على أجنة الدجاج المرحلة المبكرة

The neural tube expresses many proteins in specific spatiotemporal patterns during development.   These proteins have been shown to be critical for cell ...

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

Electroporations OVO في مرحلة الجنين سمو الدجاج 10

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

التحضير لزراعة الخلايا المكونة للدم الابتدائية من نخاع عظام الفئران لElectroporation

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

Electroporation في الجسم الحي وخارج الرحم للتعبير الجينات في خلايا الشبكية العقدة ماوس

The retina and its sole output neuron, the retinal ganglion cell (RGC), comprise an excellent model in which to examine biological questions such as cell ...

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

كتكوت البيضة السابقين الثقافة و البيضة السابقين CAM الفحص : كيف يعمل حقا

Chicken eggs in the early phase of breeding are between in vitro and in vivo systems and provide a vascular test environment not only to study ...

Using the Gene Pulser MXcell Electroporation System to Transfect Primary Cells with High Efficiency

باستخدام الجينات Electroporation MXcell بولسير النظام لTransfect الخلايا الأولية ذات الكفاءة العالية

Xenotransplantation of Human Stem Cells into the Chicken Embryo

زرع الأعضاء من الخلايا الجذعية البشرية إلى الأجنة الدجاج

The chicken embryo is a classical animal model for studying normal embryonic and fetal development and for xenotransplantation experiments to study the ...

An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

و السابقين البيضة الثقافة الأجنة النظام الدجاج مناسبة للتطبيقات التصوير والجراحة المجهرية

Understanding the relationships between genetic and microenvironmental factors that drive normal and malformed embryonic development is fundamental for ...