Name: gene transfer into older chicken embryos by ex ovo electroporation
Uploaded: 2012-07-27T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door een subsidie ​​van de Duitse Research Foundation (DFG, LU1455/1-1).

1. Ex ovo Cultuur <ol><li> Verse bevruchte eieren worden gelegd op hun lange zijde worden in een heteluchtoven-ontwerp van incubator (BSS160, Ehret, Duitsland) bij 37,5 ° C met 60% vochtigheid voor incubatie. Eieren opgeslagen bij 12 ° C langer dan een week niet worden gebruikt. </li><li> Na incubatie gedurende 2,5 dag (ongeveer stadium HH17), neem de eieren en het etiket van de top met een potlood om richting aan te geven voor het kraken. </li><li> Voor het kraken, giet ongeveer 20 ml steriel gedistilleerd...

<ol>
	<li>Momose, T., Tonegawa, A., Takeuchi, J., Ogawa, H., Umesono, K., Yasuda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+targeting+of+gene+expression+in+chick+embryos+by+microelectroporation.">Efficient targeting of gene expression in chick embryos by microelectroporation.</a> Dev. Growth Differ. 41, 335-344 (1999).</li><li>Luo, J., Ju, M. J., Lin, J., Yan, X., Markus, A., Mix, E., Rolfs, A., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadherin-20+expression+by+motor+neurons+is+regulated+by+Sonic+hedgehog+during+spinal+cord+development.">Cadherin-20 expression by motor neurons is regulated by Sonic hedgehog during spinal cord development.</a> NeuroReport. 20, 365-370 (2009).</li><li>Luo, J., Ju, M. J., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regionalized+cadherin-7+expression+by+radial+glia+is+regulated+by+Shh+and+Pax7+during+chicken+spinal+cord+development.">Regionalized cadherin-7 expression by radial glia is regulated by Shh and Pax7 during chicken spinal cord development.</a> Neuroscience. 142, 1133-1143 (2006).</li><li>Nakamura, H., Katahira, T., Sato, T., Watanabe, Y., Funahashi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gain-+and+loss-of-function+in+chick+embryos+by+electroporation.">Gain- and loss-of-function in chick embryos by electroporation.</a> Mech. Dev. 121, 1137-1143 (2004).</li><li>Dai, F., Yusuf, F., Farjah, G. H., Brand-Saberi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAi-induced+targeted+silencing+of+developmental+control+genes+during+chicken+embryogenesis.">RNAi-induced targeted silencing of developmental control genes during chicken embryogenesis.</a> Dev. Biol. 258, 80-90 (2005).</li><li>Rao, M., Baraban, J. H., Rajaii, F., Sockanathan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+comparative+study+of+RNAi+methodologies+by+in+ovo+electroporation+in+the+chick+embryo.">In vivo comparative study of RNAi methodologies by in ovo electroporation in the chick embryo.</a> Dev. Dyn. 231, 592-600 (2004).</li><li>Kos, R., Tucker, R. P., Hall, R., Duong, T. D., Erickson, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+introducing+morpholinos+into+the+chicken+embryo.">Methods for introducing morpholinos into the chicken embryo.</a> Dev. Dyn. 226, 470-477 (2003).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> J. Morphol. 88, 49-92 (1951).</li><li>Auerbach, R., Kubai, L., Knighton, D., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+procedure+for+the+long-term+cultivation+of+chicken+embryos.">A simple procedure for the long-term cultivation of chicken embryos.</a> Dev. Biol. 10, 391-394 (1974).</li><li>Luo, J., Treubert-Zimmermann, U., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadherins+guide+migrating+Purkinje+cells+to+specific+parasagittal+domains+during+cerebellar+development.">Cadherins guide migrating Purkinje cells to specific parasagittal domains during cerebellar development.</a> Mol. Cell. Neurosci. 25, 138-152 (2004).</li><li>Luo, J., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+ovo+electroporation+for+gene+transfer+into+older+chicken+embryos.">Ex ovo electroporation for gene transfer into older chicken embryos.</a> Dev. Dyn. 233, 1470-1477 (2005).</li><li>Treubert-Zimmermann, U., Heyers, D., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+axons+to+specific+fiber+tracts+in+vivo+by+altering+cadherin+expression.">Targeting axons to specific fiber tracts in vivo by altering cadherin expression.</a> J. Neurosci. 22, 7617-7626 (2002).</li></ol>

Dit protocol geeft een leidraad voor gentransfer in oudere kippenembryo&#39;s (bijvoorbeeld in de optische tectum op E6) door ex ovo elektroporatie. Deze methode breidt het gebruik van elektroporatie oudere kippen embryo&#39;s en kunnen eenvoudig worden toegepast voor het bestuderen vele laboratoria genfunctie in vivo in een later stadium. Embryo van E4 tenminste E7 succes kan worden geëlektroporeerd met deze methode de geëlektroporeerde embryo&#39;s overleving tot E15 11. Naast de hersene...

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td></tr><tr><td> Electroporator </td><td> Nepa Gene, Japan </td><td> CUY21-Edit </td></tr><tr><td> Elektroden </td><td> Nepa Gene, Japan </td><td> CUY661-3x7 </td></tr><tr><td> Egg incubator </td><td> Ehret, Duitsland </td><td> BSS160 </td></tr><tr><td> Embryo incubator </td><td> Binder GmbH, Duitsland </td><td></td></tr><tr><td> TL-microscoop </td><td> Keyence, Deutschland GmbH </td><td> BZ-8000 </td></tr><tr><td> Petrischaal </td><td> Greiner Bio-One GmbH, Duitsland </td><td></td></tr><tr><td> Micro-elektrode trekker </td><td> Wereld precisie-instrumenten, Duitsland </td><td> PUL-100 </td></tr></tbody></table>

gene transfer into older chicken embryos by ex ovo electroporation

De kip embryo biedt een uitstekende modelsysteem voor het bestuderen van gen-functie en regulatie tijdens de embryonale ontwikkeling. In ovo elektroporatie is een krachtige methode om overexpressie van exogene genen of endogene genen in vivo down-reguleren in kippenembryo&#39;s 1. Verschillende structuren zoals DNA plasmiden coderende genen 2-4 kleine interfererende RNA (siRNA) plasmiden 5 kleine kunststof RNA-oligo 6 en morfolino antisense oligonucleotiden 7 kan gemakkelijk worden getransfecteerd in kippenembryo door elektroporatie. Echter, de toepassing van in-ovo electroporatie beperkt tot embryo&#39;s in een vroeg stadium incubatie (jonger dan stadium HH20 - volgens Hamburg en Hamilton) 8 en er zijn enkele nadelen voor de toepassing ervan in embryo&#39;s in een later stadium (ouder dan stadium HH22 - ongeveer 3,5 dagen van de ontwikkeling). Bijvoorbeeld, de vitelline membraan in een later stadium is usubondgenoot vast aan de Shall membraan en het openen van een raam in de schelp veroorzaakt breuk van de schepen, de dood als gevolg van de embryo&#39;s; oudere embryo&#39;s worden gedekt door vitelline en allantoïs schepen, waar het moeilijk is om toegang te krijgen en manipuleren van de embryo&#39;s; oudere embryo&#39;s te verplaatsen krachtig en is het moeilijk om de oriëntatie te controleren door middel van een relatief klein venster in de shell. In dit protocol tonen we aan een ex ovo elektroporatie methode voor gentransfer in kippenembryo&#39;s in de late stadia (ouder dan stadium HH22). Voor ex ovo elektroporatie, worden embryo&#39;s gekweekt in petrischalen 9 en de vitelline en allantoïs schepen worden op grote schaal verspreid. Onder de voorwaarden, worden de oudere kippenembryo&#39;s gemakkelijk bereikbaar en gemanipuleerd. Derhalve is deze methode overwint de nadelen van in ovo elektroporatie op de oudere kippenembryo&#39;s. Met deze methode kan plasmiden getransfecteerd gemakkelijk in verschillende delenvan de oude kippenembryo&#39;s 10-12.

Watch this Scientific Journal Video about Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation at JoVE.com

Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation

Werkwijze voor genoverdracht in kippenembryo&#39;s bij later stadium incubatie (ouder dan Hamburger Hamilton fase (HH) 22) beschreven. Deze methode overwint nadelen<em&gt; In ovo</em&gt; Elektroporatie toegepast op oudere kippen embryo&#39;s en is een nuttige techniek om genen functie en regelgeving op oudere ontwikkelingsstadia te bestuderen.

Gentransfer in Oudere kippenembryo&#39;s door<em&gt; Ex ovo</em&gt; Elektroporatie

The chicken embryo provides an  excellent model system for studying gene function and regulation during  embryonic development. In ovo electroporation is ...

Research

JoVE Journal

Biology

Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation

Nuclear Transfer into Mouse Oocytes

Nuclear Transfer naar Mouse Eicellen

Nuclear transfer into an unfertilized oocyte can restore developmental potential to a differentiated cell. This demonstrates that the processes underlying ...

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E15 Mouse Embryos

In Utero Intraventriculaire injectie en elektroporatie van de E15 muizenembryo&#39;s

In-utero in-vivo injection and electroporation of the embryonic mouse neocortex provides a powerful tool for the manipulation of individual progenitors ...

Placing Growth Factor-Coated Beads on Early Stage Chicken Embryos

Het plaatsen van Growth Factor-Coated Kralen op Early Stage kippenembryo&#39;s

The neural tube expresses many proteins in specific spatiotemporal patterns during development.   These proteins have been shown to be critical for cell ...

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

In Ovo Electroporations van HH Stage 10 kippenembryo&#39;s

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

De vervaardiging van primaire hematopoietische cellen culturen uit Murine Bone Marrow voor Elektroporatie

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

In utero en ex vivo Elektroporatie voor Gene Expression Mouse in retinale ganglioncellen

The retina and its sole output neuron, the retinal ganglion cell (RGC), comprise an excellent model in which to examine biological questions such as cell ...

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Kuiken Ex ovo Cultuur en Ex ovo CAM test: Hoe het echt werkt

Chicken eggs in the early phase of breeding are between in vitro and in vivo systems and provide a vascular test environment not only to study ...

Using the Gene Pulser MXcell Electroporation System to Transfect Primary Cells with High Efficiency

Met behulp van de Gene Puiser MXcell Elektroporatie systeem om primaire cellen transfecteren met een hoog rendement

Xenotransplantation of Human Stem Cells into the Chicken Embryo

Xenotransplantatie van menselijke stamcellen in het kippenembryo

The chicken embryo is a classical animal model for studying normal embryonic and fetal development and for xenotransplantation experiments to study the ...

An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

Een Ex-ovo Chicken Embryo Cultuur systeem geschikt voor Imaging en microchirurgie toepassingen

Understanding the relationships between genetic and microenvironmental factors that drive normal and malformed embryonic development is fundamental for ...