Name: gene transfer into older chicken embryos by ex ovo electroporation
Uploaded: 2012-07-27T12:00:00
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Ce travail a été soutenu par une subvention de la recherche allemande (DFG; LU1455/1-1).

1. Ex ovo Culture <ol><li> Frais œufs fécondés sont pondus sur leur côté le plus long dans un tirage forcé incubateur (BSS160, Ehret, Allemagne) à 37,5 ° C avec une humidité de 60% pour l&#39;incubation. Les œufs stockés à 12 ° C pendant plus d&#39;une semaine ne devrait pas être utilisé. </li><li> Après une incubation de 2,5 jours (environ stade HH17), sortez les œufs et étiqueter le dessus avec un crayon pour indiquer la direction de la fissuration. </li><li> Avant la fissuration, verser e...

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	<li>Momose, T., Tonegawa, A., Takeuchi, J., Ogawa, H., Umesono, K., Yasuda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+targeting+of+gene+expression+in+chick+embryos+by+microelectroporation.">Efficient targeting of gene expression in chick embryos by microelectroporation.</a> Dev. Growth Differ. 41, 335-344 (1999).</li><li>Luo, J., Ju, M. J., Lin, J., Yan, X., Markus, A., Mix, E., Rolfs, A., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadherin-20+expression+by+motor+neurons+is+regulated+by+Sonic+hedgehog+during+spinal+cord+development.">Cadherin-20 expression by motor neurons is regulated by Sonic hedgehog during spinal cord development.</a> NeuroReport. 20, 365-370 (2009).</li><li>Luo, J., Ju, M. J., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regionalized+cadherin-7+expression+by+radial+glia+is+regulated+by+Shh+and+Pax7+during+chicken+spinal+cord+development.">Regionalized cadherin-7 expression by radial glia is regulated by Shh and Pax7 during chicken spinal cord development.</a> Neuroscience. 142, 1133-1143 (2006).</li><li>Nakamura, H., Katahira, T., Sato, T., Watanabe, Y., Funahashi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gain-+and+loss-of-function+in+chick+embryos+by+electroporation.">Gain- and loss-of-function in chick embryos by electroporation.</a> Mech. Dev. 121, 1137-1143 (2004).</li><li>Dai, F., Yusuf, F., Farjah, G. H., Brand-Saberi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAi-induced+targeted+silencing+of+developmental+control+genes+during+chicken+embryogenesis.">RNAi-induced targeted silencing of developmental control genes during chicken embryogenesis.</a> Dev. Biol. 258, 80-90 (2005).</li><li>Rao, M., Baraban, J. H., Rajaii, F., Sockanathan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+comparative+study+of+RNAi+methodologies+by+in+ovo+electroporation+in+the+chick+embryo.">In vivo comparative study of RNAi methodologies by in ovo electroporation in the chick embryo.</a> Dev. Dyn. 231, 592-600 (2004).</li><li>Kos, R., Tucker, R. P., Hall, R., Duong, T. D., Erickson, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+introducing+morpholinos+into+the+chicken+embryo.">Methods for introducing morpholinos into the chicken embryo.</a> Dev. Dyn. 226, 470-477 (2003).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> J. Morphol. 88, 49-92 (1951).</li><li>Auerbach, R., Kubai, L., Knighton, D., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+procedure+for+the+long-term+cultivation+of+chicken+embryos.">A simple procedure for the long-term cultivation of chicken embryos.</a> Dev. Biol. 10, 391-394 (1974).</li><li>Luo, J., Treubert-Zimmermann, U., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadherins+guide+migrating+Purkinje+cells+to+specific+parasagittal+domains+during+cerebellar+development.">Cadherins guide migrating Purkinje cells to specific parasagittal domains during cerebellar development.</a> Mol. Cell. Neurosci. 25, 138-152 (2004).</li><li>Luo, J., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+ovo+electroporation+for+gene+transfer+into+older+chicken+embryos.">Ex ovo electroporation for gene transfer into older chicken embryos.</a> Dev. Dyn. 233, 1470-1477 (2005).</li><li>Treubert-Zimmermann, U., Heyers, D., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+axons+to+specific+fiber+tracts+in+vivo+by+altering+cadherin+expression.">Targeting axons to specific fiber tracts in vivo by altering cadherin expression.</a> J. Neurosci. 22, 7617-7626 (2002).</li></ol>

Ce protocole fournit un guide pour le transfert de gènes dans des embryons de poulet âgés (par exemple, dans le toit optique à E6) par électroporation in ovo ex. Cette méthode étend l&#39;utilisation de l&#39;électroporation à des embryons de poulet âgés et peut être facilement appliquée à de nombreux laboratoires pour étudier la fonction des gènes in vivo à des stades ultérieurs. Les embryons de E4 à au moins E7 peut être avec succès par électroporation par ce procédé et les em...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td></tr><tr><td> Electroporateur </td><td> Nepa Gene, le Japon </td><td> CUY21-Edit </td></tr><tr><td> Électrodes </td><td> Nepa Gene, le Japon </td><td> CUY661-3x7 </td></tr><tr><td> Egg incubateur </td><td> Ehret, Allemagne </td><td> BSS160 </td></tr><tr><td> Embryon incubateur </td><td> BINDER GmbH, Allemagne </td><td></td></tr><tr><td> Microscope à fluorescence </td><td> Keyence, Deutschland GmbH </td><td> BZ-8000 </td></tr><tr><td> Une boîte de Pétri </td><td> Greiner Bio-One GmbH, Allemagne </td><td></td></tr><tr><td> Extracteur de microélectrodes </td><td> Mondiale Precision Instruments, en Allemagne </td><td> PUL-100 </td></tr></tbody></table>

gene transfer into older chicken embryos by ex ovo electroporation

L&#39;embryon de poulet fournit un excellent modèle pour étudier la fonction des gènes et de la réglementation au cours du développement embryonnaire. En électroporation in ovo est une méthode puissante pour surexprimer des gènes exogènes ou vers le bas-réguler les gènes endogènes in vivo dans les embryons de poulet 1. Différentes structures telles que les plasmides ADN codant pour les gènes 2-4, petits ARN interférents (siARN) plasmides 5, petite ARN synthétique oligos 6, et morpholino oligonucléotides antisens 7 peut être facilement transfecté dans des embryons de poulet par électroporation. Toutefois, l&#39;application d &#39;électroporation in ovo est limitée aux embryons à des stades d&#39;incubation au début (plus jeune que le stade HH20 - selon Hambourg et Hamilton) et 8 il ya quelques inconvénients pour son application dans les embryons à des stades ultérieurs (plus que le stade HH22 - environ 3,5 jours de développement). Par exemple, la membrane vitelline à un stade ultérieur est généraleallié collé à la membrane doit et d&#39;ouvrir une fenêtre dans la coquille provoque la rupture des vaisseaux, entraînant la mort des embryons; âgés embryons sont couverts par vaisseaux vitellins et allantoïdien, où il est difficile d&#39;accès et de manipuler les embryons; âgés embryons déplacer vigoureusement et il est difficile de contrôler l&#39;orientation à travers une fenêtre relativement faible dans la coquille. Dans ce protocole, nous démontrons une méthode d&#39;électroporation in ovo ex de transfert de gènes dans des embryons de poulet à des stades tardifs (plus que le stade HH22). Pour l&#39;électroporation in ovo ex, les embryons sont cultivés dans des boîtes de Pétri de 9 et de la vitelline et les vaisseaux allantoïde sont largement répandues. Dans ces conditions, les embryons de poulet âgés sont facilement accessibles et manipulables. Par conséquent, cette méthode permet de surmonter les inconvénients de l&#39;électroporation in ovo dans appliqués aux embryons de poulet âgés. En utilisant cette méthode, des plasmides peuvent être facilement transfecté dans les différentes partiesdes embryons de poulet âgés 10-12.

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Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation

Une méthode de transfert de gènes dans des embryons de poulet à des stades d&#39;incubation plus tard (plus de Hamburger et Hamilton étape (HH) 22) est décrite. Cette méthode permet de surmonter les inconvénients de<em&gt; In ovo</emÉlectroporation&gt; appliqué à des embryons de poulet âgés et est une technique utile pour étudier la fonction des gènes et de la réglementation à un âge stades de développement.

Transfert de gènes dans des embryons de poulet âgés par<em&gt; Ex ovo</em&gt; Électroporation

The chicken embryo provides an  excellent model system for studying gene function and regulation during  embryonic development. In ovo electroporation is ...

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