Name: gene transfer into older chicken embryos by ex ovo electroporation
Uploaded: 2012-07-27T12:00:00
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Diese Arbeit wurde durch ein Stipendium der Deutschen Forschungsgemeinschaft (; LU1455/1-1 DFG) gefördert.

1. Ex ovo Kultur <ol><li> Frische befruchtete Eier werden auf ihrer langen Seite in einem Zwangs-Entwurf Inkubator (BSS160, Ehret, Deutschland) bei 37,5 ° C mit 60% Luftfeuchtigkeit für die Inkubation gelegt. Eier bei 12 ° C für länger als eine Woche gelagert sollten nicht verwendet werden. </li><li> Nach einer Inkubationszeit von 2,5 Tage (ca. Stadium HH17), nehmen Sie die Eier und beschriften Sie die oben mit einem Bleistift die Richtung für das Knacken geben. </li><li> Vor dem Brechen, gießen Sie et...

<ol>
	<li>Momose, T., Tonegawa, A., Takeuchi, J., Ogawa, H., Umesono, K., Yasuda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+targeting+of+gene+expression+in+chick+embryos+by+microelectroporation.">Efficient targeting of gene expression in chick embryos by microelectroporation.</a> Dev. Growth Differ. 41, 335-344 (1999).</li><li>Luo, J., Ju, M. J., Lin, J., Yan, X., Markus, A., Mix, E., Rolfs, A., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadherin-20+expression+by+motor+neurons+is+regulated+by+Sonic+hedgehog+during+spinal+cord+development.">Cadherin-20 expression by motor neurons is regulated by Sonic hedgehog during spinal cord development.</a> NeuroReport. 20, 365-370 (2009).</li><li>Luo, J., Ju, M. J., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regionalized+cadherin-7+expression+by+radial+glia+is+regulated+by+Shh+and+Pax7+during+chicken+spinal+cord+development.">Regionalized cadherin-7 expression by radial glia is regulated by Shh and Pax7 during chicken spinal cord development.</a> Neuroscience. 142, 1133-1143 (2006).</li><li>Nakamura, H., Katahira, T., Sato, T., Watanabe, Y., Funahashi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gain-+and+loss-of-function+in+chick+embryos+by+electroporation.">Gain- and loss-of-function in chick embryos by electroporation.</a> Mech. Dev. 121, 1137-1143 (2004).</li><li>Dai, F., Yusuf, F., Farjah, G. H., Brand-Saberi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAi-induced+targeted+silencing+of+developmental+control+genes+during+chicken+embryogenesis.">RNAi-induced targeted silencing of developmental control genes during chicken embryogenesis.</a> Dev. Biol. 258, 80-90 (2005).</li><li>Rao, M., Baraban, J. H., Rajaii, F., Sockanathan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+comparative+study+of+RNAi+methodologies+by+in+ovo+electroporation+in+the+chick+embryo.">In vivo comparative study of RNAi methodologies by in ovo electroporation in the chick embryo.</a> Dev. Dyn. 231, 592-600 (2004).</li><li>Kos, R., Tucker, R. P., Hall, R., Duong, T. D., Erickson, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+introducing+morpholinos+into+the+chicken+embryo.">Methods for introducing morpholinos into the chicken embryo.</a> Dev. Dyn. 226, 470-477 (2003).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> J. Morphol. 88, 49-92 (1951).</li><li>Auerbach, R., Kubai, L., Knighton, D., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+procedure+for+the+long-term+cultivation+of+chicken+embryos.">A simple procedure for the long-term cultivation of chicken embryos.</a> Dev. Biol. 10, 391-394 (1974).</li><li>Luo, J., Treubert-Zimmermann, U., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadherins+guide+migrating+Purkinje+cells+to+specific+parasagittal+domains+during+cerebellar+development.">Cadherins guide migrating Purkinje cells to specific parasagittal domains during cerebellar development.</a> Mol. Cell. Neurosci. 25, 138-152 (2004).</li><li>Luo, J., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+ovo+electroporation+for+gene+transfer+into+older+chicken+embryos.">Ex ovo electroporation for gene transfer into older chicken embryos.</a> Dev. Dyn. 233, 1470-1477 (2005).</li><li>Treubert-Zimmermann, U., Heyers, D., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+axons+to+specific+fiber+tracts+in+vivo+by+altering+cadherin+expression.">Targeting axons to specific fiber tracts in vivo by altering cadherin expression.</a> J. Neurosci. 22, 7617-7626 (2002).</li></ol>

Dieses Protokoll stellt einen Leitfaden für den Gentransfer in älteren Hühnerembryonen (z. B. in das Tectum opticum bei E6) von ex ovo Elektroporation. Diese Methode erweitert die Verwendung von Elektroporation, um älteren Hühnerembryonen und kann leicht an vielen Labors zur Untersuchung von Genfunktionen in vivo in späteren Stadien angewendet. Embryonen aus der E4 bis E7 zumindest kann erfolgreich mit dieser Methode elektroporiert werden, und die Embryonen können elektroporierte Überleben sein...

<table border="1"><tbody><tr><td> Name </td><td> Firma </td><td> Katalog-Zahl </td></tr><tr><td> Electroporator </td><td> Nepa Gene, Japan </td><td> CUY21-Edit </td></tr><tr><td> Elektroden </td><td> Nepa Gene, Japan </td><td> CUY661-3x7 </td></tr><tr><td> Egg Brutkasten </td><td> Ehret, Deutschland </td><td> BSS160 </td></tr><tr><td> Embryo Inkubator </td><td> BINDER GmbH, Deutschland </td><td></td></tr><tr><td> Fluoreszenzmikroskop </td><td> Keyence, Deutschland GmbH </td><td> BZ-8000 </td></tr><tr><td> Petrischale </td><td> Greiner Bio-One GmbH, Deutschland </td><td></td></tr><tr><td> Mikroelektroden-Abzieher </td><td> World Precision Instruments, Deutschland </td><td> PUL-100 </td></tr></tbody></table>

gene transfer into older chicken embryos by ex ovo electroporation

Der Hühnerembryo bietet ein exzellentes Modellsystem zur Untersuchung von Gen-Funktion und Regulation während der embryonalen Entwicklung. In ovo Elektroporation ist eine leistungsfähige Methode, um Over-Express exogenen Genen oder unten zu regulieren endogene Gene in vivo in Hühnerembryonen 1. Unterschiedliche Strukturen wie DNA-Plasmide kodierenden Gene 2-4, small interfering RNA (siRNA) Plasmide 5, kleine synthetische RNA Oligos 6 und 7 Morpholino Antisense-Oligonukleotide können problemlos in Hühnerembryonen werden durch Elektroporation transfiziert. Allerdings ist die Anwendung der in-ovo-Elektroporation von Embryonen in frühen Stadien Inkubation (jünger als Bühne HH20 - nach Hamburg und Hamilton) beschränkt 8 und gibt es einige Nachteile für die Anwendung in Embryonen in späteren Stadien (älter als Stadium HH22 - rund 3,5 Tag der Entwicklung). Zum Beispiel ist die Vitellin-Membran in einem späteren Stadium USUVerbündete hielt sich an die Membran shall und Öffnen eines Fensters in der Schale verursacht Bruch der Gefäße, was zu dem Tod der Embryonen; älteren Embryonen werden durch Dottergang und Allantois-Gefäße, in denen es schwierig ist, zugreifen und sie manipulieren die Embryonen fallen; älteren Embryonen bewegen kräftig und es ist schwierig, die Orientierung durch eine relativ kleine Fenster in der Schale zu kontrollieren. In diesem Protokoll zeigen wir eine ex ovo Elektroporation Methode für den Gentransfer in Hühnerembryonen in späten Stadien (älter als Stadium HH22). Für ex ovo Elektroporation werden Embryonen in Petrischalen kultiviert und 9 die Vitellin und Allantois-Gefässe sind weit verbreitet. Unter diesen Bedingungen werden die älteren Hühnerembryonen leicht zugänglich und manipulierbar. Daher überwindet dieses Verfahren die Nachteile der in-ovo-Elektroporation, die auf die älteren Hühnerembryonen. Mit dieser Methode können Plasmide leicht in verschiedenen Teilen transfiziert werdender älteren Hühnerembryonen 12.10.

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Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation

Verfahren zum Gentransfer in Hühnerembryos in späteren Stufen der Inkubation (älter als Hamburger und Hamilton Stufe (HH) 22) beschrieben. Dieses Verfahren überwindet die Nachteile der<em&gt; In-ovo-</em&gt; Elektroporation angewendet, um älteren Hühnerembryonen und ist eine nützliche Technik, um Gen-Funktion und Regulation bei älteren Entwicklungsstadien zu studieren.

Gentransfer in Hühnerembryonen durch Ältere<em&gt; Ex ovo</em&gt; Die Elektroporation

The chicken embryo provides an  excellent model system for studying gene function and regulation during  embryonic development. In ovo electroporation is ...

Research

JoVE Journal

Biology

Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation

Nuclear Transfer into Mouse Oocytes

Nuclear Transfer in Maus-Oozyten

Nuclear transfer into an unfertilized oocyte can restore developmental potential to a differentiated cell. This demonstrates that the processes underlying ...

Forschung

Biologie

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E15 Mouse Embryos

In Utero intraventrikuläre Injektion und Elektroporation von E15 muriner Embryonen

In-utero in-vivo injection and electroporation of the embryonic mouse neocortex provides a powerful tool for the manipulation of individual progenitors ...

Placing Growth Factor-Coated Beads on Early Stage Chicken Embryos

Platzieren Growth Factor-Coated Perlen auf Early Stage Hühnerembryonen

The neural tube expresses many proteins in specific spatiotemporal patterns during development.   These proteins have been shown to be critical for cell ...

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

In Ovo Electroporations von HH Stage 10 Hühnerembryonen

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

Die Herstellung von primären hämatopoetischen Zellkulturen aus Knochenmark der Maus für die Elektroporation

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

In utero und ex vivo Elektroporation für die Genexpression in Maus retinalen Ganglienzellen

The retina and its sole output neuron, the retinal ganglion cell (RGC), comprise an excellent model in which to examine biological questions such as cell ...

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Küken Ex ovo Kultur und Ex ovo CAM-Assay: Wie es wirklich funktioniert

Chicken eggs in the early phase of breeding are between in vitro and in vivo systems and provide a vascular test environment not only to study ...

Using the Gene Pulser MXcell Electroporation System to Transfect Primary Cells with High Efficiency

Mit dem Gene Pulser MXcell Elektroporation System zur Primary Cells mit hohem Wirkungsgrad zu transfizieren

Xenotransplantation of Human Stem Cells into the Chicken Embryo

Xenotransplantation von menschlichen Stammzellen in die Hühnerembryo

The chicken embryo is a classical animal model for studying normal embryonic and fetal development and for xenotransplantation experiments to study the ...

An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

Ein Ex-ovo Chicken Embryo Culture-System Geeignet für Imaging und Mikrochirurgie Anwendungen

Understanding the relationships between genetic and microenvironmental factors that drive normal and malformed embryonic development is fundamental for ...