Name: gene transfer into older chicken embryos by ex ovo electroporation
Uploaded: 2012-07-27T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי מענק מטעם קרן המחקר הגרמנית (DFG, LU1455/1-1).

1. אקס לג&#39;ימי תרבות <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביציות מופרות טריות מוטלות על הצד הארוך שלהם כפייה טיוטת חממה (BSS160, Ehret, גרמניה) ב 37.5 מעלות צלזיוס עם לחות 60% עבור הדגירה. ביצים המאוחסנים על 12 מעלות צלזיוס במשך שבוע יותר מ 1 אין להשתמש. </li><li style=";...

<ol>
	<li>Momose, T., Tonegawa, A., Takeuchi, J., Ogawa, H., Umesono, K., Yasuda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+targeting+of+gene+expression+in+chick+embryos+by+microelectroporation.">Efficient targeting of gene expression in chick embryos by microelectroporation.</a> Dev. Growth Differ. 41, 335-344 (1999).</li><li>Luo, J., Ju, M. J., Lin, J., Yan, X., Markus, A., Mix, E., Rolfs, A., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadherin-20+expression+by+motor+neurons+is+regulated+by+Sonic+hedgehog+during+spinal+cord+development.">Cadherin-20 expression by motor neurons is regulated by Sonic hedgehog during spinal cord development.</a> NeuroReport. 20, 365-370 (2009).</li><li>Luo, J., Ju, M. J., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regionalized+cadherin-7+expression+by+radial+glia+is+regulated+by+Shh+and+Pax7+during+chicken+spinal+cord+development.">Regionalized cadherin-7 expression by radial glia is regulated by Shh and Pax7 during chicken spinal cord development.</a> Neuroscience. 142, 1133-1143 (2006).</li><li>Nakamura, H., Katahira, T., Sato, T., Watanabe, Y., Funahashi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gain-+and+loss-of-function+in+chick+embryos+by+electroporation.">Gain- and loss-of-function in chick embryos by electroporation.</a> Mech. Dev. 121, 1137-1143 (2004).</li><li>Dai, F., Yusuf, F., Farjah, G. H., Brand-Saberi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAi-induced+targeted+silencing+of+developmental+control+genes+during+chicken+embryogenesis.">RNAi-induced targeted silencing of developmental control genes during chicken embryogenesis.</a> Dev. Biol. 258, 80-90 (2005).</li><li>Rao, M., Baraban, J. H., Rajaii, F., Sockanathan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+comparative+study+of+RNAi+methodologies+by+in+ovo+electroporation+in+the+chick+embryo.">In vivo comparative study of RNAi methodologies by in ovo electroporation in the chick embryo.</a> Dev. Dyn. 231, 592-600 (2004).</li><li>Kos, R., Tucker, R. P., Hall, R., Duong, T. D., Erickson, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+introducing+morpholinos+into+the+chicken+embryo.">Methods for introducing morpholinos into the chicken embryo.</a> Dev. Dyn. 226, 470-477 (2003).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> J. Morphol. 88, 49-92 (1951).</li><li>Auerbach, R., Kubai, L., Knighton, D., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+procedure+for+the+long-term+cultivation+of+chicken+embryos.">A simple procedure for the long-term cultivation of chicken embryos.</a> Dev. Biol. 10, 391-394 (1974).</li><li>Luo, J., Treubert-Zimmermann, U., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadherins+guide+migrating+Purkinje+cells+to+specific+parasagittal+domains+during+cerebellar+development.">Cadherins guide migrating Purkinje cells to specific parasagittal domains during cerebellar development.</a> Mol. Cell. Neurosci. 25, 138-152 (2004).</li><li>Luo, J., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+ovo+electroporation+for+gene+transfer+into+older+chicken+embryos.">Ex ovo electroporation for gene transfer into older chicken embryos.</a> Dev. Dyn. 233, 1470-1477 (2005).</li><li>Treubert-Zimmermann, U., Heyers, D., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+axons+to+specific+fiber+tracts+in+vivo+by+altering+cadherin+expression.">Targeting axons to specific fiber tracts in vivo by altering cadherin expression.</a> J. Neurosci. 22, 7617-7626 (2002).</li></ol>

פרוטוקול זה מספק הוראות להעברת גנים לעוברי עוף מבוגרים (למשל, אל tectum אופטיים ב E6) על ידי electroporation לג&#39;ימי לשעבר. שיטה זו מרחיבה את השימוש electroporation כדי עוברי עוף מבוגרים ניתן ליישם בקלות במעבדות רבות לחקר תפקוד הגן in vivo בשלבים מאוחרים יותר. עוברים מתוך E4 לפחות ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td></tr><tr><td> Electroporator </td><td> Nepa ג&#39;ין, יפן </td><td> CUY21-Edit </td></tr><tr><td> אלקטרודות </td><td> Nepa ג&#39;ין, יפן </td><td> CUY661-3x7 </td></tr><tr><td> ביצה חממה </td><td> Ehret, גרמניה </td><td> BSS160 </td></tr><tr><td> העובר חממה </td><td> בינדר GmbH, גרמניה </td><td></td></tr><tr><td> מיקרוסקופ פלואורסצנטי </td><td> Keyence, Deutschland GmbH </td><td> BZ-8000 </td></tr><tr><td> צלחת פטרי </td><td> גריינר Bio-One GmbH, גרמניה </td><td></td></tr><tr><td> Microelectrode חולץ </td><td> העולם Precision מכשירים, גרמניה </td><td> PUL-100 </td></tr></tbody></table>

gene transfer into older chicken embryos by ex ovo electroporation

העובר עוף מספקת המערכת מודל מצוין לחקר תפקוד גנים ורגולציה במהלך ההתפתחות העוברית. ב electroporation לג&#39;ימי היא שיטה רבת עוצמה יתר מבטאים גנים חיצוניים או למטה, להסדיר גנים אנדוגניים in vivo עוברי עוף 1. מבנים שונים כגון פלסמידים דנ&quot;א גנים קידוד 2-4, קטן מפריע RNA (siRNA) פלסמידים 5, קטן סינתטי RNA oligos 6, morpholino אנטיסנס 7 ניתן transfected בקלות על ידי electroporation לעוברי עוף. עם זאת, היישום של ב electroporation לג&#39;ימי מוגבל עוברים בשלבים מוקדמים דגירה (צעירים יותר בשלב HH20 - פי המבורג המילטון) 8 ויש כמה חסרונות עבור היישום שלה עוברים בשלבים מאוחרים יותר (מעל גיל הבמה HH22 - כ 3.5 ימים של פיתוח). לדוגמה, קרום vitelline בשלבים מאוחרים יותר הוא usuברית דבק הממברנה יקבע ו פתיחת חלון במעטפת גורמת לקרע של כלי הדם, והתוצאה היא מוות של העוברים, עוברים הבוגרים מכוסים על ידי כלי vitelline ו allantoic, שם קשה לגשת ולטפל בעוברים, עוברים הבוגרים לעבור במרץ קשה לשלוט בכיוון דרך חלון קטן יחסית הקליפה. בפרוטוקול זה אנחנו מדגימים את השיטה לשעבר electroporation לג&#39;ימי להעברת גנים לעוברי עוף בשלבים המאוחרים (מבוגר בשלב HH22). עבור electroporation לג&#39;ימי לשעבר, עוברים מתורבתים בצלחות פטרי 9 ו vitelline וכלי allantoic מופצים באופן נרחב. בתנאים אלה, העוברים את העוף מבוגרים ניתן לגשת בקלות מניפולציה. לכן, שיטה זו מתגברת על החסרונות של ב electroporation לג&#39;ימי להחיל את עוברי עופות גדולים יותר. באמצעות שיטה זו, פלסמידים ניתן transfected בקלות לחלקים שוניםשל עוברי תרנגולת מבוגרים 10-12.

Watch this Scientific Journal Video about Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation at JoVE.com

Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation

השיטה של ​​העברת גנים לעוברי עוף בשלבי דגירה מאוחר יותר (מעל גיל המבורגר המילטון הבמה (ה&quot;ה) 22) מתואר. שיטה זו מתגברת על החסרונות של<em&gt; ב לג&#39;ימי</emElectroporation&gt; להחיל על עוברי תרנגולת מבוגרים היא טכניקה יעילה כדי ללמוד לתפקד גנים ורגולציה בשלבים התפתחותיים מבוגרים.

ין העברת לעוברי עוף מבוגרים יותר על ידי<em&gt; לג&#39;ימי לשעבר</em&gt; Electroporation

The chicken embryo provides an  excellent model system for studying gene function and regulation during  embryonic development. In ovo electroporation is ...

Research

JoVE Journal

Biology

Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation

Nuclear Transfer into Mouse Oocytes

העברת גרעין לתוך ביציות עכבר

Nuclear transfer into an unfertilized oocyte can restore developmental potential to a differentiated cell. This demonstrates that the processes underlying ...

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E15 Mouse Embryos

בשנת הזרקה תוך חדרי ברחם ו electroporation E15 של עוברי עכברים

In-utero in-vivo injection and electroporation of the embryonic mouse neocortex provides a powerful tool for the manipulation of individual progenitors ...

Placing Growth Factor-Coated Beads on Early Stage Chicken Embryos

הצבת פקטור מצופה חרוזים צמיחה על עוברי תרנגולת בשלב מוקדם

The neural tube expresses many proteins in specific spatiotemporal patterns during development.   These proteins have been shown to be critical for cell ...

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

ב Electroporations אובו של HH 10 עוברים שלב עוף

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

הכנת ראשי בתרביות תאים hematopoietic ממח העצם Murine עבור electroporation

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

ב electroporation ברחם לשעבר vivo על ביטוי גנים בתאים עכבר גנגליון רשתית

The retina and its sole output neuron, the retinal ganglion cell (RGC), comprise an excellent model in which to examine biological questions such as cell ...

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

אפרוח אובו לשעבר תרבות אובו לשעבר CAM Assay: איך זה באמת עובד

Chicken eggs in the early phase of breeding are between in vitro and in vivo systems and provide a vascular test environment not only to study ...

Using the Gene Pulser MXcell Electroporation System to Transfect Primary Cells with High Efficiency

שימוש ג&#39;ין Pulser מערכת MXcell electroporation כדי Transfect תאים ראשוניים עם יעילות גבוהה

Xenotransplantation of Human Stem Cells into the Chicken Embryo

Xenotransplantation בתאי גזע אנושיים לתוך העובר עוף

The chicken embryo is a classical animal model for studying normal embryonic and fetal development and for xenotransplantation experiments to study the ...

An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

לשעבר אובו העובר עוף התרבות מתאים ליישומים הדמיה microsurgery מערכת

Understanding the relationships between genetic and microenvironmental factors that drive normal and malformed embryonic development is fundamental for ...