Name: gene transfer into older chicken embryos by ex ovo electroporation
Uploaded: 2012-07-27T12:00:00
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이 작품은 독일 학술 진흥 재단 (; LU1455/1-1 DFG)에서 교부금에 의해 지원되었다.

1. 예 비켜 문화 <ol><li> 신선한 수정된 달걀이 부화 60 %의 습도와 37.5에서 강제 통풍 인큐베이터 (BSS160, Ehret, 독일) ° C에서 그들의 긴 측면에 놓여있다. 이상 1 주일 동안 12 ° C에서 저장된 계란을 사용하지 않아야합니다. </li><li> 2.5 일 (무대 HH17에 대한)에 대한 인큐베이션 후, 계란을 제거하고 해독을위한 방향을 나타내는 연필로 상단에 라벨을 달고. </li><li> 크래킹하기 전에 깨끗한 대형 ?...

<ol>
	<li>Momose, T., Tonegawa, A., Takeuchi, J., Ogawa, H., Umesono, K., Yasuda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+targeting+of+gene+expression+in+chick+embryos+by+microelectroporation.">Efficient targeting of gene expression in chick embryos by microelectroporation.</a> Dev. Growth Differ. 41, 335-344 (1999).</li><li>Luo, J., Ju, M. J., Lin, J., Yan, X., Markus, A., Mix, E., Rolfs, A., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadherin-20+expression+by+motor+neurons+is+regulated+by+Sonic+hedgehog+during+spinal+cord+development.">Cadherin-20 expression by motor neurons is regulated by Sonic hedgehog during spinal cord development.</a> NeuroReport. 20, 365-370 (2009).</li><li>Luo, J., Ju, M. J., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regionalized+cadherin-7+expression+by+radial+glia+is+regulated+by+Shh+and+Pax7+during+chicken+spinal+cord+development.">Regionalized cadherin-7 expression by radial glia is regulated by Shh and Pax7 during chicken spinal cord development.</a> Neuroscience. 142, 1133-1143 (2006).</li><li>Nakamura, H., Katahira, T., Sato, T., Watanabe, Y., Funahashi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gain-+and+loss-of-function+in+chick+embryos+by+electroporation.">Gain- and loss-of-function in chick embryos by electroporation.</a> Mech. Dev. 121, 1137-1143 (2004).</li><li>Dai, F., Yusuf, F., Farjah, G. H., Brand-Saberi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAi-induced+targeted+silencing+of+developmental+control+genes+during+chicken+embryogenesis.">RNAi-induced targeted silencing of developmental control genes during chicken embryogenesis.</a> Dev. Biol. 258, 80-90 (2005).</li><li>Rao, M., Baraban, J. H., Rajaii, F., Sockanathan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+comparative+study+of+RNAi+methodologies+by+in+ovo+electroporation+in+the+chick+embryo.">In vivo comparative study of RNAi methodologies by in ovo electroporation in the chick embryo.</a> Dev. Dyn. 231, 592-600 (2004).</li><li>Kos, R., Tucker, R. P., Hall, R., Duong, T. D., Erickson, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+introducing+morpholinos+into+the+chicken+embryo.">Methods for introducing morpholinos into the chicken embryo.</a> Dev. Dyn. 226, 470-477 (2003).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> J. Morphol. 88, 49-92 (1951).</li><li>Auerbach, R., Kubai, L., Knighton, D., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+procedure+for+the+long-term+cultivation+of+chicken+embryos.">A simple procedure for the long-term cultivation of chicken embryos.</a> Dev. Biol. 10, 391-394 (1974).</li><li>Luo, J., Treubert-Zimmermann, U., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadherins+guide+migrating+Purkinje+cells+to+specific+parasagittal+domains+during+cerebellar+development.">Cadherins guide migrating Purkinje cells to specific parasagittal domains during cerebellar development.</a> Mol. Cell. Neurosci. 25, 138-152 (2004).</li><li>Luo, J., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+ovo+electroporation+for+gene+transfer+into+older+chicken+embryos.">Ex ovo electroporation for gene transfer into older chicken embryos.</a> Dev. Dyn. 233, 1470-1477 (2005).</li><li>Treubert-Zimmermann, U., Heyers, D., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+axons+to+specific+fiber+tracts+in+vivo+by+altering+cadherin+expression.">Targeting axons to specific fiber tracts in vivo by altering cadherin expression.</a> J. Neurosci. 22, 7617-7626 (2002).</li></ol>

이 프로토콜은 전 비켜 electroporation에 의해 기존의 닭 배아 (예 : E6의 광학 tectum로)로 유전자 전달을위한 가이드를 제공합니다. 이 방법은 기존의 닭 배아에 electroporation의 사용을 확장하고 쉽게 나중 단계에서 생체내의 유전자 기능을 연구를 위해 많은 실험실에 적용할 수 있습니다. E4에서 최소한 E7에 태아도 성공적으로이 방법에 의해 electroporated 수 있으며 electroporated 배아는 E15 ...

<table border="1"><tbody><tr><td> 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td></tr><tr><td> Electroporator </td><td> Nepa 진, 일본 </td><td> CUY21 - 편집 </td></tr><tr><td> 전극 </td><td> Nepa 진, 일본 </td><td> CUY661-3X7 </td></tr><tr><td> 계란 인큐베이터 </td><td> Ehret, 독일 </td><td> BSS160 </td></tr><tr><td> 배아 인큐베이터 </td><td> 바인더 게엠베하, 독일 </td><td></td></tr><tr><td> 형광 현미경 </td><td> Keyence, 독일 게엠베하 </td><td> BZ-8000 </td></tr><tr><td> 페트리 접시 </td><td> Greiner 바이오 하나 게엠베하, 독일 </td><td></td></tr><tr><td> Microelectrode의 풀러 </td><td> 세계 정밀 계측기, 독일 </td><td> PUL-100 </td></tr></tbody></table>

gene transfer into older chicken embryos by ex ovo electroporation

닭 배아가 배아 발달 동안 유전자 기능과 규제를 공부를위한 훌륭한 모델 시스템을 제공합니다. 비켜 electroporation에는 강력한 오버 특급 외인성 유전자에 대한 방법이나 닭 배아 1 생체내의 내생 유전자를 다운 조절입니다. 이러한 유전자 plasmids 인코딩 유전자 2-4, 작은 간섭 RNA (siRNA) plasmids 5, 작은 합성 RNA oligos 6 및 morpholino 안티 센스 oligonucleotides 7 등 다양한 건축물에 쉽게 electroporation에 의해 닭 배아로 transfected 수 있습니다. 그러나 비켜 electroporation에의 응용은 초기 배양 단계 (단계 HH20 미만 - 함부르크와 해밀턴에 따라)에 배아로 제한됩니다 8, 나중 단계에서 배아에서의 응용을위한 몇 가지 단점은 (무대 HH22보다 오래된 없습니다 - 약 3.5 개발 일). 예를 들어, 나중 단계에 vitelline 막이 우스입니다조 막에 붙어 있으며 껍질에 창을 열지 앨리 배아의 죽음에 그 결과 혈관의 파열을 초래, 이전 배아는 그것이 배아를 액세스하고 조작하기가 어렵습니다 vitelline 및 allantoic 혈관에 의해 적용되며, 이전 배아 움직이지 셸의 상대적으로 작은 창을 통해 방향을 제어하기 어려운 강력하고 있습니다. 이 프로토콜에서는 늦은 단계 (단계 HH22보다 오래된)에서 닭 배아에 유전자 전달을위한 전직 비켜 electroporation 방법을 보여줍니다. 전 비켜 electroporation의 경우 배아가 페트리 접시 9 배양해하고 vitelline 및 allantoic 혈관이 널리 퍼져있다. 이러한 조건에서 기존의 닭 배아 쉽게 액세스하고 조작합니다. 따라서이 방법은 기존의 닭 배아에 적용 비켜 electroporation에의 단점을 극복. 이 방법을 사용 plasmids 쉽게 여러 부분으로 transfected 수오래된 닭 배아 10-12니다.

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Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation

나중에 인큐베이션 단계 (햄버거와 해밀턴 무대 (HH) 22 세 이상)에서 닭 배아에 유전자 전달의 방법을 설명합니다. 이 방법은 단점을 극복<em&gt; 비켜에서</em&gt; electroporation은 나이 닭 배아에 적용하여 유전자 기능과 기존의 개발 단계에서의 규제를 공부하는 유용한 기술입니다.

에 의한 이전 치킨 태아에 유전자 이체<em&gt; 전 비켜</em&gt; Electroporation

The chicken embryo provides an  excellent model system for studying gene function and regulation during  embryonic development. In ovo electroporation is ...

Research

JoVE Journal

Biology

Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation

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마우스 Oocytes에 핵 전송

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연구

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