Name: gene transfer into older chicken embryos by ex ovo electroporation
Uploaded: 2012-07-27T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation at JoVE.com

Detta arbete stöddes av ett bidrag från den tyska Research Foundation (DFG, LU1455/1-1).

1. Ex ovo kultur <ol><li> Färska befruktade ägg som på sin långsida i en forcerad utkast till inkubator (BSS160, Ehret, Tyskland) vid 37,5 ° C med 60% luftfuktighet för inkubation. Ägg som lagrats vid 12 ° C under längre tid än en vecka bör inte användas. </li><li> Efter inkubation under 2,5 dagar (ca steg HH17), ta ut äggen och märka toppen med en penna för att ange riktning för sprickbildning. </li><li> Innan sprickbildning, häll ca 20 ml sterilt destillerat vatten i en ren stor petriskål ...

<ol>
	<li>Momose, T., Tonegawa, A., Takeuchi, J., Ogawa, H., Umesono, K., Yasuda, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+targeting+of+gene+expression+in+chick+embryos+by+microelectroporation.">Efficient targeting of gene expression in chick embryos by microelectroporation.</a> Dev. Growth Differ. 41, 335-344 (1999).</li><li>Luo, J., Ju, M. J., Lin, J., Yan, X., Markus, A., Mix, E., Rolfs, A., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadherin-20+expression+by+motor+neurons+is+regulated+by+Sonic+hedgehog+during+spinal+cord+development.">Cadherin-20 expression by motor neurons is regulated by Sonic hedgehog during spinal cord development.</a> NeuroReport. 20, 365-370 (2009).</li><li>Luo, J., Ju, M. J., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regionalized+cadherin-7+expression+by+radial+glia+is+regulated+by+Shh+and+Pax7+during+chicken+spinal+cord+development.">Regionalized cadherin-7 expression by radial glia is regulated by Shh and Pax7 during chicken spinal cord development.</a> Neuroscience. 142, 1133-1143 (2006).</li><li>Nakamura, H., Katahira, T., Sato, T., Watanabe, Y., Funahashi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gain-+and+loss-of-function+in+chick+embryos+by+electroporation.">Gain- and loss-of-function in chick embryos by electroporation.</a> Mech. Dev. 121, 1137-1143 (2004).</li><li>Dai, F., Yusuf, F., Farjah, G. H., Brand-Saberi, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNAi-induced+targeted+silencing+of+developmental+control+genes+during+chicken+embryogenesis.">RNAi-induced targeted silencing of developmental control genes during chicken embryogenesis.</a> Dev. Biol. 258, 80-90 (2005).</li><li>Rao, M., Baraban, J. H., Rajaii, F., Sockanathan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+comparative+study+of+RNAi+methodologies+by+in+ovo+electroporation+in+the+chick+embryo.">In vivo comparative study of RNAi methodologies by in ovo electroporation in the chick embryo.</a> Dev. Dyn. 231, 592-600 (2004).</li><li>Kos, R., Tucker, R. P., Hall, R., Duong, T. D., Erickson, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+introducing+morpholinos+into+the+chicken+embryo.">Methods for introducing morpholinos into the chicken embryo.</a> Dev. Dyn. 226, 470-477 (2003).</li><li>Hamburger, V., Hamilton, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+series+of+normal+stages+in+the+development+of+the+chick+embryo.">A series of normal stages in the development of the chick embryo.</a> J. Morphol. 88, 49-92 (1951).</li><li>Auerbach, R., Kubai, L., Knighton, D., Folkman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+procedure+for+the+long-term+cultivation+of+chicken+embryos.">A simple procedure for the long-term cultivation of chicken embryos.</a> Dev. Biol. 10, 391-394 (1974).</li><li>Luo, J., Treubert-Zimmermann, U., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cadherins+guide+migrating+Purkinje+cells+to+specific+parasagittal+domains+during+cerebellar+development.">Cadherins guide migrating Purkinje cells to specific parasagittal domains during cerebellar development.</a> Mol. Cell. Neurosci. 25, 138-152 (2004).</li><li>Luo, J., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+ovo+electroporation+for+gene+transfer+into+older+chicken+embryos.">Ex ovo electroporation for gene transfer into older chicken embryos.</a> Dev. Dyn. 233, 1470-1477 (2005).</li><li>Treubert-Zimmermann, U., Heyers, D., Redies, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+axons+to+specific+fiber+tracts+in+vivo+by+altering+cadherin+expression.">Targeting axons to specific fiber tracts in vivo by altering cadherin expression.</a> J. Neurosci. 22, 7617-7626 (2002).</li></ol>

Detta protokoll ger en vägledning för genöverföring till äldre kycklingembryon (t.ex. i optiska tektum vid E6) med ex ovo elektroporation. Denna metod sträcker sig användning av elektroporering för att äldre kycklingembryon och kan lätt tillämpas på många laboratorier för att studera genfunktion in vivo i senare skeden. Embryon från E4 till minst E7 kan framgångsrikt elektroporeras med denna metod och de elektroporerade embryona kan överleva fram till E15 11. Förutom hjärn...

<table border="1"><tbody><tr><td> Namn </td><td> Företaget </td><td> Katalognummer </td></tr><tr><td> Elektroporator </td><td> Nepa Gene, Japan </td><td> CUY21-Redigera </td></tr><tr><td> Elektroderna </td><td> Nepa Gene, Japan </td><td> CUY661-3x7 </td></tr><tr><td> Ägg-inkubator </td><td> Ehret, Tyskland </td><td> BSS160 </td></tr><tr><td> Embryo inkubator </td><td> PÄRM GmbH, Tyskland </td><td></td></tr><tr><td> Fluorescensmikroskop </td><td> KEYENCE, Deutschland GmbH </td><td> BZ-8000 </td></tr><tr><td> Petriskål </td><td> Greiner Bio-One GmbH, Tyskland </td><td></td></tr><tr><td> Mikroelektrod avdragare </td><td> World Precision Instruments, Tyskland </td><td> PUL-100 </td></tr></tbody></table>

gene transfer into older chicken embryos by ex ovo electroporation

Den kycklingembryo tillhandahåller en utmärkt modellsystem för att studera genfunktion och reglering under embryonal utveckling. In ovo elektroporering är en kraftfull metod för att över-uttrycka exogena gener eller nedreglera endogena gener in vivo i kycklingembryon 1. Olika strukturer, såsom DNA-plasmider gener som kodar 2-4, små störande RNA (siRNA) plasmider 5, liten syntetiskt RNA oligos 6 och morfolino antisensoligonukleotider 7 kan enkelt transfekteras in kycklingembryon genom elektroporation. Dock tillämpningen av i ovo elektroporering begränsas till embryon i tidiga inkubationsbetingelser stadier (yngre än skede HH20 - enligt Hamburg och Hamilton) 8 och det finns vissa nackdelar för dess tillämpning i embryon i senare skeden (äldre än skede HH22 - cirka 3,5 dagar utveckling). Till exempel är vitellinmembranet vid senare stadier Usuallierad fastnat De skall membranet och öppna ett fönster i skalet gör bristning av fartyg, vilket resulterar i döden av embryon, äldre embryon omfattas av vitelline och allantois fartyg, där det är svårt att komma åt och manipulera embryon, äldre embryon gå kraftigt och är svår att reglera orienteringen genom en relativt liten fönster i höljet. I detta protokoll visar vi ett ex ovo elektroporering metod för genöverföring till kycklingembryon i sena stadier (äldre än steg HH22). För ex ovo elektroporering är embryon odlas i petriskålar 9 och vitelline och allantoiska fartyg spridda. Under dessa betingelser är de äldre kycklingembryon lättillgängliga och manipuleras. Därför övervinner denna metod nackdelarna med i ovo elektroporering tillämpas på de äldre kycklingembryon. Med användning av denna metod, kan plasmider lätt transfekteras in i olika delarav de äldre kycklingembryon 10-12.

Watch this Scientific Journal Video about Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation at JoVE.com

Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation

En metod för genöverföring in i kycklingembryon vid senare stadier inkubation (äldre än Hamburger och Hamilton steg (HH) 22) beskrivs. Denna metod övervinner nackdelarna hos<em&gt; I ovo</em&gt; Elektroporering tillämpas på äldre kycklingembryon och är en användbar teknik för att studera geners funktion och reglering på äldre utvecklingsstadier.

Genöverföring till äldre kycklingembryon med<em&gt; Ex ovo</em&gt; Elektroporering

The chicken embryo provides an  excellent model system for studying gene function and regulation during  embryonic development. In ovo electroporation is ...

Research

JoVE Journal

Biology

Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation

Nuclear Transfer into Mouse Oocytes

Kärnöverföring till Mouse oocyter

Nuclear transfer into an unfertilized oocyte can restore developmental potential to a differentiated cell. This demonstrates that the processes underlying ...

In Utero Intraventricular Injection and Electroporation of E15 Mouse Embryos

In utero Intraventrikulär direktinsprutning och elektroporation av E15 musembryon

In-utero in-vivo injection and electroporation of the embryonic mouse neocortex provides a powerful tool for the manipulation of individual progenitors ...

Placing Growth Factor-Coated Beads on Early Stage Chicken Embryos

Placering Growth Factor-Coated Pärlor på tidiga embryon Stage Kyckling

The neural tube expresses many proteins in specific spatiotemporal patterns during development.   These proteins have been shown to be critical for cell ...

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

I Ovo Electroporations av HH Stage 10 kycklingembryon

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

The Preparation of Primary Hematopoietic Cell Cultures From Murine Bone Marrow for Electroporation

Beredningen av primära hematopoietisk cell kulturer från Murine Bone Marrow för elektroporation

It is becoming increasingly apparent that electroporation is the most effective way to introduce plasmid DNA or siRNA into primary cells. The Gene Pulser ...

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

In utero and ex vivo Electroporation for Gene Expression in Mouse Retinal Ganglion Cells

In utero och ex vivo elektroporation för genuttryck i Mus Retinal ganglion celler

The retina and its sole output neuron, the retinal ganglion cell (RGC), comprise an excellent model in which to examine biological questions such as cell ...

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Chick Ex ovo Kultur och Ex ovo CAM analysen: hur det verkligen fungerar

Chicken eggs in the early phase of breeding are between in vitro and in vivo systems and provide a vascular test environment not only to study ...

Using the Gene Pulser MXcell Electroporation System to Transfect Primary Cells with High Efficiency

Använda Gene Pulser MXcell elektroporation System till transfektera primärceller med hög verkningsgrad

Xenotransplantation of Human Stem Cells into the Chicken Embryo

Xenotransplantation av mänskliga stamceller i Chicken Embryo

The chicken embryo is a classical animal model for studying normal embryonic and fetal development and for xenotransplantation experiments to study the ...

An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

En Ex-ovo Kyckling Embryo Culture lämpligt för bildbehandling och mikrokirurgi Applications

Understanding the relationships between genetic and microenvironmental factors that drive normal and malformed embryonic development is fundamental for ...