Name: in ovo electroporations of hh stage 10 chicken embryos
Uploaded: 2007-11-01T00:29:01
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos at JoVE.com

<p class="jove_step"> Egg hantering </p><ol><li> Ägg kan förvaras vid 13 ° C i upp till en vecka före inkubation utan betydande förlust av livskraft (en liten vinkyl är perfekt för detta ändamål). </li><li> Innan inkubation, låt ägg till rumstemperatur och placeras sedan i en fuktig kyckling inkubator inställd på 37,8 ° C (100 ° F). </li><li> Vi electroporate brukar embryon ungefär 48 timmar från starten av inkubationstiden, när embryot har nått Hamburger och Hamilton steg 10. </li><li> Tid för inkubationstiden kan variera b...

<ol>
	<li>Itasaki, N., Bel-Vialar, S., Krumlauf, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=&apos;Shocking&apos;+developments+in+chick+embryology:+electroporation+and+in+ovo+gene+expression.">&apos;Shocking&apos; developments in chick embryology: electroporation and in ovo gene expression.</a> <em style='font-style: italic'>Nat Cell Biol</em>. <b>1</b>, 203-207 (1999).</li></ol>

<p> Detta protokoll ger en steg för steg guide till neuralrörsdefekter elektroporering av HH10 kycklingembryon. Förutom att visa tekniken, är riktlinjer för lagring och hantering av äggen också. Denna teknik har ett brett spektrum av tillämpningar för genetisk analys och den lätthet och låg kostnad av experiment gör dem möjliga för många laboratorier. </p>

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Chicken egg incubator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>humidified, set to 37.80&deg;C (100F).  </td>
</tr>
<tr>
<td>Pulse generator </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Genetronics </td>
<td>BTX T820 </td>
<td>Square wave generator or comparable</td>
</tr>
<tr>
<td>Electrodes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>our electrodes were made from 0.25 mm diameter platinum wire and were 5 mm long and spaced 1 mm apart</td>
</tr>
<tr>
<td>Connecter cables</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micromanipulator</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dissecting scope </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>with large working distance</td>
</tr>
<tr>
<td>Glass capillaries </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>and capillary puller or commercial glass needles</td>
</tr>
<tr>
<td>Leibovitz&#x2019;s L-15 media</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>chicken eggs</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>fertilized</td>
</tr>
<tr>
<td>Curved scissors</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10 ml syringe</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Large bore needle </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>16-18G</td>
</tr>
<tr>
<td>Mouth pipette</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>India ink </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Insulin syringe/syringe </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plasmid DNA </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&#x2265; 1&#181;g/&#181;l in sterile TE or 1X PBS containing 0.05% Fast Green dye</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>
		

in ovo electroporations of hh stage 10 chicken embryos

<p class="jove_content">Stor storlek och extern utveckling av kyckling embryot har länge gjort det ett värdefullt verktyg för att studera utvecklingsbiologi. Med tillkomsten av molekylärbiologiska tekniker, har ungen blivit ett användbart system där för att studera genreglering och funktion. Genom electroporating DNA eller RNA konstruktioner i utvecklingsländerna kyckling embryot kan gener uttryckas eller slås ned för att analysera in vivo geners funktion. Likaså kan reporter konstruktioner användas för ödet kartläggning eller för att undersöka förmodade gen reglerande element. Jämfört med liknande experiment i mus, har chick elektroporation fördelarna med att vara snabbt, enkelt och billigt. Denna video visar först hur att göra ett fönster i äggskalet att manipulera embryot. Därefter är embryot visualiseras med en utspädd lösning av tusch injiceras under embryot. Ett glas nål och pipett används för att injicera DNA och Fast grönt färgämne i utvecklingsländerna neuralrörsdefekter, då platina elektroder placeras parallellt med embryot och korta elektriska pulser ges tillsammans med en pulsgenerator. Slutligen är ägget förseglade med tejp och läggs tillbaka i en inkubator för vidare utveckling. Dessutom visar videon korrekt ägget lagring och hantering och diskuterar möjliga orsaker till embryoförlust efter elektroporation.</p>

Watch this Scientific Journal Video about In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos at JoVE.com

In Ovo Electroporations of HH Stage 10 Chicken Embryos

<p class="jove_content">Chick i ovo elektroporering är en teknik som möjliggör genetisk manipulation av aviär embryot. Vanliga tillämpningar av denna teknik med funktionell analys av gener och förmodade förstärkare element. Denna video visar neuralrörsdefekter elektroporation i HH 10 kycklingembryon. Injektionsteknik och korrekt ägg hantering diskuteras.</p>

I Ovo Electroporations av HH Stage 10 kycklingembryon

Large size and external development of the chicken embryo have long made it a valuable tool in the study of developmental biology.  With the advent of ...

Research

JoVE Journal

Biology

Preparation of Neuronal Cultures from Midgastrula Stage Drosophila Embryos

Beredning av Neuronal kulturer från Midgastrula Stage Drosophila embryon

This video illustrates the procedure for making primary neuronal cultures from midgastrula stage Drosophila embryos. The methods for collecting embryos ...

Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies

Windowing hönsägg för utvecklingsstudier

The study of development has been greatly aided by the use of the chick embryo as an experimental model.  The ease of accessibility of the embryo has ...

Placing Growth Factor-Coated Beads on Early Stage Chicken Embryos

Placering Growth Factor-Coated Pärlor på tidiga embryon Stage Kyckling

The neural tube expresses many proteins in specific spatiotemporal patterns during development.   These proteins have been shown to be critical for cell ...

Chick <em>ex ovo</em> Culture and <em>ex ovo</em> CAM Assay: How it Really Works

Chick ex ovo Culture and ex ovo CAM Assay: How it Really Works

Chick<em> Ex ovo</em> Kultur och<em> Ex ovo</em> CAM analysen: hur det verkligen fungerar

Chicken eggs in the early phase of breeding are between in vitro and in vivo systems and provide a vascular test environment not only to study ...

<em>In-vivo</em> Centrifugation of <em>Drosophila</em> Embryos

In-vivo Centrifugation of Drosophila Embryos

<em>In vivo</em> Centrifugering av <em>Drosophila</em> embryon

A major strategy for purifying and isolating different types of intracellular organelles is to separate them from each other based on differences in ...

An <em>ex-ovo</em> Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

An ex-ovo Chicken Embryo Culture System Suitable for Imaging and Microsurgery Applications

En<em> Ex-ovo</em> Kyckling Embryo Culture lämpligt för bildbehandling och mikrokirurgi Applications

Understanding the relationships between genetic and microenvironmental factors that drive normal and malformed embryonic development is fundamental for ...

Imaging Cell Shape Change in Living <em>Drosophila</em> Embryos

Imaging Cell Shape Change in Living Drosophila Embryos

Imaging Cell Shape Förändring Living<em> Drosophila</em> Embryon

The developing Drosophila melanogaster embryo undergoes a number of cell shape changes that are highly amenable to live confocal imaging.  Cell shape ...

Chromatin Immunoprecipitation Assay for Tissue-specific Genes using Early-stage Mouse Embryos

Kromatin Immunoprecipitation analys för Tissue-specifika gener med början av karriären musembryon

Chromatin immunoprecipitation (ChIP) is a powerful tool to identify protein:chromatin interactions that occur in the context of living cells 1-3. This ...

<em>In Ovo</em> Electroporation in Embryonic Chick Retina

In Ovo Electroporation in Embryonic Chick Retina

<em>I Ovo</em> Elektroporation i embryonal Chick Retina

Chicken embryonic retina is an excellent tool to study retinal development in higher vertebrates. Because of large size and external development, it is ...

Gene Transfer into Older Chicken Embryos by <em>ex ovo</em> Electroporation

Gene Transfer into Older Chicken Embryos by ex ovo Electroporation

Genöverföring till äldre kycklingembryon med<em&gt; Ex ovo</em&gt; Elektroporering

The chicken embryo provides an  excellent model system for studying gene function and regulation during  embryonic development. In ovo electroporation is ...