Name: creating defined gaseous environments to study the effects of hypoxia on c. elegans
Uploaded: 2012-07-20T13:00:00
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我々は議論や原稿の重要な読書のためにミラーラボのメンバーに感謝。この作品は、DLMとDLMの健康賞R00 AG030550の国立研究所に老化の基礎生物学の優秀なネイサンショックセンターからの新しい奨励賞によってサポートされていました。

1。環境チャンバーの建設<ol><li>プロジェクトのスコープのために必要な室の中で最小の合理的なボリュームを選択します。チャンバーは、ガス（O 2）不浸透性材料で作られている必要があります。パイレックスの結晶皿、Anaeropackボックス、または大規模なキャストアクリルボックス（Ellardインスツルメンテーション）は、使用することができます。我々は、9 50 mmプレートは100×50 K...

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	<li>Danovaro, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+first+metazoa+living+in+permanently+anoxic+conditions.">The first metazoa living in permanently anoxic conditions.</a> BMC Biology. 8, 30 (2010).</li><li>Birner, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+Hypoxia-inducible+Factor+1+alpha+Is+a+Marker+for+an+Unfavorable+Prognosis+in+Early-Stage+Invasive+Cervical+Cancer.">Overexpression of Hypoxia-inducible Factor 1 alpha Is a Marker for an Unfavorable Prognosis in Early-Stage Invasive Cervical Cancer.</a> Cancer Research. 60, 4693-4696 (2000).</li><li>Harris, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+-+a+key+regulatory+factor+in+tumour+growth.">Hypoxia - a key regulatory factor in tumour growth.</a> Nat. Rev. Cancer. 2, 38-47 (2002).</li><li>Ramirez-Bergeron, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypoxia+affects+mesoderm+and+enhances+hemangioblast+specification+during+early+development.">Hypoxia affects mesoderm and enhances hemangioblast specification during early development.</a> Development. 131, 4623-4634 (2004).</li><li>Staff, F. 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B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogen+sulfide+increases+thermotolerance+and+lifespan+in+Caenorhabditis+elegans.">Hydrogen sulfide increases thermotolerance and lifespan in Caenorhabditis elegans.</a> PNAS. 104, 20618-20622 (2007).</li><li>Stiernagle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+C.+elegans.">Maintenance of C. elegans.</a> WormBook. , 1-11 (2006).</li><li>Massie, M. R., Lapoczka, E. M., Boggs, K. D., Stine, K. E., White, G. 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C., White, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diffusion+of+Gases+in+Air+and+Its+Affect+on+Oxygen+Deficiency+Hazard+Abatement.">Diffusion of Gases in Air and Its Affect on Oxygen Deficiency Hazard Abatement.</a> AIP Conference Proceedings. 823, 305-312 (2006).</li><li>Chua, B., Kao, R. L., Rannels, D. E., Morgan, H. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+protein+degradation+by+anoxia+and+ischemia+in+perfused+rat+hearts.">Inhibition of protein degradation by anoxia and ischemia in perfused rat hearts.</a> Journal of Biological Chemistry. 254, 6617-6623 (1979).</li><li>Probst, G., Riedinger, H., Martin, P., Engelcke, M., Probst, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fast+Control+of+DNA+Replication+in+Response+to+Hypoxia+and+to+Inhibited+Protein+Synthesis+in+CCRF-CEM+and+HeLa+Cells.">Fast Control of DNA Replication in Response to Hypoxia and to Inhibited Protein Synthesis in CCRF-CEM and HeLa Cells.</a> Biological Chemistry. 380, 1371-1382 (1999).</li><li>Semenza, G. L., Sen, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Oxygen Sensing. 381, (2004).</li><li>Chan, K., Roth, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anoxia-Induced+Suspended+Animation+in+Budding+Yeast+as+an+Experimental+Paradigm+for+Studying+Oxygen-Regulated+Gene+Expression.">Anoxia-Induced Suspended Animation in Budding Yeast as an Experimental Paradigm for Studying Oxygen-Regulated Gene Expression.</a> Eukaryotic Cell. 7, 1795-1808 (2008).</li><li>Nystul, T. G., Roth, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbon+monoxide-induced+suspended+animation+protects+against+hypoxic+damage+in+Caenorhabditis+elegans.">Carbon monoxide-induced suspended animation protects against hypoxic damage in Caenorhabditis elegans.</a> PNAS. 101, 9133-9136 (2004).</li></ol>

このメソッドは、実験室で維持される酸素の正確な濃度の環境を可能にする低酸素環境を構築するための戦略を提示します。これらのチャンバは、O 2、特定の低濃度に生物を暴露し、分子および生理学の出力を監視するための簡単な方法を提供しています。説明した環境室は、ラボの代わりに市販品を購入することによって作成されたため、実験のニーズに合わせて変更することが?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td></tr><tr><td>チューブ（FEPとPTFE） </td><td>コー​​ルパーマー タイゴン</td><td> YO-95821から00（1/8 &quot;FEP） 06605から27（1/16×1/8 &quot;PTFE） &#39;R-3603 </td></tr><tr><td>コンプレッション·フィッティング</td><td>シアトル流体システム</td><td> 06363から58（Mカプラー1/16 &quot;） 06363から62（F.カプラ1/16 &quot;） 06363から60（Mカプラー1/8 &quot;） 06363から61（F.カプラ1/8 &quot;） </td></tr><tr><td>流管</td><td>オールボルグ</td><td> PMR3-010073（3出力） PMR1-013520（1出力） </td></tr><tr><td>マスフローコントローラ</td><td>シエラ·インスツルメンツ</td><td> 810S-L-DR-2-OV1-SK1-V1-S1（マスTrakの） C100L-DD-2-OV1-SV1-PV2-V1-SO-C10（スマートTrakの2） </td></tr><tr><td>圧縮ガスタンク</td><td> Airgasの</td><td>オーダーメイド&lt;/ TD&gt; </tr><tr><td>ホースバーブフィッティングにルアープラスチック男性</td><td>コー​​ルパーマー</td><td> 45505から41（500シリーズ1/16 &quot;） </td></tr><tr><td>アクリルボックスをキャスト</td><td> Ellard装</td><td>オーダーメイド</td></tr><tr><td>管継手（黄銅またはステンレス鋼） </td><td>シアトル流体システム</td><td> B-402-1（1/4 &quot;ナット） B-200-3（1/8 &quot;ユニオンティー） B-400セット（1/4 &quot;フェルール） B-QM2-B1-200（QMボディQC） B-200-1-2（1/8×1/8 &quot;オスCONN） </td></tr><tr><td>ダウコーニングの真空用グリース</td><td> Sigma-Aldrich社</td><td> Z273554 </td></tr><tr><td> AnaeroPackボックス</td><td> Misubishiガス·ケミカル·カンパニー</td><td> R684004（0.4リットル） R685025（2.5リットル） R685070（7.0リットル） </td></tr><tr><td>パイレックスガス洗浄瓶</td><td> Sigma-Aldrich社</td><td> CLS31770500C（500 mL）を CLS31770250C（250 mL）を CLS31770125C（125 mL）を&lt;/ TD&gt; </tr><tr><td>パルミチン酸</td><td> Sigma-Aldrich社</td><td> P0500 </td></tr><tr><td>ヤギ抗マウスIgG-西洋ワサビペルオキシダーゼ</td><td>サザンバイオテクノロジーアソシエイツ</td><td> 1032年から1005年</td></tr><tr><td> SuperSignal西ピコChemiluminsecent基板</td><td>ピアスケミカル</td><td> 34077 </td></tr><tr><td> 100×50ガラスの結晶皿</td><td> Kimaxキンブル</td><td> 23000 </td></tr></tbody></table>

creating defined gaseous environments to study the effects of hypoxia on c. elegans

酸素は、既知の例外の1つ1で、すべての後生動物が生き残るために不可欠である。減少したO 2可用性（低酸素）は、環境条件2-5の病気、通常の開発や変更の状態の間に発生する可能性があります。低酸素への応答に関与する細胞内シグナル伝達経路を理解することが脳卒中からがんまで、多様な人間の病態の治療戦略に新たな洞察を提供することができます。この目標は、遺伝的影響を受けやすいモデル生物で制御された低酸素曝露に伴う技術的困難により、少なくとも部分的に妨げられてきた。 線虫 Caenorhabditis elegans は、理想的にはそれが文 ​​化に容易であり、遺伝的操作として、低酸素応答の研究のためのモデル生物として適しています。また、C.以降の交絡影響を及ぼすことなく特定の酸素O 2濃度に対する細胞応答を研究することが可能ですelegansは O 2を得る（容易に呼吸器系6とは対照的に、拡散による）ガスや他の。低酸素に対する応答に関与することが知られている要因は、Cで保存されているエレガンス 。低酸素状態への実際の応答が可能ですO 2の特定の濃度に依存する。 C.でelegansは 、低酸素症を緩和するための露出がHIF-1によって主として媒介転写応答を誘発する、高度に保存され低酸素誘導転写因子6-9。C。elegansの初期胚では、O 2 7,10 5,000-20,000 ppmで生き残るためにはHIF-1を必要とする。低酸素状態は&quot;通常のO 2未満&quot;のための一般的な用語です。正常酸素（通常のO 2）も定義することが困難な場合があります。我々は一般的に正常酸素であることが21万ppmのO 2であり、室内の空気を、検討してください。しかし、それは示されているC. elegansは 5から12パーセントからO 2濃度（50,000-120,000 ppmのO 2）11の行動の優先順位を持っています。 lのarvaeと大人、5,000 ppmのO 2 12に低酸素誘導休眠を防止するために、HIF-1として機能します。しかし、HIF-1は、O 2の低濃度（酸素欠乏、操作的定義&lt;10 ppmのO 2）13に対応して役割を果たしていない。無酸素症、Cの虫はすべて微視的に観察活動が10を停止した仮死状態の可逆的な状態に入る。異なる生理的応答は、さまざまな条件で発生するという事実は、O 2の酸素濃度以上の実験的なコントロールを持つことの重要性を強調しています。 ここでは、O 2の濃度と定義された信頼性と再現性の低酸素状態を作り出す環境槽の建設と実施のための手法を提案する。継続的なフロー法は、チャンバーの急速な平衡を保証し、システムの安定性を向上させます。さらに、透明性とチャンバーのアクセシビリティは、低酸素状態にさらされる動物の直接可視化を可能にします。我々はさらにCを収穫する効果的な方法を実証虫のサンプル急速に低酸素に曝露した後、これは低酸素症10,14で発生し、急速に逆の変化の多くを観察する必要があります。このメソッドは、簡単に別のモデルシステムとガスの多様など、個々の研究室のニーズに合わせて修正することができる基本的な基盤を提供します。

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Creating Defined Gaseous Environments to Study the Effects of Hypoxia on C. elegans

Oの定義された濃度の雰囲気を生成するために、連続フロー酸素チャンバーを使用する方法を本論文の詳細<sub&gt; 2</sub&gt;生物学的応答を理解するためにOを減少する<sub&gt; 2</sub&gt;。このシステムは、セットアップと保守が容易で、Oの広い範囲に合わせて十分な柔軟性があり<sub&gt; 2</sub&gt;濃度とモデルシステム

に低酸素の影響を検討するために定義され気体環境を作成する<em&gt; C.エレガンス</em

Oxygen is essential for all metazoans to survive, with one known exception1. Decreased O2 availability (hypoxia) can arise during states of disease, ...

Research

JoVE Journal

Biology

Creating Defined Gaseous Environments to Study the Effects of Hypoxia on C. elegans

Testing Visual Sensitivity to the Speed and Direction of Motion in Lizards

トカゲの運動の速度と方向の視覚感度のテスト

Testing visual sensitivity in any species provides basic information regarding behaviour, evolution, and ecology. However, testing specific features of ...

生物学

MALDI Sample Preparation: the Ultra Thin Layer Method

MALDIサンプル調製：超薄層法

This video demonstrates the preparation of an ultra-thin matrix/analyte layer for analyzing peptides and proteins by Matrix-Assisted Laser Desorption ...

Generation of Stable Transgenic C. elegans Using Microinjection

マイクロインジェクションを使用して安定したトランスジェニック線虫の世代

Transgenic Caenorhabditis elegans can be readily created via microinjection of a DNA plasmid solution into the gonad 1.  The plasmid DNA rearranges to ...

Dissecting and Recording from The C. Elegans Neuromuscular Junction

解離性とC. elegansの神経筋接合部から録音する

Neurotransmission is the process by which neurons transfer information via chemical signals to their post-synaptic targets, on a rapid time scale.   This ...

Hi-C: A Method to Study the Three-dimensional Architecture of Genomes.

ハイC：ゲノムの三次元構造を研究する方法。

The three-dimensional folding of chromosomes compartmentalizes the genome and and can bring distant functional elements, such as promoters and enhancers, ...

The Production of C. elegans Transgenes via Recombineering with the galK Selectable Marker

The Production of C. elegans Transgenes via Recombineering with the galK Selectable Marker

の生産 C.エレガンス</emとRecombineering経由>トランスジーン galK選択可能なマーカー

The creation of transgenic animals is widely utilized in C. elegans research including the use of GFP fusion proteins to study the regulation and ...

RNAi Screening to Identify Postembryonic Phenotypes in C. elegans

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の後胚表現型を識別するためのRNAiスクリーニング C.エレガンス</em

C. elegans has proven to be a valuable model system for the discovery and functional characterization of many genes and gene pathways1. More sophisticated ...

Using RNA-mediated Interference Feeding Strategy to Screen for Genes Involved in Body Size Regulation in the Nematode C. elegans

Using RNA-mediated Interference Feeding Strategy to Screen for Genes Involved in Body Size Regulation in the Nematode C. elegans

線虫における身体サイズ調節に関与する遺伝子をスクリーニングするための戦略を給餌RNA媒介干渉を用いた<em&gt; Cエレガンス</em

Double-strand RNA-mediated interference (RNAi) is an effective strategy to knock down target gene expression1-3. It has been applied to many model systems ...

C. elegans Chemotaxis Assay

C. elegans Chemotaxis Assay

C. elegansの走化性アッセイ

Many organisms use chemotaxis to seek out food sources, avoid noxious substances, and find mates.  Caenorhabditis elegans has impressive chemotaxis ...

Using Caenorhabditis elegans as a Model System to Study Protein Homeostasis in a Multicellular Organism

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The folding and assembly of proteins is essential for protein function, the long-term health of the cell, and longevity of the organism. Historically, the ...