Name: isolation of cd4+ t cells from mouse lymph nodes using miltenyi macs purification
Uploaded: 2007-11-01T00:34:55
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification at JoVE.com

<p> We willen Rebecca Paquett bedanken voor de bereiding van MACS buffer. </p>

<p> Lees en volg het protocol opgenomen in de Miltenyi kit of online op <a href="http://www.miltenyibiotec.com/">http://www.miltenyibiotec.com/</a> . </p>

<ol>
	<li>Miller, M. J., Hejazi, A. S., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+repertoire+scanning+is+promoted+by+dynamic+dendritic+cell+behavior+and+random+T+cell+motility+in+the+lymph+node.">T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node.</a> <em style='font-style: italic'>Proc Natl Acad Sci U S A</em>. <b>101</b>, 998-1003 (2004).</li><li>Matheu, M. P., Deane, J. A., Parker, I., Fruman, D. A., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Class+IA+phosphoinositide+3-kinase+modulates+basal+lymphocyte+motility+in+the+lymph+node.">Class IA phosphoinositide 3-kinase modulates basal lymphocyte motility in the lymph node.</a> <em style='font-style: italic'>J Immunol</em>. <b>179</b>, 2261-2269 (2007).</li></ol>

<p> Isolatie van cellen uit de primaire bron is een noodzakelijke stap in veel meer complexe protocollen. Miltenyi biedt kits te isoleren cellen van verschillende organismen waaronder de mens, niet-menselijke primaten, rat en, zoals we hier beschrijven, muizen. Magnetische bead-based celscheiding maakt zowel positieve selectie (of cel depletie) als negatieve selectie. Hier tonen we negatieve selectie van de ongerepte of na ve CD4 + helper T-cellen. Met behulp van deze standaard protocol we meestal zuiveren cellen die ≥ 96% zuiver CD4 + / CD3 ...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>MACS Buffer</td>
<td>Reagent</td>
<td>None</td>
<td>None </td>
<td>Prepare as described by Miltenyi. 

</td>
</tr>
<tr>
<td>CD4+ T cell Isolation Kit: Untouched Isolation </td>
<td>Reagent</td>
<td>Miltenyi</td>
<td>130-090-860</td>
<td>For use with the Miltenyi system. </td>
</tr>
<tr>
<td>Sterile Phosphate-Buffered Saline (PBS)</td>
<td>Reagent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>For use in the preparation of MACS buffer.</td>
</tr>
<tr>
<td>Corning 35mm Not TC-Treated Culture Dish</td>
<td>Other</td>
<td>Corning Cell Culture Surfaces</td>
<td>430588</td>
<td>Used in the preparation of a single cell suspension.</td>
</tr>
<tr>
<td>70 micron Cell Strainer </td>
<td>Tool </td>
<td>BD Falcon</td>
<td>352350</td>
<td>Used in the preparation of a single cell suspension.</td>
</tr>
<tr>
<td>6 mL Syringe </td>
<td>Tool</td>
<td>Tyco Healthcare</td>
<td>8881516051</td>
<td>Used in the preparation of a single cell suspension.</td>
</tr>
<tr>
<td>10x Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>14200-075</td>
<td>For use in RBC lysis.</td>
</tr>
<tr>
<td>Sterile Water </td>
<td>Reagent </td>
<td>Sigma</td>
<td>W4502</td>
<td>For use in RBC lysis.</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>
		

isolation of cd4+ t cells from mouse lymph nodes using miltenyi macs purification

<p class="jove_content"> Isolatie van cellen uit de primaire bron is een noodzakelijke stap in veel meer complexe protocollen. Miltenyi biedt kits te isoleren cellen van verschillende organismen waaronder de mens, niet-menselijke primaten, rat en, zoals we hier beschrijven, muizen. Magnetische bead-based celscheiding maakt zowel positieve selectie (of cel depletie) als negatieve selectie. Hier tonen we negatieve selectie van de ongerepte of na ve CD4 + helper T-cellen. Met behulp van deze standaard protocol we meestal zuiveren cellen die ≥ 96% zuiver CD4 + / CD3 +. Dit protocol wordt gebruikt in combinatie met het protocol Dissection en 2-Photon Imaging van perifere lymfeklieren in Muizen gepubliceerd in nummer 7 van Jupiter, voor het zuiveren van T-cellen en andere celtypes te adoptief dragen voor de beeldvorming doeleinden. Hoewel we FACS-analyse niet aan te tonen in dit protocol video, is het sterk aanbevolen om de totale zuiverheid van de geïsoleerde cellen met behulp van de juiste antilichamen via FACS te controleren. Daarnaast tonen we de niet-steriele methode van T-cel isolatie. Als steriele cellen nodig zijn voor uw specifieke end-user applicatie, moet u alle van de aangetoonde procedures in de weefselkweek kap doen onder standaard steriele omstandigheden. Bedankt voor het kijken en veel succes met uw eigen experimenten! </p>

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification at JoVE.com

Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification

<p class="jove_content">Isolatie van lymfocyten met behulp van de Miltenyi MAC-kit is een betrouwbare manier om cellen van hele lymfeweefsel homogenaten te zuiveren. Cellen gezuiverd met behulp van de Miltenyi systeem zijn meestal ≥ 96% zuiver. Hier tonen we de stappen die zijn genomen om CD4 + T-cellen, een van de vele kits worden aangeboden door Miltenyi isoleren.</p>

Isolatie van CD4 + T-cellen van de muis lymfeknopen Met behulp van Miltenyi MACS Zuivering

Isolation of cells from the primary source is a necessary step in many more complex protocols. Miltenyi offers kits to isolate cells from several ...

Research

JoVE Journal

Biology

Dissection and 2-Photon Imaging of Peripheral Lymph Nodes in Mice

Dissection en 2-Photon Imaging van perifere lymfeklieren in Muizen

Two-photon imaging has revealed an elegant choreography of motility and cellular interactions within the lymph node under basal conditions and at the ...

CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV

CD4 + T-lymfocyten Capture Met behulp van een Wegwerp Microfluïdische Chip voor HIV

Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator

Voorbereiding van de Single-celsuspensies van Mouse Spleen met de gentleMACS Dissociator

Single-cell suspensions are a prerequisite for experiments in cell separation, cell analysis and cell culture.  To avoid tedious and often painful manual ...

Detection and Isolation of Viable Mouse IL-17-Secreting T Cells

Detectie en isolatie van levensvatbare muis IL-17-afscheidende T-cellen

The MACS Cytokine Secretion Assay technology allows detection of secreted cytokines on the single cell level and sensitive isolation of viable ...

Visualizing Antigen Specific CD4+ T Cells using MHC Class II Tetramers

Visualiseren van antigeen specifieke CD4 + T-cellen met behulp van MHC klasse II tetrameren

Major histocompatibility complex (MHC) class II tetramers allow the direct visualization of antigen specific CD4+ T cells by flow cytometry.  This method ...

Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator

Gestandaardiseerde Voorbereiding van de Single-celsuspensies van Mouse longweefsel met behulp van de gentleMACS Dissociator

The preparation of single-cell suspensions from tissues is an important prerequisite for many experiments in cellular research. The process of ...

Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue

Generatie van de Single-celsuspensies van Mouse Neural Tissue

Within the nervous system, hundreds of neuronal and glial cell types have been described. Each specific cell type in the brain or spinal cord has a ...

Purification of Mitochondria from Yeast Cells

Zuivering van Mitochondriën uit gistcellen

Mitochondria are the main site of ATP production during aerobic metabolism in eukaryotic non-photosynthetic cells1. These complex organelles also play ...

Isolation of Valvular Endothelial Cells

Isolatie van Valvulaire endotheelcellen

Heart valves are solely responsible for maintaining unidirectional blood flow through the cardiovascular system.  These thin, fibrous tissues are ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

Isolatie van het netvlies stamcellen van de muis Eye

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...