Name: isolation of cd4+ t cells from mouse lymph nodes using miltenyi macs purification
Uploaded: 2007-11-01T00:34:55
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification at JoVE.com

<p> Мы хотели бы поблагодарить Ребекка Paquett для подготовки буфера MACS. </p>

<p> Пожалуйста, прочитайте и следуйте протокол, входящий в комплект Miltenyi или на сайте <a href="http://www.miltenyibiotec.com/">http://www.miltenyibiotec.com/</a> . </p>

<ol>
	<li>Miller, M. J., Hejazi, A. S., Wei, S. H., Cahalan, M. D., Parker, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+repertoire+scanning+is+promoted+by+dynamic+dendritic+cell+behavior+and+random+T+cell+motility+in+the+lymph+node.">T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node.</a> <em style='font-style: italic'>Proc Natl Acad Sci U S A</em>. <b>101</b>, 998-1003 (2004).</li><li>Matheu, M. P., Deane, J. A., Parker, I., Fruman, D. A., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Class+IA+phosphoinositide+3-kinase+modulates+basal+lymphocyte+motility+in+the+lymph+node.">Class IA phosphoinositide 3-kinase modulates basal lymphocyte motility in the lymph node.</a> <em style='font-style: italic'>J Immunol</em>. <b>179</b>, 2261-2269 (2007).</li></ol>

<p> Изоляция клеток от первичного источника является необходимым шагом во многих более сложных протоколов. Miltenyi предлагает комплекты для изоляции ячеек нескольких организмов, включая человека, не человеческих приматов, крысы и, как мы описываем здесь, мыши. Магнитный шарик-ячейкой на основе разделе?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>MACS Buffer</td>
<td>Reagent</td>
<td>None</td>
<td>None </td>
<td>Prepare as described by Miltenyi. 

</td>
</tr>
<tr>
<td>CD4+ T cell Isolation Kit: Untouched Isolation </td>
<td>Reagent</td>
<td>Miltenyi</td>
<td>130-090-860</td>
<td>For use with the Miltenyi system. </td>
</tr>
<tr>
<td>Sterile Phosphate-Buffered Saline (PBS)</td>
<td>Reagent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>For use in the preparation of MACS buffer.</td>
</tr>
<tr>
<td>Corning 35mm Not TC-Treated Culture Dish</td>
<td>Other</td>
<td>Corning Cell Culture Surfaces</td>
<td>430588</td>
<td>Used in the preparation of a single cell suspension.</td>
</tr>
<tr>
<td>70 micron Cell Strainer </td>
<td>Tool </td>
<td>BD Falcon</td>
<td>352350</td>
<td>Used in the preparation of a single cell suspension.</td>
</tr>
<tr>
<td>6 mL Syringe </td>
<td>Tool</td>
<td>Tyco Healthcare</td>
<td>8881516051</td>
<td>Used in the preparation of a single cell suspension.</td>
</tr>
<tr>
<td>10x Dulbecco's Phosphate Buffered Saline (DPBS)</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>14200-075</td>
<td>For use in RBC lysis.</td>
</tr>
<tr>
<td>Sterile Water </td>
<td>Reagent </td>
<td>Sigma</td>
<td>W4502</td>
<td>For use in RBC lysis.</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>
		

isolation of cd4+ t cells from mouse lymph nodes using miltenyi macs purification

<p class="jove_content"> Изоляция клеток от первичного источника является необходимым шагом во многих более сложных протоколов. Miltenyi предлагает комплекты для изоляции ячеек нескольких организмов, включая человека, не человеческих приматов, крысы и, как мы описываем здесь, мыши. Магнитный шарик-ячейкой на основе разделения позволяет либо положительного отбора (или элементов истощения), а также негативный отбор. Здесь мы показываем негативный отбор нетронутой или наивны CD4 + Т-клетки. Используя этот стандартный протокол мы обычно очищают клетки, которые ≥ 96% чистой CD4 + / CD3 +. Этот протокол используется в сочетании с Dissection протокол и 2-Фотон изображений периферических лимфатических узлов у мышей опубликована в выпуске 7 Юпитера, для очистки Т-клеток и другие типы клеток, чтобы восприимчиво передачу для работы с изображениями целей. Хотя мы не продемонстрировали FACS анализ в этом видео протокол, настоятельно рекомендуется проверить общую чистоту изолированных клеток с использованием соответствующих антител с помощью FACS. Кроме того, мы демонстрируем нестерильный способ выделения Т-клеток. Если стерильные клетки необходимы для конкретного конечного пользователя приложения, убедитесь, что сделали все продемонстрировали процедур в капюшоне культуры ткани при стандартных стерильных условиях. Спасибо за внимание и удачи в ваших собственных экспериментов! </p>

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification at JoVE.com

Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification

<p class="jove_content">Выделение лимфоцитов с использованием набора Miltenyi ПДК является надежным способом очищают клетки от целых лимфоидной гомогенатах ткани. Клетки очищали с использованием системы Miltenyi, как правило, ≥ 96% чистой. Здесь мы демонстрируем, шаги, предпринятые для изоляции CD4 + Т-клеток, одна из многих комплектов, предлагаемых Miltenyi.</p>

Выделение CD4 + Т-клеток от мышей лимфатических узлов с помощью Miltenyi MACS очистки

Isolation of cells from the primary source is a necessary step in many more complex protocols. Miltenyi offers kits to isolate cells from several ...

Research

JoVE Journal

Biology

Dissection and 2-Photon Imaging of Peripheral Lymph Nodes in Mice

Разбор и 2-Фотон изображений периферических лимфатических узлов у мышей

Two-photon imaging has revealed an elegant choreography of motility and cellular interactions within the lymph node under basal conditions and at the ...

CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV

CD4 + T-лимфоцитов Захват Использование одноразовых микрофлюидный чип на ВИЧ

Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Spleen with the gentleMACS Dissociator

Подготовка одноклеточных суспензий из селезенки мыши с gentleMACS диссоциатор

Single-cell suspensions are a prerequisite for experiments in cell separation, cell analysis and cell culture.  To avoid tedious and often painful manual ...

Detection and Isolation of Viable Mouse IL-17-Secreting T Cells

Обнаружение и выделение жизнеспособных Мышь Ил-17-секретирующих клеток Т

The MACS Cytokine Secretion Assay technology allows detection of secreted cytokines on the single cell level and sensitive isolation of viable ...

Visualizing Antigen Specific CD4+ T Cells using MHC Class II Tetramers

Визуализация антиген Конкретные CD4 + Т-клеток с использованием МНС класс II тетрамеров

Major histocompatibility complex (MHC) class II tetramers allow the direct visualization of antigen specific CD4+ T cells by flow cytometry.  This method ...

Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator

Стандартизированные Подготовка одноклеточных суспензий от мыши легочной ткани использованием gentleMACS диссоциатор

The preparation of single-cell suspensions from tissues is an important prerequisite for many experiments in cellular research. The process of ...

Generation of Single-Cell Suspensions from Mouse Neural Tissue

Генерация одноклеточных суспензий от мыши нервной ткани

Within the nervous system, hundreds of neuronal and glial cell types have been described. Each specific cell type in the brain or spinal cord has a ...

Purification of Mitochondria from Yeast Cells

Очистка Митохондрии из дрожжей Клетки

Mitochondria are the main site of ATP production during aerobic metabolism in eukaryotic non-photosynthetic cells1. These complex organelles also play ...

Isolation of Valvular Endothelial Cells

Выделение клапанные эндотелиальных клеток

Heart valves are solely responsible for maintaining unidirectional blood flow through the cardiovascular system.  These thin, fibrous tissues are ...

Isolation of Retinal Stem Cells from the Mouse Eye

Выделение стволовых клеток сетчатки от мыши глаз

The adult mouse retinal stem cell (RSC) is a rare quiescent cell found within the ciliary epithelium (CE) of the mammalian eye1,2,3. The CE is made up of ...