Name: non-plasma bonding of pdms for inexpensive fabrication of microfluidic devices
Uploaded: 2007-11-01T00:41:54
Duration: 4 min 45 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Non-plasma Bonding of PDMS for Inexpensive Fabrication of Microfluidic Devices at JoVE.com

Förbereda mikroflödessystem enheter för Neuron Cell Culture 1) Rengör Corning No.1 24 mm x 40 mm glasskivor <ul><li> Sonikera glaset glider i ett vattenbad sonicator i 30 minuter </li><li> Skölj objektglas med 70% EtOH </li><li> Tvätta diabilder tre gånger med dH 2 O </li><li> Torka objektglasen i en vävnadsodling huva i flera timmar, gärna över natten </li></ul> OBS: Vi har speciell metall brickor som vi last med bilderna. Bilderna är separerade individuellt och placeras i spår i denna metall rack. Vi kan då placera dessa brickor av metall lastning i en glasskål som vi fyller med vatten, lägg i vattenbadet sonicator och Sonikera i 30 minuter. Efterföljande tvättar utförs i denna maträtt. 2) Förberedelse av PDMS-enheter <ul><li> Klipp ut PDMS mögel från kiselskiva, stansa hål i PDSM rösterna kvartalet </li><li> Rengör PDMS-enheter genom att först blåsa inert gas (argon eller kvävgas) över dem. Använd sedan 3M Scotch Brand 471 tejp för att lyfta bort eventuell kvarvarande skräp </li></ul> OBS: Det är viktigt att hålla enheter uppåt. Inledningsvis när vi sänkte PDMS bort från kiselskiva, är sidan i kontakt med rånet den rena sidan: den innehåller mikroflödessystem kanaler. Vi försöker att vara så försiktiga vi kan inte skada enheten och hålla rena sidan uppåt tills vi är redo för plasma bindning. <ul><li> Autoklav enheter i plastbehållare </li><li> Efter autoklavering, ren Nr 1 Corning Glass diabilder och plasma-treat enheter med en Harrick renare varumärke plasma, <a href="http://www.harrickplasma.com/" target="_blank">www.harrickplasma.com</a> </li><li> Placera enheterna rena nedåt på glaset bilden. </li></ul> Enheten är nu plasma bundet till objektglas. 3) Beläggning Enheter med Poly L-lysin (PLL) <ul><li> PLL läggs till en bra bit på vardera sidan av enheten och tillåtas att flöda genom till nästa väl </li></ul> =&gt; 150 l av PLL för de stora brunnarna och 30 μ l PLL för de mindre brunnar. Det behöver inte vara exakt så länge brunnarna är fulla. OBS: Om du tittar på en enhet ser du 4 brunnar: varje två är anslutna. Du vill sätta PLL i en väl så att det kommer att flöda genom enheten i nästa väl. <ul><li> Låt PLL att flödet genom enheten i ca 10 minuter och sedan lägga till fler PLL till brunnarna för att fylla upp dem </li><li> Placera produkter som innehåller PLL i en inkubator vid 37 ° C i minst 4 timmar (över natten är att föredra) </li><li> Dammsug ut överflödigt PLL efter behandlingen, men var noga med att inte suga all vätska ur enheten </li></ul> Observera: Du vill inte införa luftbubblor till kanaler eller kammaren. Bara vakuum ut överflödigt PLL i brunnarna. <ul><li> Lägg autoklaveras dH 2 O i varje brunn på vardera sidan av enheten och låt den strömma till andra bra genom kapillärkraft </li></ul> Figur 1 är ett diagram över en mikroflödessystem enhet. Lägg märke till hur den blåa (Soma sida) är ansluten och den röda (axonal sidan) är anslutna. När vi säger sätter PLL, eller vatten eller media, en bra bit på vardera sidan av enheten, vad vi menar, till exempel: Placera 150 ul av autoklaveras dH 2 O i en blå Nåväl plats 150 ìl autoklaveras dH 2 0 i en röd Well. Det vatten (eller PLL, eller Media eller celler) kommer att flöda genom enheten till andra motsvarande väl. <img src="/files/ftp_upload/old/410_2008_8_27_3/410_Figure-01.png" alt="Figur 1" width="362" height="216" /> Figur 1 Obs: Observera att från och med nu, när jag säger &quot;plats medier, celler, vatten eller PLL i TOP brunnar&quot;, jag hänvisar till diagrammet ovan där Soma skulle vara till vänster och axoner kommer att växa till rätt. <ul><li> Sug av vattnet (igen försiktigt så att inte helt ta bort all vätska från enheten), sedan lägga till ytterligare 150 ìl autoklaveras dH 2 O till en av varje ansluten väl och låt den flöda genom till motsvarande väl. </li><li> Placera enheten innehåller dH 2 O i en inkubator vid 37 ° C i 1 timme, upprepa sedan tvätta steg igen. Tvätta enheter tre gånger med dH 2 O i en timme vardera, vilket är den totala. </li></ul> OBS: På grund av möjligheten att borat från PLL kan ta in i PDMS, några i Jeon Lab rekommenderar inkubering av enheter över natten med autoklaveras dH 2 O efter ett par initial snabb sköljningar. Detta kommer att säkerställa att alla fria borat kommer att läcka ut från PDMS före lastning av celler. Om detta inte görs kan det finnas ett utsläpp av borat i media över tid, vilket kan leda till cytotoxicitet. <ul><li> Lägg Neural Basal Media (NBM) med nödvändiga faktorer (glutamax, B27, PenStrep) till toppen brunnar </li></ul> OBS: enheterna kan inkuberas över natten och klädd med celler nästa dag, eller inkuberas minst 3 timmar med NMB + faktorer innan bordläggning cellerna. Förbereda nervceller för påfyllning av Enheter Vi använder 18 dagar gamla foster råtta cortex att vi antingen köper från ett företag som heter Brain bitar som är beredd här på campus för oss. Vi föredrar att få vävnaden fräsch. <ol><li> Skaffa ett foster hjärnbarken (2 stycken av vävnad) lagras i Hibernate E </li><li> Ta 3 långa glas pipetter och eld dem varje i successivt mindre storlekar med en alkohol-lampa </li><li> bort vävnad från viloläge E med ett glas pipett och lägg i 2 ml NMB + Faktorer i ett sterilt 15 ml rör. </li><li> Trituration: Med hjälp av en glödlampa och glaspipett cortex förs upp och ner cirka 5 till 10 gånger. Sedan är nästa mindre pipett som används för att pipettera upp och ned i vävnaden. Slutligen är det minsta pipett som används för att pipettera upp och ned i vävnaden. Vi vill se till att det inte finns några synliga bitar. Obs: Nyligen började Jeon Lab jämföra celler från vävnad lagras i Hibernate E till celler som var beredda från vävnad från början behandlades med 0,125% Trypsin i 50% Ca + + gratis och Mg + + gratis dissektion buffert. Enighet råder om att vävnad prepareras med trypsin ger mer livskraftiga celler än vävnad placeras först i Hibernate E. Om du INTE ska använda vävnaden direkt, måste du lagra vävnad i Hibernate E. Om du ska använda vävnaden direkt och vill öka lönsamheten, då behandla vävnaden med Trypsin före mekanisk trituration som följande: 1) Späd 1 ml 0,25% Trypsin (Gibco, Invitrogen) med 1 ml av Ca + + gratis Mg + + gratis dissektion buffert (sista Trypsin = 0,125%) i ett 15 ml rör (hålla iskallt), 2) plats vävnad i buffert och inkubera omedelbart vid 37 ° C i 8 minuter, 3) tillsätt 10 ml DMEM/10% FBS att stoppa Trypsin reaktion och fortsätter protokoll nedan. </li><li> Centrifugera cellerna vid 1100 rpm i 1 minut </li><li> Aspireras medier försiktigt bort cellpelleten </li><li> Tillsätt 1 ml NMB + faktorer till pelleten och resuspenderas det genom att pipettera upp och ned </li><li> Passera resuspenderas celler genom självfall genom ett filter för att ta bort klumpar (BD Falcon cell sil 40 um nylon) </li><li> Räkna och celler skylt: <ul><li> I ett mikrofugrör, tillsätt 60 l NMB + faktorer, 20 l cellsuspension och 20 l trypan blå och blanda sedan </li><li> Tillsätt ca 10 l av denna lösning till en hemocytometer och räkna levande celler (inte blå) </li><li> Justera koncentrationen till 2,5 till 4,5 x10 6 celler / ml Observera: Vi brukar få en koncentration av ca 2,5 till 4,5 x 106 celler / ml. beroende på volymen cellerna är suspenderade i (normalt 1 ml NBM + B27/Glutamax/PenStrep percortex). Om vävnaden var beredd med trypsin, kommer avkastningen sannolikt ökas. </li></ul></li></ol> Plating Enheter <ol><li> Lastceller (primära neuroner) i en brunn av enheten </li><li> Plate 5 l per liten enhet och 20 l per stor enhet Notera: Du kan ladda 10 ìl av celler på toppen av enheten och 10 l på undersidan av enheten (halv totala volymen), eller direkt alla 20 ìl av celler i övre somal bra (5 l i topp somal väl för små enheter). </li><li> Inkubera i 10 minuter i en 37 ° C inkubator så cellerna kan börja att fästa </li><li> Tillsätt ungefär 150/30 ìl NMB + faktorer i varje brunn beroende på enhetens storlek Anm: Volymerna kan variera beroende på tjockleken på PDMS. Allt som räknas är att brunnarna är fulla. </li></ol> Kompletterande Använda den enheter utan Plasma Bonding Utan plasma-behandling, säger Christina Tu, en tekniker, som gör det med framgång varje vecka utan plasma för att bara ladda cellerna direkt. Kom ihåg att ta bort media från båda brunnarna på Soma sidan (axonet sida ingen roll om du lämnar media i). Det är vätskeflödet som gör att cellerna att gå in i kanalen. Om du har media i brunnar, kommer du inte få strömning.

<ol>
	<li>Park, J. W., Vahidi, B., Taylor, A. M., Rhee, S. W., Jeon, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+culture+platform+for+neuroscience+research.">Microfluidic culture platform for neuroscience research.</a> Nat Protoc. 1 (4), 2128-2136 (2006).</li><li>Taylor, A. M., Blurton-Jones, M., Rhee, S. W., Cribbs, D. H., Cotman, C. W., Jeon, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microfluidic+culture+platform+for+CNS+axonal+injury,+regeneration+and+transport.">A microfluidic culture platform for CNS axonal injury, regeneration and transport.</a> Nat Methods. 2 (8), 599-605 (2005).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Här har vi visat hur du använder neuron mikroflödessystem enhet utan att behöva en plasma renare. Vi kallar detta för icke-plasma bindning.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>PDMS</td>
<td>Reagent</td>
<td>Dow Corning</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sylgard 184 with curing agent Please consult Dow Corning to find a vendor near you</td>
</tr>
<tr>
<td>Cornig No. 1 Cover Glass</td>
<td>Cover Glass</td>
<td>Corning</td>
<td>Corning No. X2935 244</td>
<td>Available through Fisher Scientific, Fish Catalog number 12-531D</td>
</tr>
<tr>
<td>B27</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>17504-044</td>
<td>B27 is a proprietary supplement available through Invitrogen under their Gibco line of cell culture reagents.</td>
</tr>
<tr>
<td>Glutamax</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>35050-061</td>
<td>Glutamax is available through Invitrogen under their Gibco line of celll culture reagents.</td>
</tr>
<tr>
<td>60 mm Petri Dish</td>
<td>Tool</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>08-757-13A</td>
<td>60 mm polystyrene sterile petri dishes are used to house the device bound to glass.</td>
</tr>
<tr>
<td>Poly-L-Lysine</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>P-1274</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BD Falcon 50 ml Tube</td>
<td>Tool</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>Falcon No. 352098</td>
<td>Available through Fisher Scientific catalog number 14-959-49A</td>
</tr>
<tr>
<td>BD Falcon 15 ml tube</td>
<td>Tool</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>Falcon No. 352097</td>
<td>Available through Fisher Scientific catalog number 14-959-70C</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>

non-plasma bonding of pdms for inexpensive fabrication of microfluidic devices

I denna video visar vi hur du använder neuron mikroflödessystem enheten utan plasma bindning. I vissa fall kan det vara önskvärt att reversibelt band enheter till Corning Nr 1 skyddsglas. Detta kan bero, kanske, till en plasma renare inte är tillgänglig. I andra fall kan det vara önskvärt att ta bort enheten från glaset efter odling av nervceller för vissa typer av mikroskopi eller för immunfärgning, men det är inte nödvändigt att ta bort enheten för immunfärgning eftersom nervceller kan färgas i enheten. Vissa forskare är dock fortfarande föredrar att ta bort enheten. I det här fallet är reversibel bindning av enheten till att omfatta glas som möjligt. Det finns vissa nackdelar med icke-plasma bindning av enheterna i den inte lika stram av ett sigill bildas. I vissa fall axoner kan växa under spåren snarare än genom dem. Också, eftersom glaset och PDMS är hydrofoba, inte vätskor inte lätt in i apparaten gör det nödvändigt ibland för att tvinga media och andra reagenser i enheten. Vätskor kommer in i enheten via kapillärkraften, men det tar betydligt längre jämfört med enheter som har plasma limmas. Plasma renare skapar temporära hydrofila avgifter på glaset och enhet som underlättar flödet av vätskor genom enheten efter limning inom några sekunder. För icke-plasma bundet enheter, tar vätskeflödet genom de anordningar flera minuter. Det är också viktigt att notera att de enheter som skall användas med icke-plasma limning måste steriliseras först, medan plasma behandlade enheter inte behöver steriliseras före användning eftersom plasma renare kommer att sterilisera dem.

Watch this Scientific Journal Video about Non-plasma Bonding of PDMS for Inexpensive Fabrication of Microfluidic Devices at JoVE.com

Non-plasma Bonding of PDMS for Inexpensive Fabrication of Microfluidic Devices

I denna video visar vi hur du använder neuron mikroflödessystem enheten utan plasma bindning.

Icke-plasma Limning av PDMS för billig Tillverkning av mikroflödessystem enheter

In this video, we demonstrate how to use the neuron microfluidic device without plasma bonding.  In some cases it may be desirable to reversibly bond ...

Research

JoVE Journal

Biology

Fabrication of a Microfluidic Device for the Compartmentalization of Neuron Soma and Axons

Tillverkning av en mikroflödessystem enhet för uppdelning av Neuron Soma och Axoner

In this video, we demonstrate the technique of soft lithography with polydimethyl siloxane (PDMS) which we use to fabricate a microfluidic device for ...

A Gradient-generating Microfluidic Device for Cell Biology

En gradient som genererar mikroflödessystem enhet för cellbiologi

 The fabrication and operation of a gradient-generating microfluidic device for studying cellular behavior is described.  A microfluidic platform is an ...

PDMS Device Fabrication and Surface Modification

PDMS Komponentframställning och ytmodifiering

Fabrication of the Thermoplastic Microfluidic Channels

Tillverkning av termoplast mikroflödessystem kanaler

In our lab, we have successfully isolated nucleic acids directly from microliter and submicroliter volumes of human blood, urine and stool using ...

Microfluidic Applications for Disposable Diagnostics

Mikroflödessystem Ansökningar om Disponibel Diagnostik

In this interview, Dr. Klapperich discusses the fabrication of thermoplastic microfluidic devices and their application for development of new ...

Fabrication of Amperometric Electrodes

Tillverkning av amperometriska elektroder

Carbon fiber electrodes are crucial for the detection of catecholamine release from vesicles in single cells for amperometry measurements.  Here, we ...

Fabrication of Myogenic Engineered Tissue Constructs

Tillverkning av Myogenic vävnadstekniska Konstruerar

Despite the fact that electronic pacemakers are life-saving medical devices, their long-term performance in pediatric patients can be problematic owing to ...

High Speed Droplet-based Delivery System for Passive Pumping in Microfluidic Devices

High Speed ​​Droplet-baserade Delivery System för passiva Pumpning i mikroflödessystem enheter

A novel microfluidic system has been developed that uses the phenomenon of passive pumping along with a user controlled droplet based fluid delivery ...

Automated Microfluidic Blood Lysis Protocol for Enrichment of Circulating Nucleated Cells

Automatiserad Mikroflödessystem Blod Lysis protokoll för anrikning av cirkulerande celler med kärnor

In this report the protocol for an automated microfluidic blood lysis device is detailed. Circulating nucleated cells (CNCs), including leukocytes and ...

Fabrication and Operation of an Oxygen Insert for Adherent Cellular Cultures 

Tillverkning och drift av en Oxygen Insats för Vidhäftande cellodlingar

Oxygen is a key modulator of many cellular pathways, but current devices permitting in vitro oxygen modulation fail to meet the needs of biomedical ...