Name: non-plasma bonding of pdms for inexpensive fabrication of microfluidic devices
Uploaded: 2007-11-01T00:41:54
Duration: 4 min 45 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Non-plasma Bonding of PDMS for Inexpensive Fabrication of Microfluidic Devices at JoVE.com

Nöron Hücre Kültürü için mikroakışkan Cihazlar hazırlanması 1) Temiz Corning No.1 24 mm X 40 mm cam slaytlar <ul><li> 30 dakika boyunca bir su banyosu sonikatör cam slaytlar sonikasyon </li><li> Cam slaytlar,% 70 EtOH ile durulayın </li><li> Yıkama dH 2 O ile üç kez slaytlar </li><li> Tercihen bir gecede, birkaç saat için bir doku kültürü davlumbaz, Kuru slaytlar </li></ul> Not: Biz özel metal tepsiler slaytlar yük var. Slaytları tek tek ayrılmış ve bu metal raf yuvalarına yerleştirilir. Daha sonra bir cam tabak, su, su banyosu sonikatör yer ile doldurun bu metal yükleme tepsisi yerleştirin ve 30 dakika sonikasyon. Sonraki yıkar bu yemeğin yürütülmektedir. 2) PDMS cihazları hazırlanması <ul><li> PDSM döküm ve çeyrek bu silikon gofret PDMS kalıp kesip, delgeç </li><li> PDMS cihazlar onları genelinde ilk ve inert gaz (argon veya Azot) üfleyerek temizleyin. Daha sonra kalan tüm enkaz kaldırmak için 3M Scotch Marka 471 bandı kullanın </li></ul> Not: cihazların yüzü yukarı tutmak için önemlidir. Başlangıçta, silikon gofret uzak PDMS kesildiğinde, gofret ile temas tarafında temiz tarafında: mikroakışkan kanallarını içerir. Biz biz de cihaza zarar verebilir ve plazma yapıştırılması için hazır olana kadar temiz yüzleri yetişmek için olabildiğince dikkatli olmaya çalışıyorum. <ul><li> Plastik kaplar Otoklav cihazlar </li><li> Otoklav, temiz, No: 1 Corning cam slaytlar ve harrick marka plazma temizleyici, plazma tedavi cihazları <a href="http://www.harrickplasma.com/" target="_blank">sonra</a> www.harrickplasma.com </li><li> Cihazları cam slayt tarafı aşağı temiz bir yerde. </li></ul> Cihaz şimdi cam slayt gümrüklü plazma. 3) Kaplama Poli L-Lizin (PLL) ile Cihazlar <ul><li> PLL cihazın her iki tarafında iyi eklenir ve bir sonraki kuyuya akmasına izin verilir </li></ul> =&gt; 150 ul büyük küçük kuyuları için kuyu ve 30 μ l PLL PLL. Bu sürece kuyuları tam olarak tam olarak bulunmamış. Not: Bir aygıt bakarsanız 4 kuyu göreceksiniz: her iki bağlanır. Siz de bu yüzden sonraki kuyuya cihaz üzerinden akacak bir PLL koymak istiyorum. <ul><li> PLL yaklaşık 10 dakika boyunca cihaz üzerinden akış ve daha sonra bunları doldurmak için kuyu daha PLL eklemek için izin ver </li><li> (Gece ​​tercih edilir) 37 ° C&#39;de en az 4 saat için bir kuluçka PLL içeren cihazlar yerleştirin </li><li> Tedavi sonrası aşırı PLL Vakum, ancak cihazın tüm sıvı emmek için dikkatli olun </li></ul> Not: kanalları ya da odasına hava kabarcıkları tanıtmak istemiyorum. Sadece kuyularda aşırı PLL vakum. <ul><li> Cihazın her iki tarafında her bir kuyu için otoklava dH 2 O ve kılcal eylem diğer iyi akmasına izin </li></ul> Şekil 1 mikroakışkan bir cihazın bir diyagram. Mavi (Soma tarafı) nasıl bağlandığına dikkat edin ve Kızıl (Aksonal tarafı) bağlanır. Cihazın her iki tarafında iyi bir PLL, ya su ya da medya, demekle, ne demek istediğimizi, örneğin: Yeri otoklava dH biri Blue Peki o yerde 150 ul otoklava dH 2 O 150 ul Peki bir Kırmızı içine 2 0. Su (ya da PLL, Medya, veya Hücreler) cihaz üzerinden diğer ilgili iyi akacaktır. <img src="/files/ftp_upload/old/410_2008_8_27_3/410_Figure-01.png" alt="Şekil 1" width="362" height="216" /> Şekil 1 Not: Lütfen artık, diyorum &quot;TOP kuyularda medya, hücreleri, su veya PLL&quot;, Soma, soldaki nerede olurdu Yukarıdaki diyagram ve Aksonlar kastediyorum, not büyüyecek hakkını saklı tutar. <ul><li> Su (daha dikkatli olmak tam olarak tüm sıvı cihazdan çıkarmak için değil) aspire, sonra otoklava dH 2 O başka bir 150 ul de bağlı her birine ekleyin ve iyi karşılık akmasına izin verin . </li><li> 37 ° dH 2 O içeren bir kuluçka cihaz yerleştirin ° C 1 saat sonra tekrar yıkama adımı tekrarlayın. DH 2 O cihazları, üç kez yıkayın toplam bir saat, her biri . </li></ul> Not: PLL borat Jeon Lab i bir çift sonra otoklava dH 2 O gecede cihazlar kuluçka tavsiye PDMS emebilir olasılığı nedeniylenitial hızlı durular. Bu, tüm serbest borat önce hücre yükleme PDMS liç olacağını garanti eder. Bu yapılmadığı takdirde, medya içine borat bir açıklaması, sitotoksisiteye neden olabilir zaman içinde olabilir. <ul><li> Üst kuyuları için gerekli faktörleri (glutamax, B27, PenStrep) Sinir Bazal Ortam (NBM) </li></ul> Not: cihazlar inkübe, gece boyunca ve ertesi gün hücreleri ile kaplı veya hücreleri kaplama önce NMB + faktörler ile en az 3 saat inkübe edilebilir. Nöronlar Into Aygıtlar yüklenmesi için hazırlanması Biz 18 gün ya Beyin Bit kampüs ya da bizim için burada hazırlanan adında bir şirket satın eski fetal sıçan korteks kullanın. Biz taze doku almak için tercih ederler. <ol><li> Hazırda Bekleme E saklanan 1 fetal beynin korteks (2 adet doku) edinmek </li><li> Alkol lamba kullanarak 3 uzun cam pipetler alın ve gittikçe daha küçük boyutlarda her yangın </li><li> NMB + Faktörler 2 ml 15 ml steril bir tüp içinde bir cam pipet ve yer Hazırda Bekleme E dokuların çıkarın. </li><li> Öğütme: korteks yaklaşık 5 ile 10 kat aşağı yukarı geçti ve bir ampul ve cam pipet kullanarak . Ardından, sonraki küçük pipet doku aşağı yukarı pipet ve kullanılır. Son olarak, küçük pipet doku aşağı yukarı pipet ve kullanılır. Biz hiçbir görünür parçaları olmadığından emin olmak istiyorum. Not: Son zamanlarda, Jeon Lab, başlangıçta% 50,% 0.125 tripsin ile tedavi Doku hazırlanan hücreler Hazırda Bekleme E saklanan doku hücreleri karşılaştırarak başladı Ca + + ve Mg + + ücretsiz diseksiyonu tampon. Konsensus tripsin verim doku hemen kullanmak için DEĞİLDİR Hazırda Bekleme E. başlangıçta yerleştirilen doku daha canlı hücreler kullanarak hazırlanan doku, daha sonra Hazırda Bekleme E. doku saklamak gerekir Eğer hemen doku kullanmak için gidiyoruz vardır ve artan canlılığı istiyorsanız Eğer aşağıdaki gibi, daha sonra mekanik öğütme önce tripsin ile doku tedavisi: 1) 1 ml Ca + + ücretsiz Mg + + ücretsiz 1 ml% 0.25 tripsin (Gibco, Invitrogen) sulandırmak diseksiyonu tampon içine 15 ml tüp (buz tutmaya) (son tripsin =% 0.125), 2) yer tampon doku ve 8 dakika 37 ° C az hemen inkübe 3) durdurmak için 10 ml% DMEM/10 FBS eklemek tripsin reaksiyon ve aşağıda protokol devam. </li><li> 1 dakika için 1100 rpm&#39;de Santrifüj hücreleri </li><li> Kapalı hücre pelletini dikkatle aspire medya </li><li> NMB + faktörler kadar pipetleme pelet ve yeniden askıya 1 ml ve aşağı </li><li> (BD Falcon hücre süzgecinden 40 um naylon) herhangi bir kümeleri kaldırmak için bir filtre üzerinden yerçekimi akışı ile yeniden askıya hücreleri Pass </li><li> Sayımı ve plaka hücreleri: <ul><li> Bir mikrofuge&#39;de tüpe, 60 ul NMB + faktörler, hücre süspansiyonu ul, 20 ve 20 ul tripan mavi karışımı </li><li> Bu çözüm yaklaşık 10 ul bir hemasitometre ekleyin ve canlı hücrelerin sayısı (mavi) </li><li> Konsantrasyonu 2.5 ayarlama - 4,5 x10 6 hücre / ml Not: Biz genellikle yaklaşık 2,5 &#39;lik bir konsantrasyon elde - 4.5 x 106 hücre / ml. hacmine bağlı olarak hücrelerin (normalde 1 ml NBM + B27/Glutamax/PenStrep percortex) yeniden süspanse. Doku tripsin ile hazırlanmış ise, verim muhtemelen artacaktır. </li></ul></li></ol> Cihazlar Kaplama <ol><li> Birine cihazın Yük hücreleri (primer nöronlar) </li><li> Plaka küçük bir cihaz başına 5 ul ve büyük cihaz başına 20 ul Not: cihazın üst ve alt cihazın (yarım toplam hacmi) 10 ul 10 ul hücre yükü, ya da üst warfarin iyi hücrelerin doğrudan 20 ul (5 ul de üst warfarin Küçük cihazlar için). </li><li> 10 dakika 37 ° C inkübatör inkübe hücreleri eklemek başlayabilirsiniz </li><li> NMB + faktörlerin iyi cihaz boyutuna bağlı olarak her biri için yaklaşık 150 / 30 ul Not: Hacimler PDMS kalınlığına bağlı olarak değişebilir. Tüm bu konularda kuyu tam olmasıdır. </li></ol> Plazma Yapıştırma olmadan Cihazlar Açık Ek Plazma tedavisi olmadan, plazma olmaksızın her hafta başarıyla Christina Tu, bir teknisyen, sadece hücreler hemen yüklemek için söylüyor. Soma tarafında iki kuyu (medya bırakırsanız akson tarafı önemli değil) medya kaldırmak unutmayın. Bu hücrelerin ana kanal girmek için izin sıvı akış. Kuyuların medya varsa, sıvı akışını almazsınız.

<ol>
	<li>Park, J. W., Vahidi, B., Taylor, A. M., Rhee, S. W., Jeon, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microfluidic+culture+platform+for+neuroscience+research.">Microfluidic culture platform for neuroscience research.</a> Nat Protoc. 1 (4), 2128-2136 (2006).</li><li>Taylor, A. M., Blurton-Jones, M., Rhee, S. W., Cribbs, D. H., Cotman, C. W., Jeon, N. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microfluidic+culture+platform+for+CNS+axonal+injury,+regeneration+and+transport.">A microfluidic culture platform for CNS axonal injury, regeneration and transport.</a> Nat Methods. 2 (8), 599-605 (2005).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Burada plazma temizleyici gerek kalmadan nöron mikroakışkan cihaz nasıl kullanılacağını gösterdi. Biz bu gibi non-plazma bağı bakın.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>PDMS</td>
<td>Reagent</td>
<td>Dow Corning</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Sylgard 184 with curing agent Please consult Dow Corning to find a vendor near you</td>
</tr>
<tr>
<td>Cornig No. 1 Cover Glass</td>
<td>Cover Glass</td>
<td>Corning</td>
<td>Corning No. X2935 244</td>
<td>Available through Fisher Scientific, Fish Catalog number 12-531D</td>
</tr>
<tr>
<td>B27</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>17504-044</td>
<td>B27 is a proprietary supplement available through Invitrogen under their Gibco line of cell culture reagents.</td>
</tr>
<tr>
<td>Glutamax</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>35050-061</td>
<td>Glutamax is available through Invitrogen under their Gibco line of celll culture reagents.</td>
</tr>
<tr>
<td>60 mm Petri Dish</td>
<td>Tool</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>08-757-13A</td>
<td>60 mm polystyrene sterile petri dishes are used to house the device bound to glass.</td>
</tr>
<tr>
<td>Poly-L-Lysine</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>P-1274</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BD Falcon 50 ml Tube</td>
<td>Tool</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>Falcon No. 352098</td>
<td>Available through Fisher Scientific catalog number 14-959-49A</td>
</tr>
<tr>
<td>BD Falcon 15 ml tube</td>
<td>Tool</td>
<td>BD Falcon</td>
<td>Falcon No. 352097</td>
<td>Available through Fisher Scientific catalog number 14-959-70C</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
			<div>
					</div>

non-plasma bonding of pdms for inexpensive fabrication of microfluidic devices

Bu video, plazma bağı olmayan nöron mikroakışkan cihazın nasıl kullanılacağını göstermektedir. Bazı durumlarda Corning No 1 kapak cam geri dönüşümlü bond cihazlar istenebilir. Bu plazma temizleyici kullanılabilir değil, belki de bağlı olabilir. Diğer durumlarda, bu nöronlar cihaz lekeli olabilir çünkü immün aygıtı kaldırmak için gerekli olmasa da, mikroskopi veya immün için belirli türleri için kültür nöronların sonra cam aygıtı kaldırmak için arzu olabilir. Bazı araştırmacılar, ancak hala aygıtı kaldırmak için tercih ediyor. Bu durumda, cihazın kapağı cam reversibl bağlanma mümkün kılar. Olmayan, bir mühür gibi sıkı değil oluşur cihazların plazma bağı bazı dezavantajları vardır. Bazı durumlarda aksonlar ziyade onların aracılığıyla oluk altında büyür. Ayrıca, cam ve PDMS hidrofobik olduğu için, sıvıların kolaylıkla medya ve diğer reaktiflerin cihazın içine zorlamak için zaman zaman gerekli cihaz girmek yok. Sıvılar cihaz kapiller eylem yoluyla girecek ama önemli ölçüde daha uzun plazma gümrüklü cihazlara kıyasla sürüyor. Plazma temizleyici, cam ve cihaz sonra cihaz üzerinden saniyeler içinde yapıştırma sıvıların akışını kolaylaştırmak geçici hidrofilik ücretleri oluşturur. Cihazları ile sıvı akış non-plazma bağlı cihazlar için, birkaç dakika sürer. Cihazları plazma temizleyici sterilize edecektir, çünkü plazma tedavi cihazlar kullanımdan önce sterilize edilecek gerekmez iken, önce sterilize edilecek bağ olmayan plazma ile kullanılmak üzere olduğunu da not etmek önemlidir.

Watch this Scientific Journal Video about Non-plasma Bonding of PDMS for Inexpensive Fabrication of Microfluidic Devices at JoVE.com

Non-plasma Bonding of PDMS for Inexpensive Fabrication of Microfluidic Devices

Bu video plazma bağı olmayan nöron mikroakışkan cihazın nasıl kullanılacağını göstermektedir.

Ucuz mikroakışkan Cihazlar İmalat PDMS Non-plazma Yapışma

In this video, we demonstrate how to use the neuron microfluidic device without plasma bonding.  In some cases it may be desirable to reversibly bond ...

Research

JoVE Journal

Biology

Fabrication of a Microfluidic Device for the Compartmentalization of Neuron Soma and Axons

Nöron Soma ve Aksonlar compartmentalization mikroakışkan Aygıt Fabrikasyon

In this video, we demonstrate the technique of soft lithography with polydimethyl siloxane (PDMS) which we use to fabricate a microfluidic device for ...

A Gradient-generating Microfluidic Device for Cell Biology

Hücre Biyolojisi Degrade üreten mikroakışkan Aygıt

 The fabrication and operation of a gradient-generating microfluidic device for studying cellular behavior is described.  A microfluidic platform is an ...

PDMS Device Fabrication and Surface Modification

PDMS Cihaz İmalat ve Yüzey Modifikasyonu

Fabrication of the Thermoplastic Microfluidic Channels

Termoplastik mikroakışkan Kanallar imalatı

In our lab, we have successfully isolated nucleic acids directly from microliter and submicroliter volumes of human blood, urine and stool using ...

Microfluidic Applications for Disposable Diagnostics

Tek kullanımlık Diagnostics mikroakışkan Uygulamaları

In this interview, Dr. Klapperich discusses the fabrication of thermoplastic microfluidic devices and their application for development of new ...

Fabrication of Amperometric Electrodes

Amperometrik Elektrotlar imalatı

Carbon fiber electrodes are crucial for the detection of catecholamine release from vesicles in single cells for amperometry measurements.  Here, we ...

Fabrication of Myogenic Engineered Tissue Constructs

MİYOJEN Engineered Doku oluşturur imalatı

Despite the fact that electronic pacemakers are life-saving medical devices, their long-term performance in pediatric patients can be problematic owing to ...

High Speed Droplet-based Delivery System for Passive Pumping in Microfluidic Devices

Mikroakışkan Cihazlar Pasif pompalanması için Yüksek Hızlı Damlacık tabanlı Dağıtım Sistemi

A novel microfluidic system has been developed that uses the phenomenon of passive pumping along with a user controlled droplet based fluid delivery ...

Fabrication and Operation of an Oxygen Insert for Adherent Cellular Cultures 

İmalat ve Operasyon yapışkan Hücresel Kültürler Oksijen Ekle

Oxygen is a key modulator of many cellular pathways, but current devices permitting in vitro oxygen modulation fail to meet the needs of biomedical ...

Using Microfluidic Devices to Measure Lifespan and Cellular Phenotypes in Single Budding Yeast Cells

Mikroakışkan Aygıtlar Kullanma Tek Budding Maya Hücreleri ömrü ve Hücresel fenotipleri Ölçmek için

Budding yeast Saccharomyces cerevisiae is an important model organism in aging research. Genetic studies have revealed many genes with conserved effects ...