Name: processing of primary brain tumor tissue for stem cell assays and flow sorting
Uploaded: 2012-09-25T11:55:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Processing of Primary Brain Tumor Tissue for Stem Cell Assays and Flow Sorting at JoVE.com

وقد تم تمويل هذا العمل من قبل معهد أبحاث السرطان أونتاريو (OICR)، ومؤسسة تيري فوكس والرابطة الأمريكية لجراحي الأعصاب.

1. ثقافة الأنسجة استئصال ورم من الدماغ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أضف 200 ميكرولتر Liberase إذابة (روش العلوم التطبيقية) إلى 15 مل من السائل النخاعي الاصطناعي (ACSF-أنظر الجدول 1) والمكان الى 37 درجة C حمام مائي. Liberase TM هي مزيج من الأنزيمات المحللة ?...

<ol>
	<li>Ohgaki, H., Kleihues, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+etiology+of+gliomas.">Epidemiology and etiology of gliomas.</a> Acta Neuropathol. 109, 93 (2005).</li><li>Huse, J. T., Holland, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+brain+cancer:+advances+in+the+molecular+pathology+of+malignant+glioma.">Targeting brain cancer: advances in the molecular pathology of malignant glioma.</a> 10, 319 (2010).</li><li>Wechsler-Reya, R., Scott, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+developmental+biology+of+brain+tumors.">The developmental biology of brain tumors.</a> Annu. Rev. Neurosci. 24, 385 (2001).</li><li>Singh, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+cancer+stem+cell+in+human+brain+tumors.">Identification of a cancer stem cell in human brain tumors.</a> Cancer Res. 63, 5821 (2003).</li><li>Singh, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+human+brain+tumour+initiating+cells.">Identification of human brain tumour initiating cells.</a> Nature. 432, 396 (2004).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clonal+and+population+analyses+demonstrate+that+an+EGF-responsive+mammalian+embryonic+CNS+precursor+is+a+stem+cell.">Clonal and population analyses demonstrate that an EGF-responsive mammalian embryonic CNS precursor is a stem cell.</a> Dev. Biol. 175, 1 (1996).</li><li>Tropepe, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+neural+stem+cells+proliferate+in+response+to+EGF+and+FGF+in+the+developing+mouse+telencephalon.">Distinct neural stem cells proliferate in response to EGF and FGF in the developing mouse telencephalon.</a> Dev. Biol. 208, 166 (1999).</li><li>Yin, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AC133,+a+novel+marker+for+human+hematopoietic+stem+and+progenitor+cells.">AC133, a novel marker for human hematopoietic stem and progenitor cells.</a> Blood. 90, 5002 (1997).</li><li>Yu, Y., Flint, A., Dvorin, E. L., Bischoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=AC133-2,+a+novel+isoform+of+human+AC133+stem+cell+antigen.">AC133-2, a novel isoform of human AC133 stem cell antigen.</a> J. Biol. Chem. 277, 20711 (2002).</li><li>Reya, T., Morrison, S. J., Clarke, M. F., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells,+cancer,+and+cancer+stem+cells.">Stem cells, cancer, and cancer stem cells.</a> Nature. 414, 105 (2001).</li><li>Al-Hajj, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prospective+identification+of+tumorigenic+breast+cancer+cells.">Prospective identification of tumorigenic breast cancer cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 100, 3983 (2003).</li><li>Bonnet, D., Dick, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+acute+myeloid+leukemia+is+organized+as+a+hierarchy+that+originates+from+a+primitive+hematopoietic+cell.">Human acute myeloid leukemia is organized as a hierarchy that originates from a primitive hematopoietic cell.</a> Nat. Med. 3, 730 (1997).</li><li>Matsui, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+clonogenic+multiple+myeloma+cells.">Characterization of clonogenic multiple myeloma cells.</a> Blood. 103, 2332 (2004).</li><li>Bao, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+cancer+stem+cells+through+L1CAM+suppresses+glioma+growth.">Targeting cancer stem cells through L1CAM suppresses glioma growth.</a> Cancer Res. 68, 6043 (2008).</li><li>Bao, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glioma+stem+cells+promote+radioresistance+by+preferential+activation+of+the+DNA+damage+response.">Glioma stem cells promote radioresistance by preferential activation of the DNA damage response.</a> Nature. 444, 756 (2006).</li><li>Bao, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell-like+glioma+cells+promote+tumor+angiogenesis+through+vascular+endothelial+growth+factor.">Stem cell-like glioma cells promote tumor angiogenesis through vascular endothelial growth factor.</a> Cancer Res. 66, 7843 (2006).</li><li>Beier, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temozolomide+preferentially+depletes+cancer+stem+cells+in+glioblastoma.">Temozolomide preferentially depletes cancer stem cells in glioblastoma.</a> Cancer Res. 68, 5706 (2008).</li><li>Piccirillo, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+pools+of+cancer+stem-like+cells+coexist+within+human+glioblastomas+and+display+different+tumorigenicity+and+independent+genomic+evolution.">Distinct pools of cancer stem-like cells coexist within human glioblastomas and display different tumorigenicity and independent genomic evolution.</a> Oncogene. 28, 1807 (2009).</li><li>Piccirillo, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=morphogenetic+proteins+inhibit+the+tumorigenic+potential+of+human+brain+tumour-initiating+cells.">morphogenetic proteins inhibit the tumorigenic potential of human brain tumour-initiating cells.</a> Nature. 444, 761 (2006).</li><li>Rich, J. N., Bao, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemotherapy+and+cancer+stem+cells.">Chemotherapy and cancer stem cells.</a> Cell Stem Cell. 1, 353 (2007).</li><li>Lapidot, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+cell+initiating+human+acute+myeloid+leukaemia+after+transplantation+into+SCID+mice.">A cell initiating human acute myeloid leukaemia after transplantation into SCID mice.</a> Nature. 367, 645 (1994).</li><li>Reya, T., Morrison, S. J., Clarke, M. F., Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells,+cancer,+and+cancer+stem+cells.">Stem cells, cancer, and cancer stem cells.</a> Nature. 414, 105 (2001).</li><li>Fuchs, E., Segre, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells:+a+new+lease+on+life.">Stem cells: a new lease on life.</a> Cell. 100, 143 (2000).</li><li>Weissman, I. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cells:+units+of+development,+units+of+regeneration,+and+units+in+evolution.">Stem cells: units of development, units of regeneration, and units in evolution.</a> Cell. 100, 157 (2000).</li><li>Reynolds, B. A., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+neurons+and+astrocytes+from+isolated+cells+of+the+adult+mammalian+central+nervous+system.">Generation of neurons and astrocytes from isolated cells of the adult mammalian central nervous system.</a> Science. 255, 1707 (1992).</li><li>Reynolds, B. A., Tetzlaff, W., Weiss, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+multipotent+EGF-responsive+striatal+embryonic+progenitor+cell+produces+neurons+and+astrocytes.">A multipotent EGF-responsive striatal embryonic progenitor cell produces neurons and astrocytes.</a> J. Neurosci. 12, 4565 (1992).</li><li>Hulett, H. R., Bonner, W. A., Barrett, J., Herzenberg, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+sorting:+automated+separation+of+mammalian+cells+as+a+function+of+intracellular+fluorescence.">Cell sorting: automated separation of mammalian cells as a function of intracellular fluorescence.</a> Science. 166, 747 (1969).</li><li>Kohler, G., Milstein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+cultures+of+fused+cells+secreting+antibody+of+predefined+specificity.">Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity.</a> Nature. 256, 495 (1975).</li><li>Barrett, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-renewal+does+not+predict+tumor+growth+potential+in+mouse+models+of+high-grade+glioma.">Self-renewal does not predict tumor growth potential in mouse models of high-grade glioma.</a> Cancer Cell. 21, 11 (2012).</li><li>Venugopal, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bmi1+marks+intermediate+precursors+during+differentiation+of+human+brain+tumor+initiating+cells.">Bmi1 marks intermediate precursors during differentiation of human brain tumor initiating cells.</a> Stem Cell Res. 8, 141 (2012).</li><li>Gerlinger, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intratumor+heterogeneity+and+branched+evolution+revealed+by+multiregion+sequencing.">Intratumor heterogeneity and branched evolution revealed by multiregion sequencing.</a> N. Engl. J. Med. 366, 883 (2012).</li><li>Gilbertson, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medulloblastoma:+signalling+a+change+in+treatment.">Medulloblastoma: signalling a change in treatment.</a> Lancet. Oncol. 5, 209 (2004).</li><li>Zhu, Y., Parada, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+and+genetic+basis+of+neurological+tumours.">The molecular and genetic basis of neurological tumours.</a> Nat. Rev. Cancer. 2, 616 (2002).</li><li>Maher, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant+glioma:+genetics+and+biology+of+a+grave+matter.">Malignant glioma: genetics and biology of a grave matter.</a> Genes Dev. 15, 1311 (2001).</li><li>Blake, W. J., KAErn, M., Cantor, C. R., Collins, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noise+in+eukaryotic+gene+expression.">Noise in eukaryotic gene expression.</a> Nature. 422, 633 (2003).</li><li>Elowitz, M. B., Levine, A. J., Siggia, E. D., Swain, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stochastic+gene+expression+in+a+single+cell.">Stochastic gene expression in a single cell.</a> Science. 297, 1183 (2002).</li><li>Maheshri, N., O'Shea, E. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Living+with+noisy+genes:+how+cells+function+reliably+with+inherent+variability+in+gene+expression.">Living with noisy genes: how cells function reliably with inherent variability in gene expression.</a> Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 36, 413 (2007).</li><li>Raj, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stochastic+mRNA+synthesis+in+mammalian+cells.">Stochastic mRNA synthesis in mammalian cells.</a> PLoS Biol. 4, e309 (2006).</li><li>Ross, I. L., Browne, C. M., Hume, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcription+of+individual+genes+in+eukaryotic+cells+occurs+randomly+and+infrequently.">Transcription of individual genes in eukaryotic cells occurs randomly and infrequently.</a> Immunol. Cell Biol. 72, 177 (1994).</li><li>Kubista, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+real-time+polymerase+chain+reaction.">The real-time polymerase chain reaction.</a> Mol. Aspects Med. 27, 95 (2006).</li><li>Nolan, T., Hands, R. E., Bustin, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+mRNA+using+real-time+RT-PCR.">Quantification of mRNA using real-time RT-PCR.</a> Nat. Protoc. 1, 1559 (2006).</li></ol>

الخلايا الجذعية السرطانية فرضية 10، على أساس العمل في سرطان الدم 21، 11 و سرطان الثدي سرطان الدماغ 4،5، تشير إلى أن نسبة صغيرة فقط من الخلايا نسبيا في الورم، ووصف الخلايا الجذعية السرطانية، تمتلك القدرة على الانتشار على نطاق واسع والنفس التجديد. معظم ا?...

أورام المخ هي من بين السرطانات الأكثر عدوانية وغير المتجانسة المعروف لدى البشر. على الرغم من أن تم تسهيل الكشف والتشخيص في وقت سابق عن طريق التكنولوجيا الحديثة العصبية التصوير، ونحن لا تزال تفتقر إلى العلاجات العلاجية لعلاج أورام المخ كثيرة، ولا سيما لتلك، ونشر الغازية أو تلك التي تقع في عمق الدماغ. أورام المخ تمثل السبب الرئيسي للوفيات السرطان في الأطفال نظرا لطبيعتها العدوانية للغاية وغير قابل للشفاء كثير من الأحيان. ورم أرومي دبقي (GBM)، والأكثر شيوعا ورم في المخ الأولية في البالغين، هي واحدة من السرطانات الأكثر عدوانية الإنسان، يخشى على التكهن به بشكل موحد قاتلة 1. هذا الورم الخبيث للغاية نجمي (WHO الصف 4) يحدث عادة في البالغين نصفي الكرة المخية، ويمكن أن يحدث أيضا عند الأطفال الصغار والرضع. نموها السريع وغير الارتشاحي، وميزات المرضية التشخيص وتشمل تعدد الأشكال النووية، وانتشار الاوعية الدموية الدقيقة، ونخر 2،3. لأدولTS مع GBM تشخيصها حديثا، ونادرا ما يمتد بقاء متوسط ​​أكثر من 12 شهرا 1، مع استجابات الفقراء عموما لجميع الطرائق العلاجية. لاحظنا أن هناك العديد من أوجه التشابه الوظيفية والوراثية المشتركة من قبل الخلايا الجذعية الجسدية والخلايا السرطانية، والتي غالبا ما dysregulated المسارات الجزيئية التي تنظم نمو الدماغ الطبيعي في السرطان. في تطبيق نماذج بيولوجيا الخلايا الجذعية لدراسة أورام المخ، كنا أول من الباحثين تحديد مستقبلي وتنقية جزء من السكان من الخلايا من GBMS الإنسان التي عرضت خصائص الخلايا الجذعية من، انتشار التجديد الذاتي، والتمايز في المختبر 4 و في فيفو 5. طبقنا شروط الثقافة والمقايسات المستخدمة في الأصل لوصف العادي الخلايا الجذعية العصبية (NSCs) 6،7 في المختبر لعدة أورام الدماغ لدى الأطفال والكبار، وإثراء لهذه الخلايا الجذعية مثل الفرز من قبل الخلية للعلامة السلف سطح الخلية العصبية CD133 8 ،9. وCD133 + ورم في المخ جزء الواردة الخلايا التي كان لها تردد أعلى بكثير من بدء الورم من الكسر-CD133-SCID في NOD الماوس العقول 5،10. هذه المنشأة رسميا أن مجموعة فرعية فقط من الخلايا النادرة ورم في المخ مع خصائص الخلايا الجذعية هي ورم الشروع، مما اكسبها اسم &quot;خلايا ورم في المخ بدء&quot; أو &quot;BTICs&quot;. تحديد رواية BTICs يقدم رؤى جديدة في تكون الأورام الدماغ البشري، وإعطاء دعم قوي للخلية الجذعية السرطانية فرضية 10-13 كأساس لكثير من الأورام الصلبة، ويحدد هدفا لمزيد من رواية الخلوية علاجات السرطان فعالة 14-20. العلاجات التي تركز على الجزء الأكبر من قتل الورم قد يغيب عن الجذعية نادرة مثل الكسر، والسماح للورم أن تستمر في النمو. العلاجات التي تركز على قتل الخلايا الجذعية السرطانية قد توفر أفضل العلاج والتشخيص للمرضى المصابين بأورام الدماغ. من أجل دراسة السكان BTIC، قد حسنت نحن لدينا cultuإعادة البروتوكولات لتحديد على وجه التحديد بالنسبة للسكان داخل الخلية البشرية أورام المخ التي تمتلك خصائص الخلايا الجذعية. مصل خالية، الخلايا الجذعية العصبية (NSC) متوسطة يسمح للحفاظ على حالة الخلايا الجذعية غير المتمايزة، وإضافة عامل نمو الخلايا الليفية الأساسية (bFGF)، عامل نمو البشرة (EGF)، وعامل مثبط اللوكيميا (LIF) يسمح لل انتشار قوة متعددة، وتجديد الذات، وقابلة للتوسيع tumorspheres الإنسان. هنا، نحن تصف أساليب المشاركة في معالجة أورام الدماغ الأولية والمتوسطة في زراعة لهم NSC لإثراء للسكان BTIC. لقد دعا نظامنا نموذج تجريبي &quot;عزلة المريض BTIC&quot; للتأكيد على حقيقة أن الحد الأدنى فقط مثقف هذه الخلايا الجذعية تحت خلية لتحديد الظروف للسكان الخلايا الجذعية. يوصف أيضا immunolabelling اللاحقة للسكان BTIC لمفتاح علامات الخلايا الجذعية مثل CD133 CD15 وتحليل وتدفق الخلوي. ثم نناقش تحليل تخفيف الحد،الذي يساعد في دراسة إمكانية تجديد الذاتي BTICs. وأخيرا، فإننا استكشاف تحليل التعبير الجيني من هذه الخلايا النادرة عن طريق الفرز الخلايا واحدة على الشرائح AmpliGrid وأداء خلية واحدة RT-PCR. هذه التقنيات تنطبق أيضا على أورام المخ الأخرى مثل بطاني عصبي، والاورام الدبقية نخاعي للأطفال.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td></tr><tr><td> 01:01 DMEM: F12 </td><td> إينفيتروجن </td><td> 11320-082 </td></tr><tr><td> N2 الملحق </td><td> إينفيتروجن </td><td> 17502-048 </td></tr><tr><td> 1M HEPES </td><td> Wisent </td><td> 330-050-EL </td></tr><tr><td> جلوكوز </td><td> إينفيتروجن </td><td> 15023-021 </td></tr><tr><td> N-أسيتيل </td><td> سيغما الدريتش </td><td> A9165-25G </td></tr><tr><td> -1 العصبية بقاء عامل (NSF-1) </td><td> Lonza Clonetics </td><td> CC-4323 </td></tr><tr><td> عامل نمو البشرة (EGF) </td><td> سيغما الدريتش </td><td> E9644 </td></tr><tr><td> عامل نمو الخلايا الليفية الأساسية (bFGF) </td><td> إينفيتروجن </td><td> PHG0261 </td></tr><tr><td> عامل مثبط اللوكيميا (LIF) </td><td> ميليبور </td><td> LIF1010 </td></tr><tr><td> المضادات الحيوية / الفطرية </td><td> Wisent </td><td> 450-115-EL </td></tr><tr><td> Liberase TM </td><td> روش </td><td> 05 401 119 001 </td></tr><tr><td> كلوريد الأمونيوم الحل </td><td> وقف تقنيات الخليوي </td><td> 07850 </td></tr></tbody></table>

processing of primary brain tumor tissue for stem cell assays and flow sorting

وتتألف عادة من خلايا أورام المخ المختلفة التي تعبر عن شكليا مجموعة متنوعة من علامات النسب العصبية. سوى جزء صغير نسبيا من الخلايا في الورم مع خصائص الخلايا الجذعية، ووصف الخلايا السرطانية الدماغ بدء (BTICs)، تمتلك القدرة على التفريق على طول الأنساب متعددة، صاحبة تجديد، والشروع في الأورام في الجسم الحي. طبقنا شروط الثقافة في الأصل تستخدم لطبيعية الخلايا الجذعية العصبية (NSCs) لمجموعة متنوعة من الأورام الدماغ البشري، ووجدت أن هذه الطريقة الثقافة يختار خصيصا لالجذعية مثل السكان. مصل خالية المتوسطة (NSC) يسمح للحفاظ على حالة الخلايا الجذعية غير المتمايزة، وإضافة bFGF وEGF يسمح لانتشار قوة متعددة، وتجديد الذات، وقابلة للتوسيع tumorspheres. لمزيد من تميز كل السكان الورم BTIC، نقيم علامات سطح الخلية بواسطة التدفق الخلوي. ونحن قد ترتب أيضا السكان من الاهتمام لcharacteriz أكثر تحديداأوجه. يتم تنفيذ الذاتي تجديد المقايسات على BTICs واحد مصنفة في 96 لوحات جيدة، وتشكيل tumorspheres بعد الحضانة عند 37 درجة مئوية يدل على وجود ساق أو خلية السلف. ويمكن أيضا أعداد الخلايا متعددة من السكان خاصة في الآبار يمكن فرز مختلفة للحد من تحليل التخفيف، لتحليل الذاتي تجديد القدرات. يمكننا أيضا دراسة التعبير الجيني الفرق بين السكان خلية معينة باستخدام خلية واحدة RT-PCR. البروتوكولات التالية تصف إجراءاتنا لتفارق وزراعة العينات الأولية لتخصيب الإنسان للسكان BTIC، فضلا عن تفكك tumorspheres. كما تشمل بروتوكولات لتلطيخ للتحليل التدفق الخلوي أو الفرز، المقايسات الذاتي تجديد، وخلية واحدة RT-PCR.

Watch this Scientific Journal Video about Processing of Primary Brain Tumor Tissue for Stem Cell Assays and Flow Sorting at JoVE.com

Processing of Primary Brain Tumor Tissue for Stem Cell Assays and Flow Sorting

تحديد خلايا ورم في المخ بدء (BTICs)، وخلايا نادرة داخل الورم غير متجانسة تمتلك خصائص الخلايا الجذعية، ويقدم رؤى جديدة في الدماغ البشري المرضية الورم. صقلنا ظروف محددة لإثراء الثقافة لBTICs، والتي نستخدمها بشكل روتيني التدفق الخلوي لإثراء هؤلاء السكان. يمكن في وقت لاحق الذاتي تجديد المقايسات وتحليل نص واحد بواسطة PCR-RT الخلية سيتم تنفيذها على هذه الخلايا المعزولة.

تجهيز الدماغ الأولية للفحوصات الأنسجة السرطانية والخلايا الجذعية تدفق الفرز

Brain tumors are typically comprised of morphologically diverse cells that express a variety of neural lineage markers. Only a relatively small fraction ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Preparation of Myeloid Derived Suppressor Cells (MDSC) from Naive and Pancreatic Tumor-bearing Mice using Flow Cytometry and Automated Magnetic Activated Cell Sorting (AutoMACS)

Preparation of Myeloid Derived Suppressor Cells MDSC from Naive and Pancreatic Tumor-bearing Mice using Flow Cytometry and Automated Magnetic Activated Cell Sorting AutoMACS

إعداد الخلايا متعلق بالنخاع الشوكي المكثف المشتقة (MDSC) من الفئران الحاملة للورم ساذجة والبنكرياس باستخدام التدفق الخلوي والفرز الآلي المغناطيسي خلية المنشط (AutoMACS)

MDSC are a heterogeneous population of immature macrophages, dendritic cells and granulocytes that accumulate in lymphoid organs in pathological ...

Isolation of Cardiomyocyte Nuclei from Post-mortem Tissue

العزلة نوى Cardiomyocyte من الأنسجة بعد الوفاة

Identification of cardiomyocyte nuclei has been challenging in tissue sections as most strategies rely only on cytoplasmic marker proteins1. Rare events ...

Isolation, Characterization and Comparative Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells Derived from Permanent Teeth by Using Two Different Methods

العزلة، وتوصيف المقارن التمييز بين الخلايا الجذعية البشرية الأسنان اللب المستمدة من الأسنان الدائمة باستخدام طريقتين مختلفتين

Developing wisdom teeth are easy-accessible source of stem cells during the adulthood which could be obtained by routine orthodontic treatments. Human ...

Processing of Human Reduction Mammoplasty and Mastectomy Tissues for Cell Culture

تجهيز رأب الثدي لحد من استئصال الثدي والأنسجة البشرية للثقافة الخليوي

Experimental  examination of normal human mammary epithelial cell (HMEC) behavior, and how  normal cells acquire abnormal properties, can be facilitated ...

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

زراعة الخلايا المشتقة المريض وعزل CD133<sup&gt; +</sup&gt; خلايا الجذعية السرطانية المزعومين من الميلانوما

Despite improved treatments options for melanoma available today, patients with advanced malignant melanoma still have a poor prognosis for ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

رواية عالية الدقة<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; تقنية التصوير لدراسة الاستجابة الديناميكية للمنشآت داخل القحف لنمو الورم والتداوي

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

Adaptation of Semiautomated Circulating Tumor Cell (CTC) Assays for Clinical and Preclinical Research Applications

Adaptation of Semiautomated Circulating Tumor Cell CTC Assays for Clinical and Preclinical Research Applications

التكيف من Semiautomated اعارة ورم الخلية (CTC) فحوصات للتطبيقات السريرية وقبل السريرية البحوث

The majority of cancer-related deaths occur subsequent to the development of metastatic disease. This highly lethal disease stage is associated with the ...

Evaluation of Stem Cell Properties in Human Ovarian Carcinoma Cells Using Multi and Single Cell-based Spheres Assays

تقييم خصائص الخلايا الجذعية في الإنسان خلايا سرطان المبيض عن طريق متعدد واحدة على أساس خلية المجالات فحوصات

Years of research indicates that ovarian cancers harbor a heterogeneous mixture of cells including a subpopulation of so-called &#8220;cancer stem ...

Primary Tumor and MEF Cell Isolation to Study Lung Metastasis

ورم الابتدائي وMEF عزل الخلايا لدراسة الرئة الانبثاث

In breast tumorigenesis, the metastatic stage of the disease poses the greatest threat to the affected individual. Normal breast cells with altered ...

In Vitro Assays to Assess Blood-brain Barrier Mesh-like Vessel Formation and Disruption

In Vitro Assays to Assess Blood-brain Barrier Mesh-like Vessel Formation and Disruption

في مقايسات المختبر لتقييم الحاجز الدموي الدماغي تشبه تشكيل سفينة وتشوه

Blood-brain barrier (BBB) coverage plays a central role in the homeostasis of the central nervous system (CNS). The BBB is dynamically maintained by ...